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北京市实验动物福利伦理审查指南

第一条 为了维护本市实验动物福利,规范实验动物伦理审查和实验动物从业人员的职业行为,根据《北京市实验动物管理条例》和国家有关法律,法规,参考国际惯例,制定本工作指南。第二条 本工作指南适用于本市行政区域内从事实验动物的科学研究,生产,经营,运输和应用的单位和个人。国家法律,法规另有规定的,按照有关规定办理。第三条 北京市实验动物管理办公室负责本市实验动物福利和伦理审查的协调管理工作,负责聘请有关人员组成北京市实验动物福利伦理委员会。北京市实验动物福利伦理委员会负责检查各有关单位实验动物福利和伦理审查制度及其执行情况。第四条 从事实验动物相关工作的单位,应成立由管理人员,科技人员,实验动物专业人员和本单位以外人士参加的实验动物福利伦理审查委员会(以下简称伦理委员会),具体负责本单位有关实验动物的福利伦理审查和监督管理工作。不具备成立伦理委员会条件的单位和个人,应委托其他单位的伦理委员会审查。任何其它组织不得代替伦理委员会的职责。第五条 伦理委员会至少由5人组成,设主席一名,副主席,委员。主席应由实验动物专业(最好是兽医专业人员)人员担任。每届任期3或4年,由单位负责聘任,岗前培训,解聘,

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胚胎原位杂交技术

胚胎原位杂交技术 通过分析mRNA在不同发育时期组织中的表达变化,有助于了解胚胎发育的基因调控机制。原位杂交是研究胚胎基因表达的常用方法,在发育生物学研究中起重要作用。胚胎原位杂交包括全胚胎原位杂交和胚胎组织切片原位杂交。 全胚胎原位杂交技术(whole mount in situ hybridization)可以从整体水平反映胚胎发育过程中基因表达的时空顺序,是一种广泛应用于胚胎发育调控基因表达研究的技术。该技术实验步骤少,简单易行,大量减少了分析所需时间。 全胚胎原位杂交成功的关键因素是进行适当的蛋白酶K处理。使用不同探针时,应摸索不同的蛋白酶K浓度、处理时间和温度。 全胚胎原位杂交实验中。经常会出现背景信号太强或信噪比太低的情况。产生这些情况的原因,通常是由于探针或抗体滞留于胚胎体腔和体室以及杂交后漂洗的条件不够严格等。杂交预处理前,将胚胎在解剖镜下用细针在脑室、颈背部、颌面部和心室等处刺孔,以使反应后的探针或抗体不在这些部位滞留。并在漂洗时充分洗除。同时。杂交后使用RNA酶充分消化未杂交的标记RNA探针,提高杂交后漂洗的严格度,抗体反应后充分漂洗

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分析天平的使用方法和注意事项

1. 称量前应检查天平是否正常,是否处于水平位置,吊耳、圈码是否脱落,玻璃框内外是否清洁。 2. 应从左右两门取放称量物和砝码。 称量物不能超过天平负载(200克),不能称量热的物体. 有腐蚀性或吸湿性物体必须放在密闭容器中称量。 3. 开启升降旋钮(开关旋钮)时,一定要轻放,以免损伤玛瑙刀口; 每次加减砝码、圈码或取放称量物时,一定要先关升降旋钮(关闭天平),加完后,再开启旋钮(开启天平)。 读数时,一定要将升降旋钮开关顺时针旋转到底,使天平完全开启。 同一化学试验中的所有称量,应自始至终使用同一架天平,使用不同天平会造成误差。 4.每架天平都配有固定的砝码,不能错用其他天平的砝码。 保持砝码清洁干燥。砝码只许用镊子夹取,绝不能用手拿,用完放回砝码盒内。 转动圈码读书时动作要轻而缓慢,以免圈码调落。 5. 称量完毕,应检查天平梁是否托起,砝码是否已归位,指数盘是否转到"0",电源是否切断,边门是否关好.。最后罩好天平,填写使用记录。

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常用培养基及成分

1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) :100 g Yeasst extract (酵母膏) :10 g CaCO3 :20 g Agar (琼脂) :15 g Distilled water (蒸馏水) 1 000 ml Adjust (调) pH to 6.8。 适用范围:恶臭醋酸杆菌混浊变种。 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) :5 g Beef extract (牛肉膏) :30 g NaCl :5 g Agar (琼脂) :15 g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]:When cultivation of Bacillus,5 mg of to MnSO4.H2O may be added .It is favorable to promote spore formation . 适用范围:产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢

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内切酶星号活性

在非理想的条件下,内切酶切割与识别位点相似但不完全相同的序列,这一现象称星号活性。有人提出,这种"星号"活性可能是内切酶的一种普遍特性(1),如果提供给相应反应条件,所有内切酶都会出现非特异性切割。NEB已证实下列酶存在星号活性:Apo I(2)、Ase I(2)、BamH I(3)、BssH II(2)、EcoR I(4)、EcoR V(5)、Hind III(1)、Hinf I(6、7)、Pst I(8)、Pvu II(9)、Sal I(8)、Sca I(2)、Taq I(10)、Xmn I(2)。酶识别特异性的改变受酶本身的性质及可能引起星号活性的反应条件影响。常见的引起酶识别改变的条件有:单碱基替换、识别序列外侧碱基缩短以及单链切刻(10)。Polisky等(4)对EcoR I的早期研究表明,在低盐浓度、高pH值条件下,EcoR I可能切割N/AATTN序列;最近,Gardner等(11)的研究表明,只要识别中心的四碱基序列(AATT)不出现A/T替换,EcoR I可以切割其它任何单碱基替代序列。大多数星号活性是可以控制的,做酶切反应时一般不考虑这方面的因素。只要在正常条件下,

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微生物检测无菌操作要求

微生物实验室工作人员,必须有严格的无菌观念,许多实验要求在无菌的条件下进行,主要原因,一是防止试验操作中人为污染样品,二是保证工作人员安全,防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。要求如下:1.1 接种细菌时必须穿工作服、带工作帽;1.2 进行接种食品样品时,必须穿专用的工作服、帽及拖鞋,应放在无菌室缓冲间,工作前经紫外线消毒后使用;1.3 接种食品样品时,应在进无菌室前用肥皂洗手,然后用酒精棉球将手擦干净;1.4 进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌,打开包装未使用完的器皿,不能放置后再使用,金属用具应高压灭菌或用酒精点燃烧灼三次后使用;1.5 从包装中取出吸管时,吸管尖部不能触及试管或平皿边;1.6 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作,接种细菌活样品时,吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒;1.7 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝,必要时还要烧到针和环与杆的连接处,接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min,再经火焰烧灼;1.8 吸管吸取菌液或样品时,应用相应的橡皮头吸取,不得直接用口吸。

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免疫球蛋白定量测定-免疫检验

免疫球蛋白定量测定: 免疫球蛋白定量测定较常用的方法有单向扩散法与免疫浊度法,前者较为简便,后者更为准确迅速。恶性单克隆丙种球蛋白病常呈现某一类丙种球蛋白的显着增高,大多在30mg/ml以上;而正常的免疫球蛋白,包括与M蛋白同类的丙种球蛋白的含量则显着降低。在良性丙种球蛋白病的血清标本中,M蛋白的升高幅度一般不象恶性丙种球蛋白病那么高,多在20mg/ml以下;M蛋白以外的免疫球蛋白含量一般仍在正常范围之内。如在单向扩散试验中出现双圈状沉淀环,则标本中可能存在某种免疫球蛋白片段的M蛋白。多克隆丙种球蛋白病患者的血清中常有多种类型的免疫球蛋白水平同时升高,每类上升的幅度不太大,但总的丙种球蛋白水平增主比较明显。 免疫球蛋白的定量检测,有时会由于不同实验室所用抗血清特异性的差异,而造成M蛋白定量结果的不同,特别在使用某一株M蛋白制备的抗血清检测其他患者的M蛋白时。如能配合作用区带电泳光密度扫描,常可纠正这种误差医学教育网`搜集整理。 进行免疫球蛋白的定量检测,不仅有助于丙种球蛋白病的诊断,并对丙种球蛋白病的良、恶性鉴别具有一定的帮助。如做动态观察,对丙种球蛋白病的病情和疗效的判断有

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实验动物的采血及处死方法

一、实验动物的采血实验动物的采血方法 实验研究中,经常要采集实验动物的血液进行常规质量检测、细胞学实验或进行生物化学分析,故必须掌握正确的采集血液的技术。采血方法的选择,主要决定于实验的目的和所需血量以及动物种类。 ㈠大鼠、小鼠的采血方法 ⒈剪尾采血 需血量很少时常用本法,如作红、白细胞计数、血红蛋白测定、制作血涂片等可与此法。动物麻醉后,将尾尖剪去约5mm,从尾部向尾尖部按摩,血即从断端流出。也可用刀割破尾动脉或尾静脉,让血液自行流出。如不麻醉,采血量较小。采血结束后,消毒、止 血。用此法每只鼠可采血10 余次。小鼠可每次采血约0.1ml,大鼠约0.4ml。⒉眼眶后静脉丛采血 穿刺采用一根特制的长7~10cm硬的玻璃取血管,其一端内径为1 ~1.5mm,另一端逐渐扩大,细端长约1cm即可,将取血管浸入1%肝素溶液,干燥后使用。采血时,左手拇指及食指抓住鼠两耳之间的皮肤使鼠固定,并轻轻压迫颈部两侧,阻碍静脉回流,使眼球 充分外突,提示眼眶后静脉丛冲血。右手持取血管,将其尖端插入内眼角与眼球之间,轻轻向眼底方向刺入,当感到有阻力时即停止刺入,旋转取血管以切开静脉丛,血液

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亚“G1”峰检测法检测细胞凋亡

处于增殖周期中的细胞,根据其所处不同周期时相(Go/G1、S、G2/M),其DNA含量分布在2n~4n之间。发生凋亡的细胞由于核内DNA裂解成许多小片段,在酒精固定后,用细胞膜通透剂使小分子量的DNA片段穿过胞膜。使细胞原有的DNA部分丢失,仅剩下大片段DNA,这些细胞在DNA染色后,用流式细胞分析术检测其DNA含量,会出现一个DNA含量<2n(即<G1期细胞的分布区,称为“亚G1峰”。因此处于“亚G1峰”的细胞代表样品中的凋亡细胞。 【样品来源】 (1)悬浮生长的培养细胞; (2)贴壁生长的培养细胞经胰蛋白酶消化后的细胞悬液; (3)离体细胞悬液。 将样品分组,即空白对照组(未经诱导凋亡处理组)和实验组(经诱导凋亡处理组)。 【材料与试剂】 (1)PBS缓冲液; (2)70%酒精; (3)DNA抽提缓冲液:取 192ml 0.2mol/L Na2 HPO4 ,与8ml 0.1mol/L枸橼酸混合,调整pH到7.8; (4)DNA染液:取200μg PI溶于10ml PBS,加入2mg无DNA酶活性的RNA酶。 【操作步骤】 (1)1~5×106 个细胞,用

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定量检测绿色荧光蛋白(rAcGFP1)

1. 应用说明 AcGFP1是从水母(Aequorea coerulescens)中分离出来的荧光蛋白,是EGFP的优良的代替品。AcGFP1的特性与EGFP相似,AcGFP1的激发波峰为475nm,发射波峰为505nm。此外,AcGFP1与EGFP在核酸水平上有94%的同源性。AcGFP1的特点是具有进行了人类密码子优化的开放阅读框。这不仅提高了AcGFP1 mRNA的转化效率同时也提高了它在高等哺乳动物细胞中的表达水平。另外,AcGFP1蛋白很稳定,可以对它在长时间范围内进行荧光检测。这种载色体成熟的很迅速,转染后8-12小时就可以进行检测。因此AcGFP1可被用来实时检测蛋白质的转运。 ModulusTM 多功能检测仪可以检测到低至5pg/ul的重组AcGFP1。 2. 实验准备 ModulusTM 多功能检测仪 (P/N 9200-001 or 9200-002);Blue荧光模块(P/N 9

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检验科试剂成本增长的原因及对策

随着公立医院改革的深入,开源节流、控制成本已经成为医院占有市场、提高核心竞争力的最有效手段。检验科是医院主要医技科室之一,检验试剂成本占医院卫生材料消耗较大比重,是医院实现成本有效管理的关键点。但由于检验项目的复杂性,检验试剂项目之间存在较大的差异,使检验成本管理存在较多难点和瓶颈,必须弄清楚各个化验项目试剂成本率,为医院管理层进行科学决策提供依据,同时也为科室内部加强管理提供支持。现以我院近年来检验科试剂成本增长较快为例,分析原因,寻求对策。 检验科耗材增长情况 2006—2009年我院检验耗材支出(试剂、卫生材料、低值易耗品、维修材料和外送标本等)呈现快速增长趋势,从2006年的200.9万元,增长到2009年的608.14万元,增长幅度为207.7% ;而同期检验收入从2006年的733.34万元,增长到2009年的1727.4万元,增长幅度为135.55% ;检验耗材支出的增长幅度明显高于检验收入的增长幅度。 检验收入耗材成本率 2006年的27.4%上升到2009年的35.21% ,增长7.81个百分点。检验收入耗材成本率大幅度增长主要是检验试剂成本的大幅度增长造成的,

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如何培养脐静脉内皮细胞(HUVEC)?

HUVEC 分离自脐带静脉,一般用于生理学和药理学研究,例如大分子转运、血液凝固、血管发生和纤维蛋白溶解作用。PromoCell 提供取自单个供者的 HUVEC,混合来源的则混合有至多四个不同供者。(Human Umbilical Artery Endothelial Cells (HUAEC) from the same donor are available on request.)此外,根据信号传导研究的不同,可以为血管生成研究和其他依赖 VEGF 的信号通路研究(相 关内皮生长因子)提供预选型的 HUVEC.这些细胞都经过 PromoCell 独有的 3D 血管生成检测试剂盒检测验证为阳性。VEGF 是一种重要的信号传导蛋白质,在血管发生和血管形成的过程中均有涉及。在活体外,研究显示 VEGF 可以刺激内皮细胞有丝分裂发生、细胞移行、血管出芽和微血管渗透。The cells have been tested: Von Willebrand factor (vWF) positive, CD31 positive, Dil-Ac-LDL uptake positive, Smoo

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脂类提取剂的选择及样品预处理

食品中脂肪的存在形式有游离态的,也有结合态的。游离态的脂如动物性脂肪和植物性脂肪。结合态的脂如天然存在的磷脂、糖脂、脂蛋白等中的脂肪与蛋白质或碳水化合物等成分形成的结合态。对大多数食品来说,游离态的脂肪是主要的,结合态的脂肪含量较少。一、 提取剂的选择脂类的结构比较复杂,到现在没有一种溶剂能将纯脂肪萃取出来,也就是说提取出来的都是粗脂肪。(大部分是脂肪,还有一些其他成分)。前面讲性质时讲到,脂类不溶于水,易溶于有机溶剂。测定脂类大多采用低沸点的有机溶剂。常用的溶剂有乙醚、石油醚、氯仿—甲醇混合溶剂。其中乙醚溶解脂肪的能力强,应用最广泛。下面我们讲他们的特点:(一) 乙醚(非极性)的优缺点1、 优点 (1) 乙醚的沸点低为34.6℃ (2) 溶剂脂肪能力强大于石油醚2、 缺点 (1) 能被2%的水饱和 (2) 含水的乙醚抽提能力降低(氧与水能形成氢键使穿透组织能力降低,即抽提能力下降) (3) 含水的乙醇是非脂成分溶解,而被抽提出来,使结果偏高(糖蛋白质等) (4) 使结果偏高,而且乙醚易燃。下面我们有一组试验,通过实验我们可以比较一下结果 提

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2007年全国HIV抗体诊断试剂临床质量评估报告

按照卫生部《全国艾滋病检测工作管理办法》要求,中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心参比实验室于2007年8月7日至9月14日组织了本年度全国HIV抗体诊断试剂临床质量评估,现将评估情况报告如下:一、参评实验室参加本次试剂评估工作的有艾滋病参比实验室和9个省级疾控中心的艾滋病确证中心实验室,包括安徽、北京、广东、广西、贵州、河南、湖南、四川、新疆。评估工作由同一批技术人员、使用同一批设备在参比实验室集中完成。二、被评估试剂根据《全国HIV抗体诊断试剂临床质量评估方案》,参评HIV抗体筛查试剂由参评实验室从市场上随机抽取(详见表1、表2)。这些试剂全部经国家食品药品监督管理局注册批准、在国内市场上销售,其中酶联免疫法诊断试剂(以下简称酶联试剂)要求批批检合格。在14种酶联试剂中,1种为第四代HIV抗原抗体检测试剂,其余13种为第三代HIV抗体检测试剂(双抗原夹心酶联免疫法)。14种快速诊断试剂(以下简称快速试剂)全部为HIV抗体检测试剂,其中1种原理为明胶凝集法,即PA;其余13种原理为免疫层析法。三、血清盘构成1.酶联试剂评估血清盘由500份血清/血浆样品构成,来源如下:(1)参比

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异染色质heterochromatin

  异染色质 heterochromatin 最近异染色质一词提得很多。原来它只是细胞形态学上的名词,即指在细胞周期的所有各个阶段,可被碱性染料深染的染色质(异固缩),但现在则是从蝗虫精母细胞的 X染色体开始把从分裂前中期到中期浅染或褪色的(负异固缩)染色质也都称为异染色质。与此相反,间期核中染色较淡,分裂中期染色较深的染色质称为常染色质。 B染色体、性染色体,以及某些特定染色体组等等,这类染色体几乎全部为异染色体,还有着丝粒附近,核仁形成区端部小粒等,仅染色体上一定部位的特定染色体区段,也是异染色质。现在已知,异染色质区段时常染色质相比,其 DNA复制的时期较晚,相当于一般细胞周期中的 S期末尾(晚复制型)。但最近也发现有早期复制型的异染色质。但不论那一类异染色质, DNA复制极快,极短时间即告完成。如用电子显微镜观察,可以看到异染色质部位的染色丝只是在为时极短的合成 DNA的 S期才解旋分散,而在其他各期则取固缩型的结构。由此可见,最初以对碱性染料亲和性不同而取名的异染色质。实际上在 DNA合成时期以及存在形态上也显有差异。所以也可把异染色质区定义为与常染色质周期不同(

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染色体数目异常与人类疾病

医学遗传学的研究表明,在人类的22对常染色体中,个别染色体的数目和形态变化,与某些先天性疾病有着因果关系。 在众多的先天性疾病中,最常见的是先天愚型(Down syndrome),发病率介于1/1 000~1/500。患儿具有特殊的颅面部畸形,头颅小而圆,枕骨扁平,眼小而眼距过宽,两眼外侧高而内侧低,脸圆,鼻扁平, 口半张,舌常伸出口外,舌有龟裂,低耳位,常为通贯手,发育迟缓,智力低下,平均寿命很短,大约到10岁时已有1/3患者死亡。法国细胞遗传学家Lejeune首先证实此病的病因是多了一条小的第21号染色体。 故此病又称为21三体综合征(trisomy21)。由于此疾病最早被英国医生Down所描述,听以又称Downsyndrome。典型的21三体综合征(即具有47, +21)核型的占95%;另有一种为嵌合型(即46/47, 十21),占1%~2%;其他为易位型,典型的患者全身的体细胞都多了一条额外的21号染色体。母亲年龄是影响发病率的重要原因。先天愚型患儿的母亲年龄平均为34.4岁(正常人出生时母亲年龄平均为28.2岁)。随着孕妇年龄的增长,娩出患儿的风险逐渐增高。典型

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实验动物的给药途径及取血方法

一、实验动物的用药途径及方法 动物给药的途径和方法可根据动物种类、实验目的和药物而定,常用的方法简介如下。 (一)经口给药 有口服与灌胃两种方法。口服法可将药物放入饲料或溶于饮水中,使动物自行摄取。为保证剂量准确,应使用灌胃法,适用于小白鼠、大白鼠及家兔等动物。 1. 小鼠、大鼠(或豚鼠)灌胃时将灌胃针安在注射器上,吸入药液。左手抓住鼠背部及颈部皮肤将动物固定,右手持注射器,将灌胃针插入动物口中,用灌胃针管压其上腭,使口腔和食道成一条直线,再沿咽后壁徐徐插入食管。针插入时应无阻力。若感到阻力或动物挣扎时,应拔出重插,以免损伤或穿破食管以及误入气管。 一般当灌胃针插入小鼠3~4cm,大鼠或豚鼠4~6cm后可将药物注入。常用的灌胃量小鼠为0.2~1ml,大鼠1~4ml,豚鼠为1~5ml。 2. 猴、狗、猫、兔 灌胃时,先将动物固定,用特制的扩口器放入动物口中,并用绳将它固定于嘴部。将带有弹性的橡皮导管(如导尿管),经扩口器上的小圆孔插入,沿咽后壁而进入食管。此时应检查导管是否插入食管,可将导管外口置于一盛水的烧杯中,如不发生气泡,即认为此导管是在食管中,即可将药液灌入。灌

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「彗星」实验带你去看流星雨

实验原理「彗星」实验又称单细胞凝胶电泳实验,是一种通过检测 DNA 链损伤来判别遗传毒性的技术。它能有效地检测并定量分析细胞中 DNA 单、双链缺口损伤的程度。当各种内源性和外源性 DNA 损伤因子诱发细胞 DNA 链断裂时,其超螺旋结构受到破坏,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜等膜结构受到破坏,细胞内的蛋白质、RNA 以及其他成分均扩散到电解液中,而核 DNA 由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。在中性条件下,DNA 片段可进入凝胶发生迁移,而在碱性电解质的作用下,DNA 发生解螺旋,损伤的 DNA 断链及片段被释放出来。在电泳过程中,这些 DNA 断链及片段带会离开核 DNA 向正极迁移形成「彗星」状图像,而未受损伤的 DNA 部分保持球形。DNA 受损越严重,产生的断链和断片越多,长度也越大,在相同的电泳条件下迁移的 DNA 量就愈多,迁移的距离就愈长。通过测定 DNA 迁移部分的光密度或迁移长度就可以测定单个细胞 DNA 损伤程度,从而确定受试物的作用剂量与 DNA 损伤效应的关系。该法检测低浓度遗传毒物具有高灵敏性,研究的细胞不需处于有丝分裂期。同时,这种技

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从免疫亲和层析柱上洗脱抗原类型

实际上,从免疫亲和层析柱上洗脱抗原的操作比较简单,而且也比较迅速。主要工作是设计和摸索各种有效的洗脱条件。可以采用三种类型的方法进行洗脱,使抗原抗体复合物解离:①使用较苛刻的条件;②加入模拟结合位点的饱和量小分子化合物,和/或③使用一种能引起构象改变而使抗原释放的试剂。 最常用的洗脱方法是基于破坏抗体与抗原之间的结合键。洗脱条件可以较为强烈,使抗体和抗原变性,或比较温和,使抗原和抗体仍保持原来活性。 采用相对强烈的洗脱条件应根据亲和层析柱所用抗体而定。如果使用的是亲和层析纯化的多克隆抗体,抗原的洗脱条件可以与用于纯化抗体的条件相同。否则洗脱条件只能根据实验经验来确定。可以通过测试各种缓冲液来建立洗脱条件。 当所用的抗体是针对一种合成肽时,通过加入一种超过克分子量的合成肽,有时即可将抗原洗脱。当抗原抗体间的作用发生解离,过量的肽结合到柱上就抑制了抗原重新结合,因而被洗脱。尽管这种方法极富吸引力,因为其洗脱条件十分温和,但达到有效的洗脱常很困难。关键性的变化因素包括抗原抗体结合的解离率和抗体对肽与整个抗原的相对亲和力。因为抗体是针对肽而产生的,它们通常可有效地与肽结合,所以主要问

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酶免疫细胞化学染色操作指南

一、材料和试剂1、玻片:须用免疫组化专用玻片,或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。2、5-10%正常山羊血清封闭液,用PBS配。3、3%牛血清白蛋白(BSA),用PBS配。4、0.01M pH7.4 PBS5、1% BSA-PBS(含0.05% Tween20)6、AEC底物(1)底物缓冲液(20X) PH 4.6醋酸(分子量60.6) 30.6mlTriton X-100醋酸钠 3H2O(分子量136.1)66.68克加蒸馏水到960ml,调pH到4.6,最后加蒸馏水到总体积1000ml。(2)AEC(20X)AEC 15mg/ml,溶在DMF(二甲基甲酰胺,分子式HCOH(CH3)2 分子量73.10中)(3)0.6% H2O2(20X)临用时,(1)(2)(3)各50ul,在1ml双蒸馏水中混匀30分钟内有效。7、DAB(即DAB-4HCL)(1)1.5克DAB在100ml水溶液中(20X)(2)1M Tris(20X),用HCl调PH到7.4(1)(2)(3)各滴加入1ml二蒸水中,新鲜配,避光,30分钟内有效。溶解后(可加热到50℃),加水合氯醛50克(水合氯醛Chlor

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