一、免疫胶体金技术的基本知识1、胶体金的概念氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。2、免疫金标记技术胶体金颗粒表面负电荷与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。胶体金对蛋白质有很强的吸附功能，蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面，无共价键形成，标记后大分子物质活性不发生改变。3、胶体金的示踪原理金颗粒具有高电子密度的特性。金标蛋白在相应的配体处大量聚集时，在显微镜下可见黑褐色颗粒或肉眼可见红色或粉红色斑点。免疫金银染色：利用金颗粒可催化银离子还原成金属银这一原理，通过银颗粒的沉积，在光镜下可见抗原抗体反应的阳性部位呈现银的黑褐色。二、胶体金的制备1、胶体金制备的注意事项（1）玻璃容器的清洁：玻璃容器应绝对清洁，用前酸洗、硅化。（2）试剂、水质：实验用水一般用双蒸水。缓冲液有足够大的缓冲容量，浓度不应过高以免金溶胶自凝。2、常用方法一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、白磷。（1）柠檬酸三钠还原法：取0.01％氯金酸水溶液100 ml加热至沸，搅动下准确加入１％柠檬酸三钠水溶液0

1.原理 DNA定量分析是DNA分子操作过程中一个必不可少的过程，常用的有两种方法。 （1）紫外光谱分析法。核酸分子（DNA或RNA）由于含有嘌呤环和嘧啶环的共轭双键，260nm处有特异的紫外吸收峰，其吸收强度与核酸浓度成正比。核酸分子的单链、双链之间的转换，对光吸收水平有一定影响，但其偏差可用特定的公式进行校正。 （2）EB荧光分析法。EB即溴化乙锭，它能插入DNA或RNA的碱基对平面之间并与之结合，结合后能在紫外光的激发下产生橘黄色荧光。荧光强度与被结合 的EB的量成正比，而被结合的EB的量又与核酸分子长度和数量成正比，所以荧光强度可以初步代表DNA含量。该方法经济简便，但准确性较低。 2. 材料 （1）DNA标准液。 （2）EB储存液（10mg／ml）。 （3）5×SDS加样液：50％甘油；0.5％SDS；0.1mol／L EDTA；0.1％溴酚蓝；0.1％二甲苯青FF。 （4）0.1×TE溶液。

【实验目的】 　　1、掌握蛋白质序列检索的操作方法； 　　2、熟悉蛋白质基本性质分析； 　　3、熟悉基于序列同源性分析的蛋白质功能预测，了解基于motif、结构位点、结构功能域数据库的蛋白质功能预测； 　　4、了解蛋白质结构预测。【实验内容】 　　1、使用Entrez或SRS信息查询系统检索人脂联素（adiponectin）蛋白质序列； 　　2、使用BioEdit软件对上述蛋白质序列进行分子质量、氨基酸组成、和疏水性等基本性质分析； 　　3、对人脂联素蛋白质序列进行基于NCBI/Blast软件的蛋白质同源性分析； 　　4、对人脂联素蛋白质序列进行motif结构分析； 　　5、对人脂联素蛋白质序列进行二级结构和三维结构预测。【实验方法】 1、人脂联素蛋白质序列的检索： 　　（1）调用Internet浏览器并在其地址栏输入Entrez； 　　（2）在Search后的选择栏中选择protein； 　　（3）在输入栏输入homo sapiens adiponectin； 　　（4）点击go后显示序列接受号及序列名称； 　　（5）点击序列接受号NP_004788 （adiponectin p

丁香园网友ronghong_2000的观点：我们实验室最近一次的情况:我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但是由有经验的老师操作也出现这种问题，陆续对培养液，血清及胰酶进行培养也没发现问题。同时培养箱也有本实验室保存的3t3细胞进行培养，生长快，很快铺满，仔细观察也可以见到少量的黑点。后来还有从军科院过来的Hela细胞，没有使用我们的血清，直接吸出多余的培养液后，进行培养，传代后用原来吸出的培养液进行培养，同样发现了问题。可以发现如下的特点：（1）与细胞共生，细胞长的好或密度大的话，小黑点就少，反之则 多；（2）对抗生素无效；（3）可能通过培养箱空气进行污染；（4）单用培养液及血清培养没发现问题。（5）换掖冲洗后也无效。以下是论坛里我找来的相关帖子内容：“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物，“黑胶虫”的分类目前尚无鉴

丁香园网友freett的问题为：我是新手，第一次培养细胞，按照师姐的配方配了0.05%EDTA－trypsin,但发现消化了十五分钟后，细胞还是基本上全贴在瓶壁上，请问各位高手，这可能是什么原因？丁香园网友重剑无锋的观点为：1、最有可能是你的培养液没有去除干净，因为培养液可以中止消化。所以建议用PBS冲洗两次。然后再加EDTA.2、加大EDTA的浓度 ，可以选择0.1％与trypsin混合使用，加大以上溶液的体积，可以用2ml。3、37度温度要够。4、实时查看，当看到镜下细胞折光度有改变，就是有作用，然后用培养液将细胞冲洗下来。丁香园网友cherrypie的问题为：现在我发现胰酶消化不下细胞，0.25%胰酶，我在培养箱里孵育了5min，竟然还贴壁贴的很好，实在没办法了。请各位高手帮帮忙吧，我怕消化时间长了对细胞有伤害，所以只能放弃消化，就吹打，可是大部分是吹不下来的。丁香园网友xinglinzi的观点为：1、用冰D-Hank's液洗细胞两次；2、用刚解冻的冷的胰酶（注意不要37度孵育）1-2ml/100ml的培养瓶，开过口的和时间长的都不用。我遇到过的情况和你的一样，37度孵育的消化不

一、单糖发酵试验(一)、实验原理单糖发酵是将葡萄糖，乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内，使其最终浓度为 0.75~1％。并加入一定量酚红指示剂及小倒管，制成单糖发酵管，接种细菌经37℃培养18~24小时，若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄，若能分解 甲酸有CO2和H2等气体形成，小倒管内则聚集有气泡；不分解，则指示剂不变色。(二)、实验材料1．菌种：大肠杆菌，伤寒杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。2．培养基：葡萄糖发酵管，乳糖发酵管等。(三)实验方法1．将伤寒杆菌，大肠杆菌按照液体接种方法分别接种于葡萄糖及乳糖发酵管内。2．置37℃孵箱培养18~24小时。3． 观察结果：由于一些细菌能分解某种糖类产酸，所以培养基中PH下降到7.0以下，在酚红指示剂的显示下，培养基颜色由红变黄。产酸者以“+”表示，如果同 时产生气体，则培养基中小倒管内有气泡出现，此乃产酸又产气，以“⊕”表示，不分解，则指示剂不变色，用“-” 表示。(四)、实验结果伤寒杆菌 大肠杆菌葡萄糖 + ⊕乳 糖 - ⊕二、V-P(Voges-Proskauer)试验(一)、实验原理有些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙

实时定量PCR以其精确、快速、方便，越来越多的应用在科研、临床及检验检疫的各个领域。但是定量PCR是对精确性要求很高的实验，实验的条件对实验结果的影响非常大。在此谈谈体系优化的问题，希望对做相关试验研究的战友有所帮助。1、基本参数的优化： 1）MgCl2的浓度：在PCR反应中，MgCl2的浓度对酶的活性是至关重要的，不仅如此，合适的MgCl2的浓度还能在反应中得到较低的Cp(crossingpoint)值（指PCR达到指数扩增期时，产生一定的荧光高于背景并为仪器所识别时的循环数），较高的荧光信号强度以及良好的曲线峰值。所以对其的浓度选择应慎重。一般来说，对以DNA或cDNA为模板的PCR反应，应选择2－5mM浓度的MgCl2，对以mRNA为模板的RT－PCR而言，则应选择的浓度为4－8mM。2）模板的浓度：如果研究者是进行首次实验，那么应选择一系列稀释浓度的模板来进行实验，以选择出最为合适的模板浓度，如果条件困难，也至少要选择两个稀释度（高和中、低浓度）来进行实验。一般而言，使Cp位于15－30个循环比较合适，若大于30则应使用较高的模板浓度，如果Cp小于15则应选择较低的模板深度。对

生命活动与蛋白质的动态变化密切相关, 很多情况下某些蛋白质是通过各种翻译后修饰来完成或改变其功能。在数量众多的蛋白质翻译后修饰中，蛋白质磷酸化修饰无疑是最重要的一类，它是指通过蛋白激酶（Protein kinase，PK）介导的酶促反应把磷酸基团从一个化合物转移到另一个化合物上的过程[1]（Figure 1所示），是生物体内存在的一种普遍的调节方式。现今发现的所有人类蛋白质中超过30%可被磷酸化修饰，这一修饰在细胞信号的传递过程中占有极其重要的地位，与生命活动的许多过程都密切相关，对此的研究已经成为蛋白质科学的热点之一。 磷酸化多肽（主要指肽链中的酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸残基的侧链羟基被磷酸化生成酸式磷酸酯的修饰多肽）是研究蛋白质磷酸化过程的必不可少的工具，它可作为磷酸酶模型底物，或作为可产生抗磷酸化蛋白抗体的抗原，也可以在确定磷酸化蛋白的物理参数时作为参考化合物等[3]。因此磷酸化多肽的合成在过去的几年中吸引了相当大的兴趣，目前已确定了较为成熟的合成路线，使磷酸化多肽的合成趋于常规。目前磷酸化多肽的合成主要有两个策略：后磷酸化法（Global phosphoryl

奥林巴斯高端物镜系列之三 ——TIRFM物镜 全内反射荧光显微镜（TIRFM）是一门非常复杂的光学技术，目前已经被细胞生物学家和神经科学家广泛应用，成为了细胞-基底接触区域内的丰富的细胞生命活动最强有力的探测方法。如细胞膜内蛋白质的动力学过程，基底附近的细胞骨架，细胞运动等。 TIRFM技术依赖于斜射光线在两种不同折射率光学介质表面产生的极浅的消逝波。该效应产生的条件是入射介质折射率大于折射介质，并且斜射照射到光学界面时入射角大于全反射临界角。 TIRFM分为棱镜型和物镜型。棱镜型TIRF显微镜采用棱镜产生衰逝波，并用物镜收集荧光成像。但棱镜型TIRFM需要在标本上方安装价格昂贵的棱镜系统，而且安装棱镜还会使透射光观察技术受限制，并会造成标本振动。而对物镜型TIRFM而言，则可以克服以上缺点。物镜型TIRFM的物镜既作为收集样品荧光信号的接受器，同时又作为发生全反射的光学器件。因此高数值孔径的物镜的使用是物镜型全内反射荧光成像系统的关键。 由于细胞的典型折射率为1.33~1.38，因此要实现全内反射，在物镜型全内反射荧光成像系统中物镜的数值孔径（NA）必须大于1.38（N

一、前言 最近看了一些丁香园中制剂技术讨论版项下关于流化床使用的讨论帖和求助帖，园内很多热心的战友，如Wangbaigang在“流化床制粒经验分享”一文中,已经对相关经验进行了部分总结。此外，在一些求助帖中，很多非常有价值的解答，常常隐藏在众多内容相近的重复回答，不准确的回答，还有的是明显错误的回答中。这些有很大的价值的结论性回复，读过之后感觉过于分散，很难系统查询。如zhangxingwang在2007年07月27日“流化床静电”求助帖回复的“加滑石粉作用不大，还是加一点十二烷基硫酸钠比较好”这一结论具有较高的实用价值，但很难直接查到。因此有必要对流化床使用的一些基本知识和有较高价值的回帖进行总结，以便使更多的同仁可以在短时间内找到问题的原因，至少在研究阶段不犯低级错误。同时结合自己的经验对这些结论进行分析，解释说明，在这一过程加入了更多的原创性的经验，以七言口诀的形式同各位分享。 需要说明的是，使用流化床过程出现的问题是错综复杂的，很多问题不具有普遍性，特别是当前不同生产企业之间生产的流化床差异较大，很多问题与设备本身有关，因此，不将此类问题纳入讨论范围。当你所使用的流化床

供组织学诊断用的优秀常规染色剂，不仅须使细胞核和细胞浆有选择性着染，也要使结缔组织着色。苏木素-伊红染色的切片适当分色，可使这些结构得以区分，胞核表现为蓝色，胞浆和结缔组织纤维呈各种色调的粉红，因此这是一种最常用的常规染色剂。一、苏木素-伊红染色的基本原理苏木素是最早用于 生物 学上的天然染色剂之一，百余年来，一直是 生物 学实验室最常用的组织学中细胞核的染料，它是从苏木树的树心中提炼出来的，为浅褐色结晶或淡黄褐色的粉末状物。易溶于乙醇、甘油，也可溶于热水。苏木素本身没有染色能力，它经过氧化后，能产生具有染色能力的苏木红，苏木红又称为氧化苏木素或苏木因。苏木素变成苏木红的过程叫作“成熟”。成熟的方法一般有两种：一种是把配制好的苏木素液在开口瓶中放置两个月以上，让其在日光和空气中的氧的作用下使之氧化。故一般地盛苏木素的瓶子放在向阳处，时间愈长，染色的效果愈好。常配制一大瓶，备长期使用。另一种方法是在苏木素液中加入氧化剂，如磺酸钠，过锰酸钾，氧化汞，双氧水等。用这种方法成熟与用第一种方法者不同的是，它放置时间愈

第一节 实验动物的抓取和固定 在进行实验时，为了不损伤动物的健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，首先要限制动物的活动，使动物处于安静状态，工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。抓取动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解。操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴，不能恐吓动物，同时，要爱惜动物，使动物少受痛苦。 一、小鼠 小鼠性情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，将小鼠置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，即可将小鼠完全固定。在一些特殊的实验中，如进行尾静脉注射时，可使用特殊的固定装置进行固定,如尾静脉注射架或粗的玻璃试管。如要进行手术或心脏采血应先行麻醉再操作,如进行解剖实验则必须先行无痛处死后再进行。 二、大鼠 大鼠的门齿很长，在抓取方法不当而受到惊吓或激怒时易将操作者手指咬伤,所以,不要突然袭击式地去抓它，取用时应轻轻抓住其尾巴后提起，置于实验台上，用玻璃钟罩扣住或置于大鼠固定盒内，这样即可进行尾静脉取血或注射。如要作腹腔注射或灌胃等操

(一)　原理 Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低(<20mosm／kg H２O), 粘度也很小，可形成高达1.3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由 于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒， 还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。 (二)操作方法及注意事项 1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。 Percoll浓度(％)　　70　　　　60　　　　50　　　　40　　　　30　　　　　20

PCR检测微量感染因子时，容易因为污染的而导致各种问题，因此，进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。（1）划分操作区：目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行：① 标本处理区，包括扩增摸板的制备；②PCR扩增区，包括反应液的配制和PCR扩增；③ 产物分析区，凝胶电泳分析，产物拍照及重组克隆的制备。各工作区要有一定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。如：标本制备→PCR扩增→产物分析→产物处理。切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区。（2）分装试剂：PCR扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA：①PCR用水应为高压的双蒸水；② 引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制；③ 引物和dNTP应分装储存，分装时应标明时间，以备发生污染时查找原因。(3) 实验操作注意事项 尽

华之风问：请教园里战友，本人拟用siRNA转染做平滑肌细胞，观察基因沉默后效果的，但是我们实验室环境不太好，细胞培养容易污染，想加双抗，但不知道加双抗对基因转染沉默有无影响，谢谢！丁香园网友hainblue认为：有影响的，以前用脂质体转染的时候，说明书上说的是转染时不要用含有抗生素的培养基。他的解释是可能引起细胞死亡。具体怎么样就不知道了，比较试剂很贵，没钱作者方面的尝试。丁香园网友laugh认为：大多数不可以，因为增加了细胞通透性，抗生素的进入会增加细胞的死亡，但Qiagen的hyperfect系列可以，具体原理不知道，不过价格比较昂贵，当时因为细胞比较珍贵，就用了，效果不错，就是心痛银子。丁香园网友wlnju认为：一般的说，在实验操作之前，如果你的细胞里没有细菌污染的话，一般4~6个小时很难突然长出菌来，比如做mtt实验，mtt完全可以在普通环境里加入细胞培养上清。做转染时，在转染试剂和转染介质（我们用OPI-MEM）里，不需要添加抗生素，等转染结束后，换为普通培养基时，再加入适量的抗生素，因为血清会去除转染试剂的影响，所以这时候加抗生素对细胞没有多大影响。我是这么做的，没问题。放

无菌操作基本技术1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株

1. miRNA是什么？具有什么作用？ 答：microRNAs（miRNA）是一种内源性非编码小分子RNA，一般具有18到25个核苷酸，其序列在进化上高度保守，通过靶向特定mRNA来调节基因的表达。 miRNA是越来越受关注的转录后调控网络（post-transcriptional control）中重要的调控因子。首先，miRNA结合到核糖核蛋白（Ribonucleoprotein，RNP）复合物中，形成RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex, RISC），然后通过不完全的碱基互补靶向到目标mRNA的3’UTR区，再通过引导酶切影响了mRNA的稳定性，或直接阻碍翻译过程，从而介导特异mRNA靶标的转录后基因沉默。 2. RIP技术是什么？ 答：RIP技术（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA结合蛋白免疫沉淀），是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应

拉曼光谱技术是一种非接触，无损的快速检测技术，能方便地给出物质的结构、组分等指纹信息，并且能从分子层面上识别各类物质及晶型结构，非常适合用于制药过程及药品检测。 虽然红外吸收光谱技术已经广泛地应用于制药行业，但其具有一定的局限性。与红外吸收光谱相比，拉曼光谱具有如下明显的技术优势： 光谱分辨率更高，能给出更多的光谱细节，信息更加丰富； 拉曼测试简单，不需要制样。红外需要制样，对于某些硬度高的样品，制样尤其困难； 具有更好的共焦显微性能，空间分辨率达到亚微米级，可给出样品的精细化学组分分布图像； 可在线原位分析； 可更加直接的与多变量校正、回归分析结合，从而进行定量分析。 以上特点决定了拉曼光谱在制药的各个环节中都具有巨大的应用潜力，如：原料筛查；过程监控，包括反应、晶化、配药、干燥、混合等；晶型识别；有效成分和赋形剂的表征等。以下列出几个HORIBA Scientific的拉曼光谱仪在药物中的典型应用： 1. 成份鉴别 拉曼光谱给出物质的结构、组分及官能团等信息，是物质的指纹图谱，可方便地鉴别、区分各类药物的成分。 下图为咖啡因、阿斯匹林、对乙酰氨基

一、试验目的了解并掌握垂直板凝胶电泳的使用方法。二、实验原理聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳是以聚丙烯酰胺凝胶做支持物的一种区带电泳，由于此种凝胶具有分子筛的性质，所以本法对样品的分离作用，不仅决定于样品中各组分所带净电荷的多少，也与分子的大小有关。其次，聚丙烯酰胺凝胶电泳还有一种独特的浓缩效应，即在电泳开始阶段，由于不连续pH 梯度的作用，将样品压缩成一条狭窄区带，从而提高了分离效果。聚丙烯酰胺凝胶具有网状立体结构，很少带有离子的侧基，惰性好，电泳时，电渗作用小，几乎无吸附作用，对热稳定，呈透明状，易于观察结果。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂的作用下，聚合交联而成的含有酰胺基侧链的脂肪族大分子化合物。三、仪器和试剂仪器电泳仪、垂直平板电泳槽、微量注射器、灯泡瓶、移液器、染色与脱色缸、量筒、滴管。试剂1. 丙烯酰胺(单体，简称Acr)2. 1%琼脂3. N，N，N，，N，—四甲基乙二胺(TEMED)4. N，N，—亚甲基双丙烯酰胺(交联剂，简称Bis)5. 过硫酸铵(聚合时的催化剂)6. 试剂A(pH8.9)：36.6g 三羟甲基氨基

免疫沉淀材料：1， 蛋白A 或蛋白G2， 一抗3， 免疫沉淀缓冲液：20 mM 磷酸钠, pH 7.5, 500 mM NaCl, 0.1% SDS, 1% NP40, 0.5% 脱氧胆酸钠 and 0.02% 叠氮化钠.（> NOTE: 50 mM 醋酸钠缓冲液, pH 5.0,. 500 mM NaCl, 0.1% SDS, 1% NP-40 and 0.02%叠氮化钠 也可作为免疫沉淀的缓冲液，能提高蛋白G的结合功效）4， 洗脱液：0.1 M 甘氨酸-HCl buffer, pH 2.55， SDS-PAGE 上样缓冲液 (pH 6.8)： 2% SDS, 62.5 mM Tris 碱, 10% 甘油, 2-5% 2-巯基乙醇,步骤：1， 用50 µl免疫沉淀缓冲液溶解抗原，向溶液中加入1倍过量的特异性一抗。加入免疫沉淀缓冲液至样品体积为0.2 ml。一般情况下，在此体积下2-5µg的纯化抗体能够较好地形成抗原抗体复合物。2， 样品4°C.孵育过夜。3， 将适量的蛋白A或蛋白G加到抗原抗体复合物中(~ 50 µl of gel per 5 µg of ant