目前市场上的血清品牌五花八门，除了名气最大的 Gibco，Hyclone 之外还有很多其它的进口品牌和国产品牌。价格也高低不一，可以称得上鱼龙混杂，血清的水深的很。 很多不法奸商为追逐高额利润，大肆造假，炮制出许多所谓 Gibco，Hyclone 等「原装进口胎牛血清」，甚至很多国家严禁进口的疫区血清或者超级紧俏的血清货号，他们都能提供「大量现货」，坑害广大科研工作者，造成实验失败，毕业延期等恶劣影响。 特别是近年来，进口血清紧俏，价格一路高涨，这些假冒名牌血清利用很多科研工作者对市场不了解，纷纷低价销售所谓的进口血清，劣币驱逐良币。让很多终端客户误以为 Gibco 和 hyclone 等血清价格便宜，而使得真正的正品血清因为价格高昂而得不到客户认可。 上海揽宝公司鉴于此，特地选择一些价格适中，质量可靠，久经市场考验的进口血清品牌，以合理的价格奉献给客户，而其中的佼佼者就是 Gemini 血清。该品牌进入国内时间较短，知名度相较于 Gibco 等品牌不是很高，但是正因为此，才使得市面上几乎没有这个品牌的假冒产品，因此请广大科研工作者放心选购。 购买 Gemi

荧光法是一种非常有用的工具，各种各样的分析领域都在利用它。由于它具有高灵敏度、好的选择性以及可提供多参数信息（如，荧光强度、荧光寿命、荧光各向异性）等特点，所以被广泛用于生物制药研究、临床诊断、宇宙空间环境监测、免疫分析中分子间作用原理研究、DNA序列分析、荧光原位杂交以及细胞成分分析等。镧系系复合物由于其特有的荧光特性，而受到广泛关注，特别是在临床生化分析中。利用镧系元素的荧光特性，构建时间分辨荧光免疫分析（time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA）试剂以及创建新的灵敏度高的荧光免疫分析方法（fluoroimmunoassay）是当今临床生化的主要研究方向。1、荧光基本原理：化学体系的光致发光提出较早，光致发光有两种常见的类型荧光和磷光，它们都是化学体系被电磁辐射所激发，然后发射出相同或较长波长的辐射。其中磷光，从分析角度看，意义不是很大。荧光由于其固有的灵敏性而受到人们的偏爱。荧光标记方法的检出限可达10-15～10-18水平。简单和复杂的气态、液态和固态化学体系均可发荧光。最简单的荧光有稀的原子蒸气发出，经过10-8秒后电子回到基态同时发出两种相

细胞培养基的种类繁多，细胞培养方式也较多，如何正确地使用培养基及最大程度地保持培养基的营养以维持细胞的生长，对每个细胞培养工作者都很重要。培养基的使用依据不同的培养基种类、培养方式、细胞种类的不同而存在差异。1、细胞培养液的构成细胞培养液指细胞生长的液体环境，一般指完全培养液，添加了血清、水解乳蛋白、各种添加剂等可以直接使用的培养液。1.1 细胞培养基&血清模式血清对于在传统培养基配方中生长和增殖的大多数细胞系来说是需要的，因为大多数单独的培养基并不能提供细胞生长所需要的全部营养，如MEM培养基，较为常用的量为5%～10%的比例，而特殊的低血清培养基血清量可降至3%左右，细胞的形态和功能不受影响。注：SLM120为清大天一公司低血清培养基，上图为培养24小时细胞密度，下图为48小时细胞密度。血清可在培养基灭菌后加入，也可与培养基混合后一起过滤。血清的添加一方面补充了细胞生长、增殖所需的一些因子（如生长因子等），另一方面也增加了培养基的黏滞度，这样可以降低细胞在悬浮培养中或被胰蛋白酶消化后的损伤。但是血清的加入也带来了很多问题，血清都是批量生产，各批之间差异很大，血清含一些对细胞

一、实验目的 1．了解根尖的内部构造。2．了解根的初生结构、初次生结构。3．掌握被子植物根尖的吸收分泌功能。二、实验原理 从根的顶端到着生根毛的部位，叫做根尖，主根、侧根和不定根都具有根尖。根尖是根中生命活动最活跃的部分，根的生长和根内组织的形成都是在根尖进行的。根尖一般分为根冠、分生区、伸长区和成熟区四个部分。经过根尖顶端分生组织的分裂、生长和分化，植物体发育出成熟的根结构，这种由顶端分生组织及其衍生细胞的增生和成熟所引起的生长过程，称为初生生长。初生生长形成的各种成熟组织都属于初生组织，它们共同组成的器官结构称为初生结构。从根的成熟区作一横切或纵切，就能清楚地看到根的初生结构由外至内分别为表皮、皮层和维管柱。A．近外方的组织； B．维管柱 l．表皮；2.皮层；3.内皮层；4.中柱鞘；5.原生木质部；6.后生木质部； 7.初生韧皮部大多数双子叶植物和裸子植物的根在初生结构成熟后，要继续进行次生生长，形成次生结构，包括次生维管组织和周皮，但有些草本双子叶植物和多数单子叶植物的根通常不再进行次生生长。根的次生维管组织是维管形成层活动的结果。维管形成层最早源于初生木质部与初生韧皮部之间原形

这种方法是一种用物理化学方法进行二级结构预测的方法，或称为立体化学方法。在蛋白质中，氨基酸的理化性质对蛋白质的二级结构影响较大，因此在进行结构预测时考虑氨基酸残基的物理化学性质，如疏水性、极性、侧链基团的大小等，根据氨基酸残基各方面的性质及残基之间的组合预测可能形成的二级结构。“疏水性”是氨基酸的一种重要性质，疏水性的氨基酸倾向于远离周围水分子，将自己包埋进蛋白质的内部。这一趋势加上空间立体条件和其它一些因素决定了一个蛋白质最终折叠成的三维空间构象。 随着蛋白质结构数据的积累，人们开始注意到一些较简单的序列与结构关系。可以通过疏水氨基酸出现的周期性预测蛋白质的二级结构，利用各种氨基酸的疏水值定位蛋白质的疏水区域。Lim等人很早就对α螺旋和β折叠归纳出了一套预测模式。例如α螺旋的轮状结构特征，轮的一侧通常处于蛋白质的疏水核心，另一侧则常处于亲水表面。因此，α螺旋中亲疏水氨基酸残基的出现位置也就有一定的规律性，亲水残基多出现在亲水侧面，而疏水残基则多出现在疏水侧面，反映在序列上就是一些特征的亲疏水残基间隔模式。 疏水性氨基酸的位置有助于推断蛋白质中二级结构的定位，

一、糖度计的工作原理 光线从一种介质进入另一种介质时会产生折射现象，且入射角正弦之比恒为定值，此比值称为折光率。果蔬汁液中可溶性固形物含量与折光率在一定条件下（同一温度、压力）成正比例，故测定果蔬汁液的折光率，可求出果蔬汁液的浓度（含糖量的多少）。常用仪器是手持式折光仪，也称糖镜、手持式糖度计， 通过测定果蔬可溶性固形物含量（含糖量），可了解果蔬的品质，大约估计果实的成熟度。 手持糖度计一般是圆柱形的。 二、手持糖度折光仪使用说明 （一）、仪器结构 ①、折光棱镜 ②、盖板 ③、校准螺栓 ④、光学系统管路 ⑤、目镜（视度调节环） （二）、使用方法 打开盖板②，用软布仔细擦净检测棱镜①。取待测溶液数滴，置于检测棱镜上，轻轻合上盖板，避免气泡产生，使溶液遍布棱镜表面。将仪器进光板对准光源或明亮处，眼睛通过目镜观察视场，转动目镜调节手轮⑤，使视场的蓝白分界线清晰。分界线的刻度值即为溶液的浓度。 （三）、校正和温度修正 仪器在测量前需要校正零点。取蒸馏水数滴，放在检测棱镜上，拧动零位

微量凯氏定氮仪的安装 1、先选取三个稳固的铁架台，三个铁夹。 2、安装反应管。取一铁架台和一铁夹，将铁夹紧固在铁架台上，松开夹子，将反应管中上部夹紧在铁夹上，其高度和倾斜度应合适。 3、安装冷凝管。另取一铁架台和一铁夹，将铁夹紧固在铁架台上，松开夹子，将冷凝管中部夹紧在铁夹上，使其倾斜度与反应管的导气端弯头平行，小心移动至弯头下端，稍稍松开铁夹后上移冷凝管使其与反应管密封连接好。调节铁架台至合适位置再夹紧铁夹。 4、安装蒸汽发生器。再取一铁架台和一铁夹，将铁夹紧固在铁架台上，松开夹子，将蒸汽发生瓶颈部夹紧在铁夹上。导汽管与反应管的进汽管连接好。 5、将所有的夹子打开。取下样品加入口的磨口塞，从样品加入口加入50mL的蒸馏水，再插回塞好。并给冷凝管接通冷凝水。 6、往蒸汽发生瓶加入蒸馏水至其体积的三分之二处，加入几粒沸石和4滴甲基橙，再加入3mL浓硫酸，然后置于电炉上加热使水沸腾。 7、产生蒸汽后，夹上夹子1，让蒸汽经导管进入反应管外套，待废液排放口排出蒸汽后，夹上夹子3，使蒸汽进入反应管，蒸馏洗涤10分钟。打开夹子1，同时夹上夹子2，

摘要： DNA 甲基化是表观遗传学(Epigenetics)的重要组成部分，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生中起着重要作用，是目前新的研究热点之一。随着对甲基化研究的不断深入，各种各样甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型研究的要求。这些方法概括起来可分为三类：整体水平的甲基化检测、基因特异位点甲基化的检测和新甲基化位点的寻找。本篇将主要介绍目前存在的大部分DNA 甲基化研究方法，并对其相关特性进行了简要分析与总结。关键词 ：表观遗传学；DNA 甲基化；甲基化研究方法早在1942年,C.H.Waddington首次提出表观遗传学(epigenetics)的概念,并指出表观遗传与遗传是相对的,它主要研究基因型和表型的关系。几十年后,霍利迪(R.Holiday)针对表观遗传学提出了更新的系统性论断，也就是人们现在比较统一的认识[1]，即在不改变基因组序列的前提下，通过DNA 和组蛋白的修饰来调控基因表达，这种修饰以DNA 甲基化最为常见。继人类基因组计划结束后，2003年人类表观基因组协会(Human Epigenome Consortium,HEC)宣布开始投资和实

制冷器的安装方法一般有三种：焊接、粘合、螺栓压缩固定。在生产上具体用那一种方法安装，要根据产品的要求来定，总的来说对于这三种的安装时，首先都要用无水酒精棉，将制冷器件的两端面擦洗干净，储冷板和散热板的安装表面应加工，表面平面度不大于0.03mm，并清洗干净，以下就是三种安装的操作过程。1、焊接焊接的安装方法要求制冷器件外表面必须是金属化，储冷板和散热板也必须能够上焊料（如：铜材的储冷板或散热板）安装时先将储冷板、散热板、制冷器进行加温（温度和焊料的熔点差不多），在各安装表面都熔上约70℃～110℃之间的低温焊料0.1mm。然后将制冷器件的热面和散热板的安装面，制冷器件的冷面和储冷板的安装面平行接触并且旋转挤压，确保工作面的接触良好后冷却，该安装方法较复杂，不易维修，一般应用在较特殊的场合。2、粘合粘合的安装方法是用一种具有导热性能较好的粘合剂，均匀的涂在制冷器件、储冷板、散热板的安装面上。粘合剂的厚度在0.03mm，将制冷器的冷热面和储冷板、散热板的安装面平行的挤压，并且轻轻的来回旋转确保各接触面的良好接触，通风放置24小时自然固化。该安装方法一般应用在想永久的把制冷器固定在散热板或储

一 质壁分离原理 当外界溶液浓度大于细胞液浓度时，根据扩散作用原理，水分会由细胞液中渗出到外界溶液中，通过渗透作用失水，使细胞壁和原生质层都出现一定程度的收缩。由于原生质层比细胞壁的伸缩性大，当细胞不断失水时，原生质层就会与细胞壁逐渐分离开来，也就是逐渐发生了质壁分离。 反之，外界溶液浓度大于细胞液浓度，则细胞通过渗透作用吸水，整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态，使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。 二 实验材料 紫色洋葱的鳞片叶、质量浓度为30%、50%的蔗糖溶液、蒸馏水，5%的硝酸钾、碳酸氨溶液，2.5%、10%的氯化钠溶液。 三 实验用具 刀片、镊子、滴管、载玻片、盖玻片、吸水纸、显微镜. 四 实验步骤 1.制作临时装片 (选材、取表皮、制片) 2.观察（先低倍镜观察然后高倍镜观察） 3.引流法加入30％的糖液（重复数次） 4.静置、观察 5.引流法加入清水（重复数次） 6.静置、观察 7.同样的步骤用50%蔗糖、蒸馏水、5%的硝酸钾、碳酸氨溶液,2.5%

一、实验目的 1、 掌握皮纹分析的基本知识和方法。 2 、了解皮纹分析在遗传学中的应用。 二、实验原理 人体的手、脚字面具有特定的纹理表现，简称皮纹。人类的皮肤出表皮和真皮构成。真皮乳头向表皮突起，形成许多排列整齐、平行的乳头线，此线又称嵴纹。嵴纹上有许多汗腺的开口。突起的嵴纹相互又形成凹陷的沟。这些凹凸的纹理就构成了人体的指 ( 趾 ) 纹和掌纹。目前，皮纹学的知识和技术．广泛应用于人类学、遗传学、法医学以及作为临床某些疾病的辅助诊断。 人体的皮纹既有个体的待异性，又有高度的稳定性。皮纹在胚胎发育第 13 周开始出现，第 19 周左右形成，出生后终生不变。 三、实验用品和材料 放大镜、印台、印油、白纸、直尺、铅笔、量用器 四、实验方法和步骡 将双手洗净、擦干，把全手掌在印台上均匀地涂抹上印油，五指分开按在白纸上。注意用力不宜过猛过重．不能移动手掌或白纸，以免所印皮纹重叠而模糊不清。 1、 指纹观察 手指末端腹面的皮纹称为指纹。根据纹理的走向扣三叉点的数日．可将指纹分为三种类型：弓形纹、箕形纹、斗形纹 (1) 弓形纹

一、目的要求1.学习电泳原理和技术。2.学习和掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质技术。二、原理聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺（acrylamide，简称Acr）和交联剂N，N-甲叉双丙烯酰胺（N，N-methylene-bisacylamide，简称Bis）在加速剂N，N，N，N-四甲基乙二胺（N，N，N，N-tetramethyl ethylenedia mine，简称TEMED）和催化剂过硫酸铵[ammonium persulfate（NH4）2S2O8，简称AP）或核黄素（ribofavin即vitamin B2，C17H20O6N4）的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE）。聚丙烯酰胺凝胶有下列特性：(1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好；(2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶(3)对pH和温度变化较稳定；(4)几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好；(5)样品不易扩散，且用

Accuri的C6流式细胞仪系统是一种全功能、二激光、六探测器分析流式细胞仪系统，包括：C6流式细胞仪、CFlow软件、电脑。C6的流式细胞仪系统提供最畅销的流式细胞仪，而且价格少几倍。C6流式细胞仪系统以敏感的探测器捕获和激发前散射光和旁散射光，以及4个荧光探测器的可调光学过滤器。CFlow软件使搜集数据和分析变得简单快速。CFlow软件如此直观，让您启动并运行一个小时内得到您的Accuri系统。动态范围：C6的流式细胞仪拥有国家配备的先进电子产品，使人们能同时收集到16000000渠道的数字数据变为可能。这无与伦比的动态范围省去了所需的可调增益设置对探测器。没有增益设置的意思是：有可能搜集资料在分析后由于不当的增益设置导致数据丢失。探测器的灵活转换：C6的流式细胞仪采用了新型的光学设计，其中包括合作、线性和暂时间隔激光器，该激光器都集中在同一个斑点，他们的样本数据只有当激光理想组合了才是令人兴奋的样本。流量控制：C6流式细胞仪的流量系统是一种全新的途径，使得用户控制样本前进速度和活性区流的直径变为可能。这使用户能够选择最佳的核心尺寸来作为他们的样本：大的为哺乳动物细胞、中等的为酵母

一. 植物遗传转化的方法 植物遗传转化技术可分为两大类：一类是直接基因转移技术，包括基因枪法、原生质体法、脂质体法、花粉管通道法、电激转化法、PEG介导转化方法等，其中基因枪转化法是代表。另一类是生物介导的转化方法，主要有农杆菌介导和病毒介导两种转化方法，其中农杆菌介导的转化方法操作简便、成本低、转化率高，广泛应用于双子叶植物的遗传转化。二.农杆菌介导的基因转化方法 （一）农杆菌的Ti质粒与T-DNA 的整合机制几乎所有双子叶植物都容易受到土壤农杆菌感染，而产生根瘤。它是一种革兰氏阴性土壤杆菌（A. tumefaciens）。其致瘤特性是由Ti（tumor－inducing）质粒介导的。农杆根瘤菌之所以会感染植物根部是因为植物根部损伤部位分泌出酚类物质乙酰丁香酮和羟基乙酰丁香酮，这些酚类物质可以诱导Vir（Virulence region)基因的启动表达，Vir基因的产物将Ti质粒上的一段T－DNA 单链切下，而位于根瘤染色体上的操纵子基因产物则与单链T－DNA 结合，形成复合物，转化植物根部细胞。T－DNA 上有三套基因，其中两套基因分别控制合成植物生长素与分裂素，促使植物创伤组织无

1．乳腺分布特点 常用实验动物乳腺分布特点。 2．子宫结构特点 家兔的子宫属于双子宫型，是由一对几乎独立的、游离的子宫弯曲而成，两个子宫各有一个子宫颈分别与同一个阴道相通，即两个子宫的子宫颈共同开口于同一个阴道。所以，兔的子宫无所谓子宫角或子宫体，只是一对筒状结构，每只长度平均约7厘米，宽约3-4mm，但妊娠后期的子宫，在腹腔内可以扩展到很大的范围。 啮齿类动物的子宫均属双子宫型。其中，大白鼠的子宫呈Y字形排列，左左两个子宫颈开口于共同阴道和家兔的子宫一样，属于双子宫，双子宫颈，单阴道类型。 豚鼠的子宫属于双角型子宫，两个子宫角长约3～5cm，直径约5mm，背腹扁平。子宫体长约2cm，直径6mm，亦是背腹压扁。比子宫角略宽一点。子宫颈有两个内口，但只有一个公共外口。 肉食动物的子宫属于双角型子宫。具有发育良好的二个子宫角，单子宫体，单子宫颈和单阴道，不过左右两个子宫腔愈合范围较大，未愈合部分则形成弓状弯曲的子宫角。狗的子宫角细而长，子宫体很短，角体比例在5～6：1。中等体形的狗，子宫角长约12～15厘米，子宫体长约2～3厘米。另外，狗的子宫角腔

一、实验目的 1．通过课堂教学和课外现场教学相结合，用2～3 次实验时间使学生基本掌握被子植物的外部形态术语的含义及其组成特点。2．通过对各类型实体(活体或标本)的观察，从外部形态特征上区分根、茎、叶、花、果实等各器官的不同类型以及各种类型的组成特点。3．通过对花的解剖，从外部形态及内部解剖结构上，掌握判断花冠类型、雄蕊类型、雌蕊类型、胎座类型、子房位置、心皮数目的方法。4．根据对花的解剖观察，学会绘制花图式的方法及书写花程式。5．通过对各类果实的形态及其纵、横切面的观察，掌握各类果实的形态结构特征。二、实验用品（一）材料 植物各类器官实验所需要的代表植物的实物标本(腊叶标本、浸制标本及活体标本)。（二）器材 体视显微镜、解剖针、镊子、载玻片、模型。需要的代表植物的实物标本(腊叶标本、浸制标本及活体标本)。三、内容与方法 在实验开始前，首先阅读被子植物的外部形态术语；心皮数目的判别方法；花程式或花图式的表达方式等内容。同时，在实验过程中，可根据地区、季节、学时、专业不同，从中选取一些代表性的植物进行教学。在被子植物的外部形态术语实验所需的实验材料的取材方面：(1)同一实验可供选择的实验

本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后，加入高浓度的KAc，0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质，最后用乙醇或异丙醇沉淀。一 材料、试剂和仪器1 材料 新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料2 试剂(1)提取缓冲液Tris-HCl 100mmol/L（pH8.0）EDTA 50mmol/L （pH8.0）NaCl 500 mmol/L灭菌后加β-巯基乙醇至10 mmol/L(2)裂解液20%SDS(3)高盐溶液5mol/L KAc(4) RNaseA 10mg/ml(5) 异丙醇(6)灭菌ddH2O或TE3. 仪器: 离心机， 恒温水浴, 台式高速离心机，电泳装置二 实验程序1取幼嫩的组织材料1-2g,用蒸馏水冲洗干净，再用灭菌ddH2O冲洗2次，放入经液氮预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉末状，用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到加有500μL提取液的离心管中,轻轻混匀。2 向管中加入50μL20%SDS溶液，混匀，不可过于强烈震荡以防基因组DNA断裂 ，65℃保温10min，并不时摇动。3 加入150μL 5mol/L

经典的沉淀试验有4个缺点无法克服，即操作繁琐、敏感度低（10～100μg/ml）、时间长和难以自动化。根据抗原与抗体能在液体内快速结合的原理，70年代出现了微量免疫沉淀测定法，即免疫透射浊度测定、免疫胶乳浊度测定和免疫散射浊度测定法。这3种技术皆已常规用于临床体液蛋白的检测，并已创造出了多种自动化仪器。 一、免疫浊度测定的基本原理抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过量时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物的含量。 免疫浊度测定法按照仪器设计的不同可以分为两种，即比浊仪测定（turbidimetermeasure）和散射比浊仪测定（nephelomitermeasure）。比浊仪测定是测量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰减，其读数以吸光度A表示。A什反映了入射光与透射光的比率（A＝2－log10T，T代表浊度百分比）。散射比浊仪测定是测量入射光遇到质点（复合物）后呈一定角度散射的光量，该散射光经放大后以散射值表示。 由于免疫复合物的形成有时限变化，当

仪器名称 OLYMPUS荧光显微镜 型　　号 BX51TF 国别厂家 日本 OLYMPUS公司 主要指标 1、目镜放大倍数10X； 2、物镜放大倍数分别为 4，10，20，40，100X（油镜）； 3、制冷CCD摄像头（300万像素）与IBM电脑连机操作； 4、除明场（Bright Field）外，还可产生四种激光（蓝Blue，绿Green，紫外UV，黄Yellow）。 功能范围 1、用于明场下染色标本的观察和拍照； 2、主要用于荧光染色标本和免疫杂交标本的观察和拍照。 荧光显微镜操作步骤 1、使用前确保你已经熟悉显微镜的基本操作，否则不允许操作。 2、先开电源（ON），启动发光器，再开照相机电源。以免先照相机再开荧光显微镜电源时，强大电源将照相机电子零件烧损。 3、在显微镜下找到需要的物象后，打开电脑的成像系统。需要使用荧光时，请务必预热荧光灯电源15分钟。 4、选择滤镜，将滤镜推入（以免光线向外散失）后，于暗室下开始观察。应一次把全部玻片观察完毕，

头一次自己培养L929细胞，手忙脚乱的，把冷冻的细胞直接放进培养基里就结束了。过了60个小时，去显微镜下看，只能看到几个帖壁细胞。仔细想想做实验的步骤，又上网查查帖子，觉得可能是没有在第二天换新培养基的问题，导致冷冻液里的DMSO影响细胞贴壁。不知道培养皿里的细胞还有没有活下去的可能。总之第一次做实验结果不好也不应该轻易放弃。 把培养皿里的上清液转移到离心管里，离心，加入新的培养基重新放到培养箱里培养，原来的培养皿除掉上清液后直接加入新的培养基，因为里面还可以看到一些贴壁的细胞。虽然数量很少。 还有几个可能的原因导致培养的不好。 1.RPMI是2年前买的，虽然一次没有用过，可是总觉得别扭。 2.把冷冻的细胞加培养基里面时，培养基忘记回温到37度了。 3.细胞在-80度的冰箱里大概有1，2年了，还活着吗？ 照片是培养了60个小时的细胞。 去除上清后重新加入培养基，能看到几个贴壁细胞，希望优胜劣汰的原则在这里适用，活下来的都是好同志哈哈哈。 离心后加入新的培养基的细胞，圆圆的，希望你们也不要死啊，要死死远一点，晚上过10个小时再来观察