颈部介于头部、胸部和上肢之间。颈部后方以颈椎为界，与项部分隔。颈部由前方的舌骨上、下肌群，外侧的胸锁乳突肌，后方（即颈椎的前方）的椎前肌和斜角肌群围成。 颈腔内容纳呼吸道和消化道的颈段及其两侧的大血管、神经和淋巴结等。颈根部还有胸膜顶及肺尖等自胸廓上口突入。这些结构间有疏松结缔组织填充，并于肌肉、器官与血管、神经周围形成筋膜和筋膜间隙。 一、境界 上界为头部的下界，即下颌骨下缘、下颌角、乳突尖。 下界为胸部和上肢的上界，即胸骨颈静脉切迹、胸锁关节、锁骨上缘和肩峰。 两侧以斜方肌前缘和脊柱颈段前方与项部分界。 二、体表标志 1．胸骨上窝　为位于颈静脉切迹上方的凹陷，常利用此窝触诊气管，以判断气管的位置是否居于正中。 2．锁骨上大窝　位于锁骨中1／3上方。窝底可触及锁骨下动脉搏动及第一肋骨。 3．胸锁乳突肌　是颈部分区的重要标志，其前、后缘明显，起始端的二头之间为锁骨上小窝。 4．颈动脉结节　即第六颈椎横突前结节。颈总动脉越过其前方。在胸锁乳突肌前缘，平

糖类从组织化学技术的角度分类与生物化学的分类并非一致。从组织化学的角度，糖类可略分为多糖、中性糖液物质和酸性粘液物质及粘蛋白和粘脂质。 多糖主指糖原，是由许多葡萄糖分子以糖苷键组成的聚合体。当机体死亡，即很快分解为葡萄糖。 一、过碘酸—Schiff氏法（简称P.A.S）操作方法： （1）石蜡切片脱蜡至水。 （2） 0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液（过碘酸再结晶应重新配制使用）。 （3）蒸馏水洗，70%酒精洗。 （4）Schiff氏液15-30分钟。（Schiff氏液从冰箱取出升至室温使用） （5）流水冲洗10分钟。 （6）苏木素浸染细胞核2-3分钟。 （7）脱水、透明、封盖。 结果：糖原呈红色，细胞核呈蓝色。 试剂 配制： （1）0. 5%过碘酸（HIO4）水溶液或70%酒精溶液。 （2）Schiff氏 试剂 。 碱性品红 1g 蒸馏 水 200ml 1N盐酸（98.3ml比重1.16盐酸，加入 蒸馏

相关专题 【目的】 观察耳蜗微音器电位和听神经动作电位的特征及关系。 【原理】 耳蜗接受声波刺激后，能象微音器那样，将声波振动的机械能转变为电能(电信号)。耳蜗的这一换能作用被称为微音器效应(microphonic effect)。转换而来的电位变化，称为微音器电位(cochlear microphonic potential,CM)，CM的波形、频率与刺激声波相符，其位相随声波位相的改变而改变，频率响应在10000Hz以上，几乎没有潜伏期，亦没有不应期，长时间刺激后，既无适应现象产生，亦不发生疲劳。在温度下降、深度麻醉、甚至动物死亡后半小时内，CM仍可出现。 将引导电极放在豚鼠内耳圆窗附近，用短声刺激，能获得CM，同时可记录到耳蜗神经动作电位，它出现于CM之后，一般可见2~3个负波(N1、N2、N3)。这些负波可 能是神经纤维的动作电位同步化结果，电位的大小能反映被兴奋的神经纤维数目的多寡。 【模拟实验操作方法】 1.豚鼠耳蜗微音器电位模拟实验窗口(图)。引导电极经豚鼠鼓室与圆窗接触，参考电极置豚鼠耳部附近

突破性的技术：在短短48小时内完成全基因组范围的实体瘤拷贝数分析，仅需80 ng起始DNA。 2013年8月5日，来自加利福尼亚Santa Clara的消息——Affymetrix公司（纳斯达克代码：AFFX）宣布将于本周在芝加哥举行的癌细胞基因组学芯片论坛(CCMC)上推出全新的OncoScan™ FFPE芯片，一种适用于高度降解的FFPE实体瘤样本的全基因组拷贝数分析方案。 尽管癌症研究人员和临床医生的需求在不断增长，但从肿瘤FFPE样本的降解DNA中获得高质量、全基因组的拷贝数信息仍然极具挑战性，因为目前的方法（如FISH、array CGH和新一代测序技术NGS）存在局限性。 全新的OncoScan FFPE芯片利用Affymetrix独特的分子倒置探针（MIP）技术，能够快速经济地分析来自FFPE样本的少量的高度降解的DNA，让实体瘤癌症分析向前迈进了一大步。 这一新产品在一次实验即可提供全基因组范围的拷贝数数据，且在全基因组内大约900个已知的癌基因、杂合性缺失（LOH）上的分辨率极高，同时可以提供临床相关的获得性突变的数据，。在分析软件方

caspase 家族 自从确定ced-3在线虫细胞凋亡中的作用以后，人们投入了大量精力分离哺乳动物同源基因。1993年，Miura等首先发现哺乳动物的白细胞介素-1p转化酶(interleuhn-1Β convertingenzyme，ICE)与ced-3同源，并证实了ICE在哺乳动物细胞凋亡中的作用。在以后的几年中，有十几种ced-3同源基因被发现。由于某些ced-3同源基因由多个实验室同时发现，因此拥有多种名称。1996年，在一次凋亡国际会议上，一致决定将这一家族命名为半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)家族，即半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶cysteinyl aspartate-specific proteinases)家族，并对其家族成员按发现顺序统一命名。 序 号 原 名 功 能 底物特异性 caspase-1 ICE

经常看到许多战友因为PCR的非特异扩增而烦恼，不如我们把我们曾经也遇到过这样问题，经过努力后得到了目的条带的成功经验一起分享。首先我先把我的消除非特异扩增的方法先贡献出来，请大家多多批评指正。PCR类型：Long PCR一、PCR体系1、酶：Pyrobest DNA Polymerase2、模板：人类基因组DNA3、引物：根据已知的DNA序列设计的引物。4、目的片段长度：约3.5K（上述四项，我个人认为应当注明，因为许多PCR可能因为这四项不同而导致PCR循环和体系调整有较大的差异，同时希望各位战友在讲自己的经验时也指出，若觉得还有其他要讲明的请也指出。）5、体系的各成分的终浓度，主要依据我选用酶的厂家所给的标准体系，并参考《分子克隆》中普通的PCR体系。二、PCR循环根据厂家提供的标准PCR循环，并参照《分子克隆》结合自己的模板和引物的各项值来设计。通常我先做梯度PCR，来摸索最佳退火温度。温度设定范围：两条引物的高Tm值+3度和低Tm值-5度之间。我认为最佳的梯度PCR电泳结果应该是1、所有的温度只出现一条带；2、低温出现多条非特异性带，随着温度升高条带逐渐减少，到某一较高的温度所

分步讲解： 1. 装吸头 移液器套柄用力下压，需要时小幅度旋转即可。 错误操作：用力敲击吸头。此方法会带来吸头损坏甚至移液器套柄磨损，从而影响其密封性。 2. 量程设定 操作之前请先选择正确的移液器，移液器可在10-100%量程范围内操作，但在10%量程处操作对于移液技巧要求高，故推荐在35-100%量程范围内操作。 量程调节：当由小量程调节至大量程时，朝所需量程方向连贯旋转，旋转到达超过所需量程1/3圈处再回调至所需量程。当由大量程调节至小量程时，直接连贯旋转至所需量程。3. 润洗 用同一样品重复吸液排液二至三次，润洗为以后每次吸液提供相同的接触面，保证操作的一致性。 注意：高温或者低温液体请不要润洗！4. 吸头浸入角度 吸液时尽量保持垂直状态，倾斜角度不能超过20°。 5. 吸头浸入深度 6. 吸头浸入时间 吸液后在液面中保持一秒钟再将吸头平缓移开，这对于大容量移液器或者吸取粘性样品尤为重要。7. 吸液速度 匀速连贯移液，控制好移液速度，太快会造成喷液，液体或者气雾冲入移液器内部，污染活

D-二聚体（简称D-D）试验是辅助诊断或排除血栓性疾病的重要指标，又是指导溶栓药物剂量应用的关键数据。D-D检测中可能出现的假阴性和假阳性的的情况临床也很常见，因此必须了解D-D结果的常见影响因素才能客观评价对血栓病辅助诊断的临床意义。有关这方面的基础理论和影响因素简述并举例如下： 1、D-D 检测的阴性患者中，但仍有极少数患者伴静脉血栓，下列原因可能会出现这样的情况： （1）血栓体积很小/远端小血栓； （2）放射线/超声检查出现假阳性；（3）临床上发生血栓病的时间过长, 血栓已机化不能降解为D-二聚体，此外与标本采集时间相隔太长也有关。例如血栓病的溶栓治疗要求在血栓发生后的6小时内进行的道理一样；因此检测时机非常重要，陈旧性血栓病人D-D结果会在正常范围内。 （4）体内纤溶活性降低, 也可能导致D-二聚体值在正常范围; 2、D-二聚体值增高的程度取决于血栓的原始大小，其基本的变化规律是： 增高→溶栓后→更高→降低(伴临床症状好转)；而持续高值表示溶栓药物剂量不足或病人对药物不敏感；而D-D正常后又开始增高，提示又有新的血栓形成。

传统的空斑实验方法测呼吸道合胞病毒的PFU值,由于其空斑形成较小,且需要借助特异性的表面融合蛋白抗体来确定,故操作繁琐,费用较高。这里介绍给大家三种简单易行的空斑形成实验操作方法： 方法一 1、以5×10e5/ml的密度接种Hep－2细胞到6孔板中，每孔加入3ml细胞悬液； 2、待细胞长成单层后（不得超过48hr），移去营养液，每孔加入400ul的PBS和100ul毒液（10倍系列稀释）； 3、37℃，5％CO2，吸附1-4h，每隔15－30分钟应摇晃板子1次以令病毒分布均匀，病毒在4h时达到最高吸附度； 4、弃去吸附液，每孔添加覆盖层3ml，少于3ml细胞不易存活。覆盖层以含5％小牛血清的2×DMEM和0.6％的琼脂糖按1：1比例混合而成，这样小牛血清的终浓度为2.5％，琼脂糖为0.3％。琼脂糖必须高压灭菌，用前以微波炉充分融解，并放置65℃水浴保温待用。2×DMEM即取1袋干粉DMEM加入500ml去离子水融解即可，其中还可加入双抗或二性霉素等，过滤除菌备用，用时37℃预热。二者应充分混合且温度不能过高（即无烫手感为止），否则会摧残细胞； 5、37℃孵育6－7天，到

在基因表达研究中，研究者比较注意选择合适的表达载体和宿主系统，而往往忽视基因本身是否与载体和宿主系统为最佳匹配这样一个实质性问题。基因的最佳化表达可以通过对基因的重新设计和合成来实现，如消除稀有密码子而利用最佳化密码子，二级结构最小化，调整GC含量等。以下就密码子最佳化、翻译终止效率和真核细胞中异源蛋白表达的问题加以说明。密码子最佳化（codon optimization） 遗传密码有64种，但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分。那些被最频繁利用的称为最佳密码子(optimal codons)，那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子(rare or low-usage codons)。实际上用做蛋白表达或生产的每种生物（包括大肠杆菌，酵母 ，哺乳动物细胞，Pichia，植物细胞和昆虫细胞）都表现出某种程度的密码子利用的差异或偏爱。大肠杆菌、酵母 、果蝇、灵长类等每种生物都有独特的8个密码子极少被利用。有趣的是，灵长类和酵母 有6个同样的利用率低的密码子。大肠杆菌、酵母 和果蝇中编码丰度高的蛋白质的基因明显避免低利用率的密码子。因此，重组蛋白的表达可能受密码子利用的影响（

据统计，大约三分之一的细胞培养物都感染了支原体！这些小东西神不知鬼不觉，侵入你的细胞。支原体大小一般在0.3-0.5um之间，最突出的结构特征是没有细胞壁，对作用于细胞壁生物合成的抗生素不敏感。研究表明，支原体能耗尽营养物，促进代谢积累，导致pH改变，对细胞造成多种影响，包括生长状况、生化特性、代谢、免疫、以及细胞存活等多方面的改变，继而干扰实验结果，或造成无法解释的差异。更加不幸的是拯救被感染的细胞几乎是不可能的。因此，就支原体污染而言，预防是第一要务。下面介绍了一些简单的预防措施，也许对你的实验有用。 首先，细胞来源支原体污染的最常见原因之一是引入的培养物已经被感染。一旦进入实验室，这些小东西会蔓延到每个角落，让你崩溃。要避免这种情况，最简单的办法就是不从其他实验室要细胞，而从供应商或菌种保藏中心购买，这些细胞经过严格检测，确保不含有支原体。如果购买有难度，或基于其他原因，不得不使用其他实验室的细胞，那么也要保持警惕，在单独的培养箱中隔离，同时进行支原体的检测。市场上有多家公司提供支原体检测试剂盒，你可自行选择。 其次，定期检测即使实验室没有新来的细胞，支原体也可能通过操作人员传递

什么是细胞培养？ 细胞培养是指从动物或植物中取出细胞，然后使其在合适的人工环境中生长。这些细胞可于培养前直接从组织中取出并采用酶或机械方法进行解离，或者也可来自已经建立的细胞系或细胞株。 原代培养 原代培养是指将细胞从组织中分离后，使其在合适的条件下增殖直到占据所有可用基质(即：达到汇合状态) 的培养阶段。在此阶段，必须将细胞转移到新的容器中并更换新鲜培养基，从而对细胞进行传代培养，为其提供更多继续生长的空间。 细胞系 首次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系或者亚克隆。来自于原代培养的细胞系寿命有限 (即：有限细胞系，见下文)，随着细胞的传代，生长能力最强的细胞会占据优势，最终导致细胞群体在基因型和表型上达到一定程度的均一性。 细胞株 如果将细胞系的一个亚群通过克隆或者其他方法从培养物中明确地选择出来，则此细胞系就成为一个细胞株。与亲代细胞系起始时相比，细胞株往往会获得其他一些遗传学改变。 有限细胞系 与连续细胞系正常细胞通常只能分裂有限的次数，随后就会丧失增殖的能力，这是一个由遗传决定的事件，被称为衰老；这种细胞系被称为有限细胞系。但是，一些细

一、原理研磨叶片得到的匀浆，经过滤、离心可制备叶绿体。叶绿体的被膜比较脆弱，分离叶绿体应在等渗的缓冲溶液中，0~4℃温度下进行。叶绿体活力会随着离体时间延长而不断下降，因此，分离工作尽可能在短时间内完成。二、仪器与用具冰箱；离心机；扭力天平；显微镜；pH计；研钵；量筒；移液管；离心管；脱脂纱布等。分离器皿都须在0℃下预冷。三、试剂1. 分离介质含0.33mol/L 山梨醇，50mmol/L Tris-HCl（或Tricine） pH7.6，5mmol/L MgCl2，10mmol/L NaCl，2mmol/L EDTA，2mmol/L 异抗坏血酸钠。配法：称60g山梨醇、6.06g Tris、1g MgCl2·6H2O、0.6g NaCl、0.77g EDTA-Na2、0.4g异抗坏血酸钠，溶解后用1mol/L HCl调pH至7.6，定容至1000ml。2. 悬浮和测定介质Ⅰ0.66mol/L 山梨醇，2mmol/L MgCl2， 2mmol/L MnCl2，4mmol/L EDTA，10mmol/L焦磷酸钠，100mmol/L Tris-HCl pH7.6。配法：称60g山梨醇、0.

小分子干扰RNA (Small interfering RNA ，siRNA ) 是一种非常有效的工具，能够在包括哺乳动物细胞在内的多个体系中抑制特定基因的表达，从而研究某个基因的功能或者是相关信息。但是这种强有力的方法的难题之一是需要设计，合成siRNA s 和验证其效果，从而找到最有效的siRNA s 。这个过程需要花费相当的时间和经费。以化学法合成基因特异的siRNA s 为例，由于设计好的siRNA s 中通常只有大约25% 的siRNA s 能高效抑制基因的表达（抑制效率>80% ），这使得化学合成siRNA 的成本升高。体外转录制备长片断RNA 并不难，但是由于研究表明长片断的双链RNA （>29bps ）在哺乳动物细胞中通常会引发抗病毒反应―― 一种非特异基因表达抑制，而目前体外转录往往无法制备小于29bp 的小分子siRNA s 。一个新的研究发现，用RNase III 降解长片断双链RNA 成为siRNA s 库也能够有效诱导特异的基因沉默，这样可以避免了筛选有效siRNA s 的漫长过程，从而快速，经济的实现特定基因表达的沉默。在线虫、果蝇和其他一些物种

相关专题 提取样品的总RNA后，一般根据RNA的凝胶电泳 图来判断RNA的质量。由于RNA容易形成二级结构，因此常用甲醛变性胶来进行RNA电泳，得到的电泳图能真实反映RNA的质量状况。 一、试剂： DEPC（Sigma公司产品），MOPs（Bocherigmer公司产品），甲酰胺（Formamide，Sigma公司产品），溴酚蓝（Bromphenol Blue，Sigma公司产品）。EDTA -Na2，氢氧化钠，醋酸钠，甲醛，甘油，分析纯，国产。 二、试剂配制： 1、DEPC 水的处理：用量筒量取去离子水 2L，在通风橱中，加入2ml DEPC到2升去离子水中，终浓度为0.1%的DEPC。迅速盖上盖子，混匀，然后放在摇床中中速摇荡至少4hr，再高压灭菌。灭菌时将瓶盖松开，15磅灭菌20min。 2、10 × FA Buffer（formaldehyde agarose buffer：200 mM的MOPs，50 mM的NaAc，10 mM的EDTA）：配制500ml，称取3.4g NaAC•3H2O放入1000

相关专题 细胞培养 板是细胞培养实验中常用和重要的耗材，主要形状有U型和V型、规格也有多重96孔、48孔，24孔，12孔，6孔等，不同的实验需要细胞培养板的规格、形状各不相同，大家是否怎么选择细胞培养板、如何使用细胞培养板、不同的细胞培养板各有什么用途呢？ 细胞培养板的选择： 细胞培养 板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型);培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。 (一)平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择： 贴壁细胞一般用平底培养板。 悬浮型细胞的培养一般用V型。 U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。 V型培养板有时用做免疫学 血凝集的实验。 不同型狀的板子自然有不同用途。平底的什麼類型的細胞都可用﹐但當細胞數目較少﹐如做克隆時﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等實驗時﹐無論貼壁和懸浮細胞﹐一般均用平底板。至於U或V型

mRNA为单股，一般会卷绕成特定的三级结构，并与某些蛋白质结合，而以messenger ribonucleoprotein particles （mRNPs） 的型式存在于细胞内；自细胞抽取RNA时，一般会以特定步骤去除蛋白质，但仍难完全破除RNA的二/三级结构。 由于进行电泳分析时，影响核酸泳动速率的因子主要包括核酸的长度与构形 （conformation），为了去除核酸构形所造成的影响，一般以电泳分析RNA时都采用变性胶体电泳；在进行这一类电泳分析时，由于RNA已经被变性 （denature），影响其泳动速率的因子主要是长度。 一旦RNA以变性胶体电泳解析好，即可进一步进行北方转印与杂合分析。在进行RNA变性胶体电泳分析时，如果所要分析的RNA比较小 （<1,000 bases），可以选用聚丙烯酰胺胶体 （polyacrylamide gel），此时所使用的变性剂 （denaturing reagent） 主要是尿素 （urea）；这个方法一般也被用来分析核酸定序反应的产物。若所欲分析的RNA 分子较大， 可采用变性洋菜胶体电泳 （agarose gel electropho

产生血小板无效性输注的原因和发病机制主要有二个方面： 一.血小板同种抗体； 二.非免疫性血小板消耗因素。 1.血小板同种抗体:血小板表面具有ABO等红细胞抗原系统HLA-Ⅰ类抗原和血小板特异性抗原系统。 ①HLA不相容：与HLA同种免疫相关的血小板输注无效性的原因是由于血小板中混杂有大量的白细胞所致。据研究，去除白细胞的纯血小板输注，不能诱导针对HLA抗原的初次免疫应答，因为血小板表面只有HLA-Ⅰ类抗原，没有HLA-Ⅱ类抗原，而针对HLA抗原的初次免疫应答，必须要有HLA-Ⅰ类抗原和HLA-Ⅱ类抗原同时参与的双信号的过程。也就是说，带有HLA-Ⅱ类抗原的白细胞，会引起受血者同种免疫反应，产生抗HLA，这些抗体如果针对输入的血小板表面的HLA抗原，抗原抗体反应会迅速破坏血小板，影响输注疗效。 ②血小板特异性抗原（HPA）不相容：因输注与受血者不相合的血小板可以产生抗血小板特异性抗体，而引起输注无效。在涉及到血小板无效性输注的病例中，不到5%的受血压计者体内产生血压计小板特异性同种抗体。 ③ ABO血型不相容：输注ABO血型不合的血小板也会影响

静脉采血岗位 针刺接种：注射器针头刺伤，特别是在采集患者血液以后的针头刺伤可能使被刺伤者发生职业暴露。采血者刺伤自己的风险较大 喷溅或泼洒污染：可能由于针头意外脱掉而发生血液喷溅，也可能由于容器倾倒而出现血液泼洒，这两种情况均可造成皮肤或粘膜污染暴露 气溶胶污染：在拔出采血针头时、在向容器内注入血液时，特别是在注入血液时发生针头脱落可形成大量的气溶胶粒子，易造成呼吸暴露 呼吸道标本采集岗位 飞沫和气溶胶污染：呼吸道标本采集，特别是拭子标本采集及气管切开部位取分泌物时，可自患者口腔或气管切开处喷出大量飞沫及气溶胶 表面污染：痰标本采集可能污染标本容器外表面 标本运送岗位 院内标本运送过程中，一般致病微生物可能通过经口、经粘膜或破损皮肤等途径导致传染的发生 泄露和泼洒污染：容器破裂可造成标本泄露污染环境和运送人员或其他人员；容器倾倒可造成标本泼洒而致环境和人员污染 容器表面污染：标本采集时或发生泄露、泼洒时可导致容器外表面污染而具有潜在危害 高致病性微生物标本运送的生物安全风险 气溶胶污染：泄露、泼洒、

根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 1、光学显微镜和倒置显微镜 ① 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 ② 染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。 2、荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜 一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。 常用的DNA特异性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三种染料与　DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。 Hoechst是与DNA特异结合的活性染料，储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。 DAPI为半通透性，用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml。 结果评判：细胞凋亡过