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碱性蛋白酶活力的测定(福林—酚试剂法)

相关专题 解析蛋白酶活性测定 聚焦蛋白酶研究新进展 一、实验目的 ①学习测定蛋白酶活力的方法。 ②掌握分光光度计 的原理和使用方法。 ③学习绘制标淮曲线的方法。 二、实验原理 福林—酚试剂是磷铂酸盐与磷钨酸盐的混合物。它在碱性条件下不稳定,能被酪氨酸中的酚基还原,生成铂蓝、钨蓝的混合物。酪蛋白在蛋白酶作用后产生的酪氨酸可与福林—酚试剂反应,所生成的蓝色化合物可用比色法测定。 三、实验器材 ①分光光度计 ②恒温水浴锅 ②冷凝器 四、材料与试剂 ①市售的碱性蛋白酶制剂。 ②0.4mo/L碳酸钠:42.4gNa2CO3用蒸馏水溶解.定容到l000mL。 ③4mo1/L三氯醋酸:65.6g三氯醋酸用蒸馏水溶解,定容到1000 mL。 ④2%酪蛋白:2.0g酪蛋白加40mL蒸馏水,加3—5滴浓氨水,于沸水浴上溶解。 用pH11的硼酸钠-氢氧化钠缓冲溶液定容到1000mL。 ⑤pH11的硼酸钠-氢氧化钠缓冲溶液:0.1mol/L

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蛋白质液相芯片技术---生物标志物检测

液相芯片技术是20世纪90年代后期发展起来的被喻为后基因组时代的芯片技术。液相芯片技术将流式检测技术与芯片技术有机地结合在一起,一方面大大延伸了流式检测平台,以微球体代替细胞作为反应载体,这个相当开放的反应体系可进行蛋白、核酸等等生物大分子的检测,不仅从细胞水平深入到分子水平,其检测范围也得到了前所未有的扩展;另一方面也使芯片技术取得重大的突破:在保持高通量检测的同时,将反应体系由液相-固相反应改变为接近生物系统内部环境的完全液相反应体系,对于确保建立在正确的高级结构之上的真实的蛋白质相互作用尤为关键。迄今为止不到十年的时间,全球已有数百套基于此项技术(xMAP:flexible Multi-Analyte Profiling)的检测平台,用于蛋白质,免疫学等等领域的研究,临床诊断试剂的开发方面也发展迅速,自身免疫鉴别诊断试剂等已通过了FDA认证。 默克密理博与路明克斯2010年最新推出的新一代磁珠多重检测系统MAGPIX,主机采用了革命性的光学系统及流路系统,使得新的MAGPIX结构上更加紧凑,在光路设计上采用了全新的LED激发光源及高分辨率的CCD成像技术,配合功能强大的xP

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DNA的限制性内切酶酶切反应技术

限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)是指识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。本实验是掌握DNA的限制性内切酶的酶切技术。 DNA的限制性内切酶酶切反应技术 [实验原理] 1. 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA 序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。 它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP 的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA 分子,然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4 至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列:5"- GAATTC-3"),有少数酶识别更长的序列或简并序列。Ⅱ类酶切割位点在识别序列中,有的在对称轴处切割,产生平末端的DNA 片段(如Sma:5"-

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叶绿素a、b含量的测定(分光光度法)

一、原理 叶绿素a、b在长波方面最大吸收峰分别位于663nm和645nm。同时在该波长时,叶绿素a、b的比吸收系数K为已知,我们即可以根据Lambert-Beer定律,列出浓度C与光密度D之间的关系式:D663=82.04Ca+9.27Cb …………………………………(1)D645=16.75Ca+45.6Cb …………………………………(2)(1)、(2)式中的D663、D645为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时的光密度。Ca、Cb为叶绿素a、b的浓度,单位为每升克数。16.75、45.6为叶绿素a、b在波长645nm时的比吸收系数。解方程式(1)(2),则得:此时,CT为总叶绿素浓度,CA 、CB为叶绿素a、b的浓度,单位为每升毫克,利用上面(3)(4)(5)式,即可以计算a、b总叶绿素的浓度。二、仪器药品 扭力天平 剪刀 研钵 移液管 漏斗 大试管 丙酮 碳酸钙 石英砂 721型分光光度计(如有其他精密型号的分光光度计则更好)三、实验步骤 1、提取叶绿素从植株上选取有代表性的叶片数张,于扭力天平上称取0.1g鲜重,剪碎后置于研钵中,加蒸馏水5-6ml,碳酸钙少许及适量的石

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荧光原位杂交技术研究历史、现状及应用

一、荧光原位杂交技术发展历史 1969年,Gall,Pardue和John等人,分别独立建立了同位素原位杂交技术。 1974年,Evans,第一次将染色体显带技术和原位杂交技术结合起来,提高了基因定位的准确性。 1975年,Manning等人,最先在溶液的分子杂交中,使用非放射性标记,通过细胞色素c将生物素与RNA分子连接起来。 1977年,Rudkin等,发明了用间接免疫荧光法检测目的DNA的非同位素原位杂交技术。 1981年,Roumam,首次报道了荧光素标记的cDNA作原位杂交。同年,Langer等,用生物素标记核苷酸制备探针。 1986年,Cremer与Lieher等,分别证实了荧光原位杂交(FISH)技术应用于间期核检测染色体非整倍体的可行性,从而开辟了间期细胞遗传学研究。 二、荧光原位杂交技术的现状 从20世纪90年代至今,FISH在方法上逐步从单色向多色、从中期染色体FISH向粗线期染色体FISH到纤维(fiber)-F ISH发展,其灵敏度和分辨率也有了大幅度提高。1. 多色荧光原位杂交 首先,Cremer等用生物素和汞或氨基乙酰荧光素(AFA)

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植物组织培养和植物快速繁殖

组织培养是一种利用人工培养基(液)使细胞在体外发育和繁殖的技术。除了能够为许多实验提供大量的动植物细胞材料之外,它也是一项克隆植物细胞和个体的实用技术。实际上,在日常生活中必不可少的蔬菜、花卉及粮食作物中,许多种类都是克隆植物,例如,脱病毒马铃薯和红薯、百合和兰花、水稻等等。病毒是威胁园艺和蔬菜种植的主要问题之一。目前仍然没有特效防治药物。事实上,利用分生组织细胞克隆的方法,可以有效地防治病毒。病毒主要通过媒介昆虫或其他原因造成的植物茎叶损伤入侵植物体。在植物细胞中繁殖的病毒还可以不断感染其相邻的细胞,最终扩散至整个植株。但是,发育旺盛的植物分生组织的生长点细胞不含病毒。切取生长点细胞,放入试管培养并使之分化,我们可以获得无病毒的植株。由于外围的生长点细胞也有可能被病毒感染,上述脱毒过程有时需要重复多次之后方能得到完全无病毒的植株。如果将这些无病毒植株切碎进行组织培养,那么,我们可以获得许多无病毒的分生细胞或脱分化的其他体细胞。进一步使这些无病毒细胞繁殖、分化,最终便能够达到大量繁殖无毒植株的目的。早期实验业已证明,在营养成分适当的培养基中,来自植物分生组织的细胞几乎可以无限制地分裂、

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放射免疫标记技术

一、放射免疫标记技术放射免疫标记技术是将同位素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的特异性相结合,以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法,由于此项技术具有灵敏度高 (可检测出毫微克(ng)至微微克(pg),甚至毫微微克(fg)的超微量物质,特异性强(可分辨结构类似的抗原)、重复性强、样品及试剂用量少、测定方法易规范化和自动化等多个优点。因此、在医学及其他生物学科的研究领域和临床实验诊断中广泛应用于各种微量蛋白质、激素、小分子药物及肿瘤标志物等的分析与定量测定。二、放射免疫测定(RIA)放射免疫测定(Radio immunoassay,RIA)是1959年Yalow和Berson首先创建的经典放射免疫分析技术,用于血清中胰岛素含量的测定。30多年来,由于此项技术灵敏、特异、并已制成多种标准试剂盒,使用方便,应用范围十分广泛。目前国外已成功地应用RIA检测的物质多达300余种,国内研究的被测物质也达百余种,试制的RIA试剂盒已有60余种,是测定各种微量物质不可缺少的手段。基本原理:RIA是标记抗原和未标记抗原对有限量抗体的竞争性结合或竞争性抑制反应。在RIA反应系统中,标记抗原(Aundefined)、末标

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氨基柱的使用和保养

按柱子说明书的方法去做即可,进口柱一般都有详细说明。不同品牌的柱子可能不尽相同。我的phenomenex色谱柱说明书上把氰基柱列为正相柱(其实也可用于反相色谱),保存时用异丙醇或正己烷。柱效下降时的清洗程序为:用做正相柱时其清洗过程为氯仿、异丙醇、二氯甲烷10倍柱体积依次冲洗;用做反相柱时其清洗过程为5%乙腈水溶液、四氢呋喃、95%乙腈10倍柱体积依次冲洗。氨基柱的使用:需要注意的是,氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解,所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备,特别是当你的使用条件是反相条件下时。反相条件下使用时,要特别注意控制PH值范围,PH值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以,在使用后以及准备长时间放置该柱时,必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。有一种情况是,当使用氨基柱进行酸性物质如果汁的分析时(分析其中的糖份),酸性物质的存在意味着质子的存在,可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。这时,Kromasil专家所

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蛋白激酶你知道多少?

蛋白磷酸化是多种信号转导途径中的重要环节,细胞内大部分重要的生命过程都涉及蛋白磷酸化。蛋白激酶很多,根据其底物蛋白被磷酸化的氨基酸残基种类,可将它们分为 5 类,其中丝氨酸/苏氨酸 (Ser/Thr) 蛋白激酶又可分为以下几类。 (1)蛋白激酶 A(protein kinase A,PKA)即 cAMP 依赖性蛋白激酶。全酶存在胞浆,被 cAMP 激活后,催化亚基可:① 调节代谢;②调节离子通道;③调节其他信号转导途径的蛋白;④ 进入细胞核调节基因表达。 (2)蛋白激酶 C 即 Ca2+和磷脂依赖的蛋白激酶,受 Ca2+ 、DAG 和 PS 激活。根据其活化需不需要 Ca2+ 、DAG 和 PS 分为 11 种亚型。PKC 底物非常广泛,包括参与信号转导的底物,如表皮生长因子受体、胰岛素受体、T 细胞受体(TCR)、Ras、GTP 酶活化蛋白等;参与代谢调控的底物,如膜上的通道和泵;调节基因表达的底物,如转录因子、翻译因子、S6K、Raf 激酶等。调节基因表达的底物,如转录因子、翻译因子、S6K、Raf 激酶等。PKC 广泛分布于各组织的胞质,以 Ca2+依赖的形式从胞质中移位

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各种检验采血管的使用操作技术(含图)

一.促、抗凝采血管的介绍(一次性自动定量真空采血器) 一次性自动定量真空采血器是由硅化真空采血管与双向采血针组合而成,巧妙的利用真空负压的原理,将采血管抽成不同的真空度,以达到自动定量的目的,是集采血与盛血为一体的新型采血、验血工具。 简 便 快 捷 预先添加各种添加剂,无需临时配制。 一针多管,减少重复操作,减轻患者痛苦。 实现采血与检验一管操作,直接上机,节省检验操作时间。 准 确 可 靠 确保真空,采血量准确,并采用独特的硅化处理技术,能确保血样的原始性状。 抗凝剂配比科学,检测结果可靠。 采血与检验可全程封闭,避免血样在操作中被污染。 国际通用标记,易于辩认、选择和分类。 安 全 有 效 采血管加盖安全帽,提高了采血和检验的安全性。 全封闭系统,能避免交叉感染。 减少因溶血或异常凝血而导致的误检和再检。 采血管与世界知名品牌检验仪器兼容,操作简单。 减少因样品中微血块引起的仪器堵塞。二.我院使用的4种采血管: 1、桔黄色管帽(生化管): 管内含促凝剂(促使血液快速凝固,便于析出血清备用),用于抽取生化标本,量5毫升,自动控制,但由于质量问题,

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双重或多重荧光串色处理

在两种或两种以上荧光素之间,如果荧光发射峰很近,那么荧光光谱彼此会有部分重叠,检测时可能出现一种荧光素的信号扩散到另一荧光通道的情况。这种现象称为串色或荧光光谱交叉(crosstalk)。避免或排除光谱交叉干扰的方法通常有以下几种: 1. 使用几种荧光素时,尽量选择相互之间无光谱交叉的荧光素。 2. 降低标记荧光强度:样品的一种或几种荧光强度太高,有时会导致光谱交叉出现。采用降低标记物浓度、缩短标记时间及调整荧光素介质等方法可降低样品荧光强度。 3. 采用序列扫描方法:主要是指用不同波长激光轮流照射样品,同时在相应的荧光检测通道轮流采集,并显示每种荧光的共聚焦图像。对于双重荧光染色样品其具体操作过程是:首先只用一种激光激发相应的第一种荧光物质,在第一通道显示其荧光图像;再用另一种激光激发另一种荧光物质,在第二通道显示其荧光图像。相应的顺序扫描软件能够将两通道的不同荧光图像同时分通道显示并叠加合成,展示出两荧光间空间定位关系。依此类推,用顺序扫描方法还可以采集三重或更多重荧光样品的图像。 4. 修改光谱检测仪器的检测条件:在图像上出现比较弱的荧光交叉信号时,可通过改变仪器的检

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噬菌体爆发及应对措施

我们做的是大肠杆菌的基因工程菌。前段时间连着三批都感染了噬菌体,每天一批,我们做的是60T发酵罐。噬菌体爆发迹象:1、PH一直回升,会比较高(我们正常是7.00,回升到7.8)。2、DO也很快回升,会上升到130%多。3、发酵液变稀,OD值很快下降。4、镜检看不到任何菌体。5、爆发的时间一次比一次提前,都是发酵前期。噬菌体爆发的速度很快,也就那么30分钟左右,当时我们刚刚移种也就那么发酵周期3~5h,太可怕了;你 想正常的发酵罐也就那么30分钟,一下子全部都没有了;爆发之后全厂进行漂白粉喷洒,新洁尔灭喷洒,甲醛熏蒸;连续几天每天都是做卫生;个人观点: 噬菌体爆发原因分析1、当时车间更换了新的领导,没有对于环境卫生给予重视;2、当时车间也进行改造,卫生只是稍微做,连续有4个月;3、车间改造,把消毒的整气,一些小排气都排放在车间内部,而且是直接排放到空间,导致整个车间的湿度比较大;4、当时车间设计时不合理,导致大罐一楼蛇管循环水排放直接到地面,导致地面长期有大量积水,有时地板都有长霉;5、化验室人员没有培训到位,取样直接排放,没有经过废液桶就直接排放到取样槽内;还有化验人员对于测

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DNA酶切实验(图)

采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。单酶切操作比较简单,但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同(主要是盐离子浓度不同)或反应温度不同,这时可以采用如下措施解决: 1)先用一种酶切,然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切; 2)先进行低盐要求的酶酶切,然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求,加入第二种酶进行酶切; 3)使用通用缓冲液进行双酶切。具体要根据酶的反应要求进行,尽量避免星号活力。 一、 材料、试剂和仪器 1 材料:质粒DNA 2 试剂:限制性内切酶、ddH2O 3 仪器:微量移液枪,离心机,水浴锅, 电泳仪,紫外透射观测仪 注:酶切的选择原则一般是尽量扩大酶切体系,这样抑制因素得以稀释;基因组DNA或质粒DNA酶的用量较一般DNA大,一般为1μg/10U;所加酶的体积不能超过酶切总体积的1/10,否则甘油浓度会超过5%,会产生星号活力;对难切的质粒或基因组DNA应延长反应时间4—5hr, 甚至过夜。灭火限制性内切酶活性可以采用加热灭活,乙

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放射性废物管理规定

1. 主题内容与适用范围本标准规定了放射性废物的产生、收集、处理、运输、贮存及处置等各个环节在设计和运行中的管理目标和基本要求。本标准适用于核燃料循环各阶段所产生的放射性废物的管理,也适用于同位素生产和应用中所产生的放射性废物的管理。其他核设施及实践所产生的放射性废物的管理亦应参照执行。2. 引用标准GB 8703 辐射防护规定GB 9133 放射性废物分类标准GB 11806 放射性物质安全运输规定3. 术语3.1 放射性废物含有放射性核素或被放射性核素污染的,其放射性核素浓度或放射性活度水平大于国家规定的豁免值,且不进一步利用的任何物质。3.2 多重屏蔽由两道或两道以上独立屏障组成的系统,以其延滞或阻止核素的迁移而将废物与人类环境相隔离。它包括废物体、容器、其他工程屏障、安放介质及其环境。3.3 废物管理一切与放射性废物的产生、收集、处理、贮存、运输和处置有关的活动,包括操作运行和行政管理。3.4 废物处理改变废物的性态以获得安全或经济效益的操作,包括净化、浓缩、减容、固化、包装等。3.5 固化将废液或其他形态的废物转化成稳定的固体。3.6 废物体废物的物理或化学的形体(例如水

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干细胞成骨诱导后的染色方法和步骤

碱性磷酸酶(ALP)是成熟成骨细胞的标志性酶,同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。 以ALP为目标物的检测方法: 1 Gomori钙钴法 【染色原理】 ALP在pH值9.4的环境下,以镁离子作为激活剂,能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸,磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙,再与硝酸钴作用形成磷酸钴,经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。 【孵育液配制】 3%β-甘油磷酸钠5ml 2%巴比妥钠5ml 蒸馏水10ml 2% CaCl2 10ml 2% MgSO4 1ml 【步骤】 (1)将无菌的玻片放入培养皿中,传代时加入适量的细胞悬液,作细胞爬片,呆细胞长满玻片后取出。 (2)PBS冲洗后用冷丙醇固定10min,蒸馏水冲洗数次。 (3)入孵育液中,37℃孵育4-6h。自来水冲洗数次。 (4)2%硝酸钴中浸3-5min,蒸馏水洗数次。 (5)1%的硫化铵中2min,自来水冲洗,自然干燥,封固。 【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。 2 偶氮偶联法: 【孵育液配制】 萘酚AS-

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EDTA-胰蛋白酶的配制

问:请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用!多谢!答:1、胰酶是0.25%,这是质量体积比,就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意,尽量不要用水来溶,因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是0.02%-0.1%,根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的,容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响,因此使用时要甚重。如果影响贴壁,但消化时必须要用,那么在用完全培养基终止消化后,可离心弃上清,再加完全培养基培养,可去除EDTA。如果对贴壁没影响,那么可不离心。3、EDTA的浓度也是质量体积比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意,血清可终止胰酶的作用,但不能终止EDTA的作用,对有些细胞来说,终止消化后的离心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH 为8左右的时候最易溶解,在配制时可先滴几滴NaOH将pH调至8,注意,胰酶可使溶液变酸,所以要边溶边测pH,随时调整。注意,不可加过量NaOH,否则过碱,细胞会受不了。6、胰酶EDTA相对比较难溶,可用磁力搅拌器,或放入4度冰箱过夜,待溶解后过滤除菌。7、可配2-3乘的胰酶,这样比较节约时间和滤器,用的时候对上

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小麦花药和花粉粒的发育

小麦花药和花粉粒的发育   本实验以小麦为材料,取不同发育时期的花药永久制片进行小麦花药和花粉发育过程的观察。并取发育适期的麦穗进行小麦花粉母细胞减数分裂过程和由小孢子发育为成熟花粉粒过程的涂片观察。   华北地区冬小麦大约在四月下旬至五月初期叶抽出叶鞘2—5厘米时,花药中花粉母细胞进行减数分裂。此时小麦穗不同部位的小花中花药长度约为1—2毫米。取此时的麦穗不同部位小穗固定切片,可获得减数分裂不同阶段及小孢子时期的小麦花药制片。固定的麦穗并可用来作为观察减数分裂过程的涂片材料。五月十日前后小麦开始扬花,麦穗不同部位小花中的花药长度在2-3毫米左右,固定后可制取自单核花粉粒至成熟花粉粒的制片。及供涂片观察用。   小麦每朵小花中有三枚雄蕊。每个花药由四个花粉囊构成。小麦花药壁层也包括有四层不同的细胞,最外层为表皮,向内依次为药室内壁、中层和绒毡层,而中层仅为一层细胞。小麦花粉粒为三细胞型,即成熟花粉粒中包含有一个大的营养细胞和二枚精子。观察时,可与百合花药和花粉粒发育情况进行比较,了解其共同点与区别。   (一)不同发育时期小麦花药制片观察  

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16通道多导生理记录仪(图)

1、【仪器名称】:16通道多导生理记录仪。 2、【仪器型号】:MP150型。 3、【生产厂家】:美国BIOPAC公司生产。 4、【检测适用范围 】:选购放大器及相应换能器可以完成以下生理信号测量:心电、脑电、肌电、眼电、胃肠电、诱发电位、神经电位、细胞电位、有创血压、无创血压、dP/dt、体温、肌张力、呼吸波、呼吸流速、组织血流速度、血管血流量、氧气含量、二氧化碳含量、血氧饱和度、无创心输出量、光电脉搏容积、皮肤电阻、电刺激。 5、【仪器使用优点、缺点】:是目前世界上应用广泛,功能强大的电脑化多导电生理记录仪。具体的优点如下: MP150型16通道多导生理记录仪主机 (一)MP150多导生理记录仪硬件性能参数   1) 16个模拟数据采集通道   2) 16个数字输入通道   3) 2个模拟输出通道   4) 1

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超滤技术的应用

在生物大分子的制备技术中,超滤主要用于生物大分子的脱盐、脱水和浓缩等,并具有成本低,操作方便,条件温和,能较好地保持生物大分子的活性,回收率高等优点。超滤分离法的典型用途1.对蛋白质、酶、DNA、单克隆抗体、免疫球蛋白进行浓缩和脱盐2.药物、激素的分析3.从PCR扩增的DNA中去除引物4.去除标记的氨基酸和核苷酸5.HPLC样品制备6.样品的除蛋白7.从生物体液、发酵肉汤培养基中纯化抗生素、激素和药物8.从细胞悬液、裂解液中回收生物分子9.对蛋白质、酶、细胞、DNA、生物分子、抗体和免疫球蛋白进行10.常规意义的实验室浓缩和脱盐11.哺乳动物细胞的收集12.清洗细胞、纯化病毒、去除细胞碎片、除热源浓缩使用超滤来增加所需大分子溶质的浓度,即大分子被超滤膜截留而小分子和溶剂可自由通过,从而达到浓缩的目的。梯度分离按分子大小梯度分离样品中的溶质分子时,超滤是一种经济有效的方法,适用于分离分子量相差10倍以上的分子组分。在超滤过程中,虽然截留的大分子被浓缩,但滤过的溶质分子仍保持初始的浓度。脱盐/纯化脱盐即从大分子溶液中去除盐、非水性溶剂和小分子物质的过程。通过换缓冲液,可以最有效地去除溶液中

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实时定量PCR完全手册

方法简介所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着 PCR 反应的进行,PCR 反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线。RT-qPCR是由三个步骤组成1、反转录:依赖反转录酶将RNA反转录成cDNDA2、扩增:用PCR的方法扩增cDNA3、检测:实时检测和定量扩增的产物RT-qRCR影响分析可靠性关键点(Key porint)1、分析结果依赖于模板的数量、质量以及合理的检测方法设计2、反转录反应的非标准化影响试验的稳定性3、数据分析应该高度客观,如果不合理的分析,从分析结果中会得到混淆的错误结果,因此通过对RT-qPCR的每一组分进行质量评价以达到最小化变异性,最大化可重复性,而且还需要沿用一个通用的数据分析的指南。对基因表达分析的标准化的需要是与人类临床诊断分析相适应的。QRT-PCR 抑制物的组成QRT-PCR抑制物严重减少

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