一、实验目的和基本要求 重结晶是纯化精制固体有机化合物的手段。 通过实验让学生能熟练掌握用水、有机溶剂及混合溶剂重结晶纯化固体有机物质的各项具体的操作方法，其中包括以下几点：（1）样品的溶解，突出用易燃的有机溶剂时溶解样品应采用仪器装置及安会注意事项。（2）过滤及热过滤；菊花滤纸的折法。（3）结晶及用活性炭脱色。（4）抽滤：布氏漏斗、抽滤瓶、安全瓶、循环水泵等的安装及使用。（5）产品的干燥，包括风干（自然晾干）和烘干（使用烘箱、红外干燥）时仪器的使用及注意事项。二、基本原理 固体有机物在溶剂中的溶解度与温度有密切关系。一般是温度升高,溶解度增大。利用溶剂对被提纯物质及杂质的溶解度不同，可以使被提纯物质从过饱和溶液中析出，而让杂质全部或大部分仍留在溶液中，或者相反，从而达到分离、提纯之目的。三、操作要点及说明重结晶提纯法的一般过程为：1、选择适宜的溶剂 在选择溶剂时应根据“相似相溶”的一般原理。溶质往往溶于结构与其相似的溶剂中。还可查阅有关的文献和手册，了解某化合物在各种溶剂中不同温度的溶解度。也可通过实验来确定化合物的溶解度。即可取少量的重结晶物质在试管中，加入

一、 超低温冰柜（以下简称“冰柜”）为服务于科研工作的共享资源，用与保存用于科研目的的生物材料、科研材料和试剂材料（以下简称“标本”）。为更好的共用此资源，特制定本管理办法。二、 本管理办法具有强制力，标本拥有人及存放人必须全部且完整遵守本办法。中心实验室拥有本办法的最终解释权。三、 冰柜冷冻温度设定在-70℃。四、 标本内不得含有放射性、挥发性和（或）传染性成分。五、 存放人应将背面表格用正楷逐项填写，不清楚项目应当面询问，不得有空填或漏填。六、 存放标本的包装盒由标本拥有人或存放人自备，外观应为方形，禁止使用不规则包装盒。包装盒外应书写：标本拥有人姓名、科室、编号、存放起始日期。七、 包装盒材质应为铝质、不锈钢或耐低温的硬质塑料。禁止使用纸盒、橡胶器皿、玻璃器皿以及软质塑料袋。八、 登记存放日期自起始存放日期计算，最长不得超过一年。存放人应在存放物品存放截至日期到达之前十日以上，书面通知中心实验室是否继续存放，并办理有关手续。九、 存放截至日期到达后，未办理相关手续，中心实验室有权将标本废弃。并且不承担由此产生的法律责任。十、 冰柜发生故障时，中心实验室有义务及时通知标本存放人或拥

在所有RNA实验中，最 关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛 存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。RNA酶可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等。外源性的RNA酶存在 于操作人员的手汗 、唾液等，也可存在于灰尘中。在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成污染。这些外源性的RNA酶可污染 器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。而各种组织和细胞中则含有大量内源性的RNA酶。一、防止RNA酶污染 的措施1.所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2.塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。3.有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水 冲洗，乙醇干燥，再

正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有： 一、自噬诱导剂 (1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模拟内质网应激 (2) Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Chloride（氯化锂）：IMPase 抑制剂（即Inositol monophosphatase，肌醇单磷酸酶） (3) Earle's平衡盐溶液：制造饥饿 (4) N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：Class I PI3K Pathway抑制剂 (5) Rapamycin：mTOR抑制剂 (6) Xestospongin B/C：IP3R阻滞剂 二、自噬抑制剂 (1) 3-Methyladenine（3-MA）：（Class III PI3K） hVps34 抑制剂 (2) Bafilomycin A1：质子泵抑制剂 (3) Hydroxychloroquine（羟氯喹）：Lysosomal lumen alkal

佚名 结肠小袋纤毛虫（Balantidium coli Malmsten，1857）是人体最大的寄生原虫。寄生于人的大肠中，可侵犯宿主的肠壁组织引起结肠小袋纤毛虫痢疾（balantidial dysentery）。猪是重要的保虫宿主。本病流行于热带和亚热带地区，我国山西、河南和山东以南各地均有散发的病例报告。 形态与生活史 本虫生活史中有滋养体和包囊二个时期。滋养体呈椭圆形，无色透明或淡灰略带绿色，大小为30～150×25～120µm。全身披有纤毛，可借纤毛的摆动迅速旋转前进。虫体极易变形，前端有一凹陷的胞口，下接漏斗状胞咽，颗粒食物借胞口纤毛的运动进入虫体。胞质内含食物泡，消化后的残渣经胞经胞肛排出体外。虫体中、后部各有一伸缩泡（contractile vacuole）用以调节渗透压。苏木素染色后可见一个肾形的大核和一个圆形的小核，后者位于前者的凹陷处。包囊圆形，直径为40～60µm，淡黄或淡绿色，囊壁厚而透明，染色后可见胞核。 包囊随污染的食物、饮水经口感染宿主，在

1、 首先安装 BL-420F 系统应用软件，安装完成后，驱动程序被复制到硬盘上，注意，你在光盘上是找不到驱动程序的。 安装应用软件后设备驱动程序在硬盘上的位置 2、 如果是原来已经安装驱动程序，但是驱动程序安装有问题，此时你需要更新驱动程序，更新的方法是：在「我的电脑」上单击右键弹出快捷菜单，选择属性，将弹出系统属性对话框，参见下图。 系统属性对话框 3、 在「系统属性」对话框中选择顶部的「硬件」栏，然后单击「设备管理器」按钮弹出「设备管理器」对话框，在这个对话框中选择有问题的 USB 驱动程序（通常有一个黄色的感叹号），然后选择工具栏中的「更新驱动程序」按钮，系统自动启动硬件安装向导。 设备管理器对话框 4、 如果你第一次接入硬件，系统也会自动弹出硬件安装向导，根据硬件安装向导，并且按照下面图形的选择提示，就可以一步一步地正确安装完你的驱动程序。 找到新的硬件向导 选择指定位置安装 指定驱动程序的位置 选择「仍然继续」安装驱动程序 正确安装 BL-420 系统驱动程序后设备管理器显示驱动程序名称 注意：

[原理]细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在，其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核中，核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在 0.14mol /L 氯化钠溶液中的溶解度相差很大，核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度，脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后，用 0.14mol /L 氯化钠溶液抽提，可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠，可抑制脱氧核糖核酸酶对DNA 的水解作用。SDS( 十二烷基硫酸钠 ) 能使脱氧核糖核蛋白产生解聚作用，在含有脱氧核糖核蛋白的溶液中加入SDS ，DNA 即与蛋白质分离开，用氯仿将蛋白质沉淀除去，而DNA 溶解于水相，最后用冷乙醇将 DNA 析出，而获得纯化的DNA 。在氯仿中加入少量异戊醇能减少操作过程泡沫的产生，并有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白，下层有机溶剂相维持稳定。DNA 和 RNA 在波长260nm 处有很高的吸收峰值，蛋白质则在 280nm 处有很高的吸收峰值。利用这个原理，我们测定纯化样品在 260nm 和 280nm 处的吸光度，可以推算出样品中 DNA 的浓度，并判断其纯度。用标准样品测得在波长260nm 处

【摘要】目的探讨嵌合抗CD20抗体Fab’片段的抗肿瘤机制。方法应用MTT法检测Fab’片段对Raji细胞生长的抑制作用，用Annexin V-FITC和PI测定Fab’片段对Raji细胞凋亡的诱导作用，用RT-PCR和Western blot检测Raji细胞中bcl-2表达的变化。结果嵌合抗CD20Fab’片段对Raji细胞具有明显的抑制作用IC50值为24.2 µg/ml，并呈剂量依赖性；嵌合抗CD20Fab’片段能诱导Raji细胞的凋亡，并降低Raji细胞中bcl-2基因及其蛋白的表达水平。结论嵌合抗CD20抗体片段Fab’能抑制Raji细胞生长和诱导细胞凋亡，其作用机制与bcl-2蛋白表达的下降有关。【关键词】抗CD20抗体 B淋巴瘤 Bcl-2【中图分类号】R318 R733CD20对B淋巴细胞的分化增殖具有调节作用[ 1 ] 。CD20是治疗B淋巴细胞瘤的理想靶点。CD20在前B细胞及成熟B细胞中有表达，而浆细胞、造血干细胞及T细胞则无CD20的表达；CD20比较暴露不为其它表面分子所掩盖，易与抗体结合；CD20和抗CD20抗体结合后不发生内吞作用，因而细胞表面CD20数量

Complement receptor, CR概念： 细胞膜上存在的能与补体活性分子相结合的糖蛋白。 （一）CR1（CD35） 分布：表达于许多类型细胞表面（红细胞、粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等）配体：C3b、C4b（C3bR/C4bR) 主要生物学功能： 1. 结合C3b和C4b抑制补体激活，协助I因子裂解C3b和C4b； 2. 调理作用：粒细胞、巨噬细胞 3. 促进免疫复合物清除：红细胞à肝脏 4. 免疫调节：出现在B细胞发育的早期阶段，促进B细胞的分化 （二）CR2（CD21） 分布：主要表达在B细胞、鼻咽部上皮细胞配体：iC3b、C3dg、C3d主要生物学功能： 1. 免疫调节作用： 调节B细胞增殖、分化、记忆和抗体的产生2. 作为EB病毒受体：与某些疾病相关 传染性单核细胞增多症 非洲儿童淋巴瘤（即Burkitt淋巴瘤） 鼻咽癌 EB病毒：Epstein-Barr virus（EBV），人类疱疹病毒 发现：Epstein和Barr（1964年） 发现于Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞3.致病性：在人群中广泛感染， （1）我国3～5岁

1、工作环境酶标仪是一种精密的光学仪器，因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。a.仪器应放置在无强磁场和干扰电压的位置。b.仪器应放置在噪音低于40分贝的环境下。c.为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。d.操作环境温度应在15℃~40℃之间，环境湿度在15%~85%之间。e.操作时电压应保持稳定。f.操作环境空气清洁，避免水汽、烟尘。g.保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。2、操作注意事项a.使用移液器加液，移液枪头不能混用。b.洗板要干净，避免交叉污染。c.严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。d.请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成注意做好清洁工作。e.不要在测量过程中关闭电源。f.对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。g.使用后盖好防尘罩。出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。3、阈值可疑范围的设定一般酶标仪阈值矩阵设定可设定阴性、可疑、阳性3个范围。有经验表明可疑范围的设定要设定为临界上下15%（也称灰色区）为宜；同时阴性范围下限和阳性范围应该充分考虑到影响EL

佚名 卫氏并殖吸虫，又称卫氏肺吸虫，其成虫寄生于宿主肺内，引起肺吸虫病(paragonimiasis)。人的感染多因生食含囊蚴的溪蟹、喇蛄所致。本病分布广泛，我国有23个省、区有本病流行。 一、形态 1. 成虫 Paragonimus westermani. showing the finely branched vitelline g

一、原理与意义免疫荧光组织（细胞）化学染色方法——补体法，是一种荧光抗体染色法。本法之荧光抗体不受免疫血清的动物种属的限制，因而一种荧光抗体可作更广泛的应用，敏感性亦较间接法高，效价低的免疫血清亦可应用，节省免疫血清，尤其是对检查形态小的如立克氏体、病毒颗粒等或浓度较低的抗原物质时甚为理想。二、操作指南1、材料（1）免疫血清60℃灭活20min，用Kolmers盐水作2倍稀释成1：2，1：4，1：8……。补体用1：10稀释的新鲜豚鼠血清，抗补体荧光抗体等，按下述的补体法染色。免疫血清补体结合的效价，如为1：32则免疫血清应作1：8稀释。（2）补体用新鲜豚鼠血清一般作1：10稀释或按补体结合反应试管法所测定的结果，按2单位的比例，用Kolmers盐水稀释备用。Kolmers盐水配法：即在pH7.4、0.1mol/L的磷酸缓冲盐水中，溶解MgSO4的含量为0.01%浓度。（3）抗补体荧光抗体：在免疫血清效价为1：4，补体为2单位的条件下，用补体染色法测定免疫豚鼠球蛋白荧光抗体的染色效价，然后按染色效价1：4的浓度用Kolmers盐水稀释备用。2、操作步骤（1）涂片或切片固定。（2）吸取经适

摘要：本文就NMR与化学应用有密切关系的若干前沿新进展进行述评，内容包括NMR灵敏度的超增强，固体或表面化学反应的NMR跟踪以及简单分子体系中的超常NMR信号。这些方面分别涉及到NMR谱学技术的发展，新的应用领域的开拓及新的实验现象的阐明。1995年是凝聚态核磁共振（NMR）发现50周年。NMR半个世纪的发展历史，向世人雄辩地证明了NMR在当代科学研究中不可替代的重要地位。NMR之所以能在当代科学中特别是在材料科学中的许多重要方面不断地作出新的贡献，是因为NMR具有极其强大的生命力。在以往的半个世纪中，每隔一段不长的时期，就能看到NMR发展中的一次飞跃。1945年NMR信号在凝聚态物质中的发现，开创了NMR这一崭新的学科。1948年核磁弛豫理论的建立，1950年化学位移和耦合的发现，为NMR的化学应用奠定了基础。1965年傅里叶变换谱学的诞生，将NMR实验的信噪比提高了数个量级，迎来了NMR的真正的繁荣期。自从70年代以来，NMR发展异常迅猛，形成了液体高分辨、固体高分辨和NMR成象三雄鼎立的新局面。二维NMR的发展，使液体NMR的应用迅速扩展到了生物领域；交叉极化技术的发展，使50年

1.培养细胞：取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80%~90%汇合单层培养细胞。2.加秋水仙素：使用最终浓度为0.02~0.8微克/毫升营养液，温箱继续培养6~10小时；或用低温封闭法：把培养细胞置于4℃条件下6~12小时后，再于37℃温箱继续培养6~10小时处理（加秋水仙素）。3.采集分裂细胞：可利用分裂中期细胞体变圆与底物附着不牢特点，此时手持培养瓶，左右反复横向水平摇动，令培养液在培养细胞表面反复冲刷。应用此法可使90%的中期分裂细胞从瓶壁脱落，注意勿用力过猛，以防多量非分裂细胞脱落影响观察。4.离心：收集培养液，1000转/分钟离心5~10分钟。5.低渗处理：吸除上清液、加入预温至37℃的0.075M KCl溶液，在温箱中静置20~30分钟。6.预固定：向悬液中加新鲜1:3醋酸、甲醇固定液1ml，用吸管吹打调匀，此措施能起到先使细胞表面轻微固定，可防止固定后细胞粘连成块。7.固定：离心，同4，吸除上清液，加新鲜固定剂5~10ml；加固定剂时要用一手微斜持离心管，另手用吸管吸取固定剂，把固定剂逐滴滴在离心管壁上，使之慢慢流入离心管中，然后轻轻吹打均匀，置15~20分钟。8.重复

氧电极法测定光合速率原理叶片在含有CO-2或HCO-3的溶液中，光下能发生放氧反应，溶液中含氧量的变化可用氧电极测定。用极谱氧电极测定叶片光合放氧，取叶样少，反应快速，所用仪器也不复杂，操作手续简单，测定条件易于保持恒定，并可在记录仪上观察变化过程。由于测定的叶片是在水溶液中，有充足的水分供应，气孔在这种条件下通常是张开的，这就免除了气孔变化干扰。当欲测试一些药物对光合作用的影响时，也可直接把药物放入反应液中，处理观察非常方便。器材与试剂：器材：FS氧电极测氧装置(见附录二)，针筒、剪刀、移液管、100μl进样器、双面刀架(图9-3)、直尺等。试剂：FS测定介质0.05-0.1mol/LpH7.5左右的缓冲溶液(磷酸盐，Hepes，ris-HCl，ricine均可)，内含25mmol/L的HCO3-，仅用pH7.5的25mmol/LNaHCO3溶液也可。方法与步骤：1.植物叶片用双面刀架划取一定面积(按0.5cm2/ml反应液取样)，剪成2mm2左右的碎片，放入小烧杯，加上测定介质。真空渗入(用针筒)1-2分钟，排除叶内气体，使叶碎片下沉，(也可先真空渗入后剪切叶片)。2.把下沉叶

缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH值，正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们时蛋白质、重碳酸盐缓冲体系。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。 在生化研究工作中，常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系pH值的变化往往直接影响到我们工作的成效。如果提取酶实验体系的pH值变化或变化过大，会使酶活性下降甚至完全失活。所以我们要学会配制缓冲溶液。 由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，在生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的反应。 硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。 柠檬酸盐：柠檬酸盐离

适应性调节T 细胞--Trl 和Th3 更具有普遍意义的适应性调节T细胞，是同时分泌IL-10及TGF-p的CD4Trl细胞和主要产生TGF-早的CD4Th3细胞。细胞因子IL-10和TGF-p皆以发挥抑制作用见长，因而Trl和Th3必然具有下调免疫应答的活性。Th3通常在口服耐受和黏膜免疫中发挥作用，而I型调节性T细胞(Trl)则是近年来发现可调控炎症性自身免疫反应和抑制由Thl主宰的淋巴细胞增殖及诱导移植耐受的一类抑制性T细胞。例如，小鼠中的Trl表型为CD4+CD45RB]~w(10W指低表达)，其抑制对象为CD4+CD45RBhighT效应细胞(比gh指高表达)。在小鼠实验性肠炎中，Trl可充分阻抑疾病的发生，而且发挥作用依赖于IL-10，其靶目标为借助IFN-7发挥作用的自身免疫性CD4+CD45RBhighT细胞。 CD4+ CD45RBlow Trl细胞在自身免疫性结肠炎发病中的作用 自身反应性T细胞CD4+ CD45RBhigh 在重症免疫缺陷病(Sc记)小鼠中引发高频率的结肠炎。 同时加入CD4+ CD45RBlow 抑制性T细胞(Trl)或加

本人有大量的资料资源，有需要的朋友欢迎来交换，邮箱：1739507720@qq.com： 质粒 类别 抗性 详细信息 pGEX4T-1 大肠杆菌质粒 Amp pGEX4T-2 大肠杆菌质粒 Amp pGEX4T-3 大肠杆菌质粒 Amp pGEX-6P-1 大肠杆菌质粒 Amp pGEX-6P-2 大肠杆菌质粒 Amp PGEX-KG 大肠杆菌质粒 Amp pGEX-6p-Caspase 大肠杆菌质

1、离心机类型(1)普通离心机(2)高速离心机(3)超高速离心机①制备性超速离心机　　主要由驱动和速度控制、温度控制、真空系统和转头四部分组成。②分析性超速离心机　　分析性超速离心机使用了特殊设计的转头和检测系统，以便连续地监视物质在一个离心场的沉降过程。2、操作注意事项离心机工作时是高速运转，使用时要注意安全，必须做到以下几点：(1)离心机使用时要放置在平稳、坚固的台面上（它的底座都装有橡胶吸脚，借助于大气压力及仪器本身的重量，紧贴于台面）；大容量低速离心机和高速冷冻离心机要相应地安放在坚实的地面上，水平放置。超速离心机重达数百公斤，应放在很坚实的地面上并有防尘、防潮设备，保证离心室达到一定的真空度，正常运行。离心机工作前，应将负荷平衡，重量误差越小越好，否则会引起剧烈震动，损坏离心转头及转轴。(2)离心器分离支架必须在安置离心管后运转，严禁空架运转。离心机启动时，转速开关或G值旋钮应放在低档位，启动后再逐步调节到所需要的数值。一次工作后，须将旋纽调至低档位再次工作，在高转速挡或高G值档禁止直接启动。(3)选择合适的转头，控制转头的转速。在下述情况下要降低转头的最高转速：转头的运转时

1、引物设计 细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点： ① 典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了特异性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。 ② 选择GC含量为40％到60％或GC含量映像模板GC含量的引物。 ③ 设计5'端和中间区为G或C的引物。这会增加引物的稳定性和引物同目的序列杂交的稳定性。 ④ 避免引物对3'末端存在互补序列，这会形成引物二聚体，抑制扩增。 ⑤ 避免3'末端富含GC。设计引物时保证在最后5个核苷中含有3个A或T。 ⑥ 避免3'末端的错误配对。3'端核苷需要同模板退火以供聚合酶催化延伸。 ⑦ 避免存在可能会产生内部二级结构的序列，这会破坏引物退