相关专题 细胞培养 （Cell Culture）专题： http://ask.bbioo.com/special/experiment/Cell culture.htm 许多动物细胞能够分泌蛋白质，如抗体等，但是单个细胞分泌的蛋白质的量是很少的，怎样才能获得大量的分泌蛋白呢？这就要借助于大规模的动物细胞培养了。 动物细胞培养所用的培养液（液体培养基）与植物 组织培养所用的培养基的成分是不同的。动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。培养的动物细胞大都取自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，将组织取出来后，先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞，然后配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将该悬浮液放入培养瓶中，在培养箱中培养，这个过程称为原代培养。细胞在培养瓶中贴壁生长。随着细胞的生长和增殖，培养瓶中的细胞越来越多，需要定期地用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中培养，这称为传代培养。 细胞培养（Cell Culture）专题： h

体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH 等诸多方面的要求。一、营养成分1. 氨基酸：所有细胞都需要 12 种必须氨基酸：缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。2. 单糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。细胞对葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖最低。 体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。3. 维生素：生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素 B12 都是培养基常有的成分。4. 无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。二、促生长因子及激素各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态(分化或未分化)具有十分重要的作用。有些激素对许多细胞生长有促生长作用，如胰岛素，它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生长，泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。三、渗透压细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有

相关专题 目是什么单位?目与微米怎么换算? 解释(一) 筛子内径(μm)≈14832.4/筛子目数。计量单位目粒度是指原料颗粒的尺寸,一般以颗粒的最大长度来表示。网目是表示标准筛的筛孔尺寸的大小。在泰勒标准筛中,所谓网目就是2.54厘米(1英寸)长度中的筛孔数目,并简称为目。 泰勒标准筛制：泰勒筛制的分度是以200目筛孔尺寸0.074mm为基准，乘或除以主模数方根(1.141)的n次方(n=1，2，3……)，就得到较200粗或细的筛孔尺寸，如果 数2的四次方根(1.1892)的n次方去乘或除0.074mm，就可以得到分度更细的一系列 的筛孔尺寸。目数越大，表示颗粒越细。类似于金相组织的放大倍数。 目数前加正负号则表示能否漏过该目数的网孔。负数表示能漏过该目数的网孔，即颗粒尺寸小于网孔尺寸;而正数表示不能漏过该目数的网孔，即颗粒尺寸大于网孔尺寸。例如，颗粒为-100目~+200目，即表示这些颗粒能从100目的网孔漏过而不能从200目的网孔漏过，在筛选这种目数的颗粒时，应将目数大(200)的放在目数小(100)的

无血清培养基产品选择指南 无血清细胞培养 基天然培养基优 点更利于细胞生长;性能更加一致 ;容易进行纯化和下游加工 ;细胞功能的精确评估 ;增强生长和/或产量 ;生理反应性的较好对照 ;增强细胞内中介物的检测 ; 可以消除来自血清的不均一性;可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害;增加确定性;在培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。提高了细胞培养的可重复性，避免了由于血清批次之间差异的影响;供应充足、稳定。血清含许多对细胞有利成分，能够提供丰富的营养组分;有促生长效果;局限性配制无血清培养液必须使用高质量的水，在无血清培养基中通常要加入激素和生长因子;有化学限定性;价格昂贵; 细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养基的保存和应用不如传统的合成培养基方便，针对性强，一种无血清培养基仅适合某一类细胞的培养。成分不明确;血清保存期短(至多一年)，不能排除血清中含有易变物质;使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞

上皮细胞培养 1 ）表皮细胞培养 1． 取材：取外科植皮或手术残余皮肤小块，以角化层薄者为佳，早产流产儿皮肤更好，切成 0.5 ～ 1 平方厘米小块。 2． EDTA 处理：先置入 0.02 ％ EDTA 中室温置 5 分钟。 3． 冷消化：换入 0.25 ％胰蛋白酶中，置 4 ℃过夜。 4． 分离：取出皮肤，用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。 5． 温消化：取出表皮单独处理，用剪刀剪成更小的块后，置入新的 0.25 ％胰蛋白酶中， 37 ℃再消化 30 ～ 60 分钟。 6． 用吸管轻轻反复吹打，使成细胞悬液。 7． 培养液：通过 80 目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸上清，直接加入 Eagle 液和 20 ％小牛血清，制成细胞悬液，接种入碟皿中， CO2 温箱培养。 2） 乳腺组织培养 直接培养法：（适于培养含纤维少的软组织） 1． 在含有少量培养液或 Hanks 液的容器中，用锋利刀片将组织反复切割成碎块。 2． 把

在园子里浏览了很多次，发现关于乳鼠心肌细胞培养的资料还是几年前的比较多，不知道是不是这几年已经做得很少了。我是今年刚开始做的，发现虽然说方法已经很成熟了，但是做起来还是会有很多的问题的，所以把自己所犯错误总结如下：心肌细胞搏动差，取材后2、3天细胞活力明显下降。 当时我们一开始出现这个问题的时候，首先考虑是不是消化过度的问题，我们用的是0.1％的胰酶消化的，每次的时间都是6分钟左右（消化几次后，组织物少时会缩短时间），以前实验室做的时候也没有问题，后来改用0.08％的胰酶还是不行，又考虑是不是血清，我们用的是Hyclone特级胎牛血清，南美血缘的，考虑是不是不如北美血缘的好，又把实验室各种血清试了一遍，结果还是不好，又检查了CO2温箱的温度和湿度是不是稳定。我们把能换的东西都换了一遍，血清，胰酶浓度，培养板，CO2气，最终我们请教了另外的做心肌细胞培养的人，换用胰酶＋胶原酶II混合消化的方法，并且每次消化前都轻柔的吹打让组织充分和消化液混合，消化后也充分吹打后静置1－2分钟再吸上清，最后离心完成后，用培养基重悬沉淀是要充分吹打，以避免再下一步过滤时大量的丢失细胞。还要保证种板的密

小鼠XX细胞药物干预后两种蛋白的磷酸化酪氨酸水平检测 实验分组：小鼠XX细胞，按下面分组进行药物干预培养，并收集细胞进行免疫沉淀实验。 1正常对照组2高糖组3高糖+E药物4高糖+A药物(25μM)5高糖+A药物(50μM)6高糖+A药物(100μM)7高糖+A药物(100μM)+B药物（1mM）8高糖+C药物(25μM)9高糖+C药物(50μM)10高糖+C药物(100μM)11高糖+C药物(100μM)+B药物（1mM）12高糖+D药物(25μM)13高糖+D药物(50μM)14高糖+D药物(100μM)15高糖+D药物(100μM)+B药物（1mM） 免疫沉淀过程实验试剂：A抗体（santa cruz，IP浓度 1:100）；B抗体（santa cruz，IP浓度 1:100）；Protein A+G Agarose（上海维景生物）蛋白样品的准备：1).对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS洗涤一次，然后加入500微升至2毫升细胞裂解液裂解细胞。可以使用嘉美生物Western及IP细胞裂解液或各种RIPA裂解液等进行细胞的裂解。 2).对于组织样品参考贴壁细胞使

目录 一、细胞 二、一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态 培养基 细胞复苏 冻存细胞 明胶包被 细胞传代 三、体外分化 培养基 包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片） 体外分化方法 四、移植细胞的准备 细胞 多能性胚胎干细胞产生于小鼠胚泡 1．表达绿色荧光蛋白（EGFP）的B5-ES细胞。由Dr. Nagy的实验室制备。 2．D3-ATCC; CRL-1934. 我们得到时大约传了17代。 3．J1-由Dr. Jaenish的实验室友情提供。我们得到时大约传了7－9代。 4．J1rtTA-rtTA表达J1细胞，由Dr. Jaenish的实验室友情提供。 5．表达黄色荧光蛋白的YC5-ES细胞，由Dr. Nagy的实验室提供。 一般培养--维持ES细胞处于未分化状态 ES细胞培养用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培养基来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种

一、抗生素除菌法：用BM－1（截耳素衍生物）和BM－2（四环素衍生物）抑制支原体 1．抗生素制备：均可用PBS配成250×浓缩液－20℃备用，使用浓度参考《组织培养和分子细胞学技术》117页表6－2。 2．处理：取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养3天后，吸除培养液，再加入含BM-2的1640培养液培养4天，如此连续三个轮回。 3．检测：用33258荧光染色镜检（每个轮回末应检测一次）。 4．培养：清除支原体后的细胞，在不加上述抗生素的培养液中，再传代培养3～4次。 5．镜检：如清除不彻底可再进行处理至纯净为止（一般3个轮回即能被完全消除）。BM-1和BM-2与CIP（4-氟，2-羟基喹啉）联合应用亦可，即先用含BIP培养液培养12天后，再按上述方法处理。 二、加温除菌法：把受污染的细胞置41℃中作用5～10小时。 三、动物体内接种除菌法：把受支原体污染的肿瘤细胞接种在同种动物皮下或腹腔中，借动物免疫系统消灭支原体，而肿瘤细胞却能在体内继续生长，待一定时间后，从体内取出细胞再进行培养繁殖。 四、巨噬细胞吞噬法：从动物腹腔采

L- 谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？ L- 谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后， L- 谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。 L- 谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。 L- 谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。 GlutaMAX-I 是什么？培养细胞如何利用 GlutaMAX-I ？这个二肽有多稳定？ GlutaMAX-I 二肽是一个 L- 谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的 alpha- 氨基用 L- 丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放 L- 谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I 二肽非常稳定，即使在 121 磅 灭菌 20 分钟， GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下， L- 谷氨酰胺几乎完全降解。 什么培养基中可以省去加酚红？ 酚红在培养基中用作 PH 值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌

1 血清一定需要加热灭活 　　人们通常通过在56°C加热30分钟的办法，来灭活血清中的补体，以及其中可能的微生物（比如支原体）的污染。加热灭活带来的问题是，血清中的氨基酸、维生素和生长因子等也会不同程度的被破坏。 　　Triglia and Linscott 的研究发现（1），胎牛血清中的补体含量很低，即使在未稀释的胎牛血清中，也观察不到溶血现象。另外37°C的加热能够有效灭活补体。所以对胎牛血清而言，并不需要通过专门的热灭活来灭活其中的补体。 　　早期的血清制备中的滤膜的孔径大于0.22um，不能有效的去除支原体的污染。热灭活可以去除支原体的污染。但是现在血清制备中的终端滤膜的孔径为0.1um甚至小到0.04um，所以血清中一般没有支原体的污染。 　　综合上面的观点，除非有特别的情况，标准厂家生产的胎牛血清一般不需要加热灭活。 　　需要说明的是，有些厂家生产的胎牛血清质量并不符合标准。笔者曾购买过国内一厂家的胎牛血清，没有灭活时细胞生长状态明显变差。所以如果您的胎牛血清来自一家可信度不高的厂家，那么为了安全起见，还是以加热灭活为好。 2 培养液中一

293细胞培养 293细胞是用5型腺病毒75株系转化，含有Ad5 E1区的人胚肾亚三倍体细胞系，是一种E1区缺陷互补细胞系。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham与J.S.Miley于1976年用DNA转染技术构建而成。293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。这三种方式均可用于293细胞的大规模培养。293细胞在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长，也可生长在血清浓度降低的培养基中。单层培养细胞在5-10％FBS-DMEM中能生长很好。一般来讲，1:10传代后，一周可以长满。严禁过度生长，这点很重要。因为会导致细胞密度加大和堆积，影响病毒斑的形成和转染，传代时也不易打散。悬浮的293细胞很容易大规模培养，但不容易长期保持稳定。293细胞在传代120次以后，其表型可能改变，生长状况不再完全是单层的了，偶尔会形成局部的细胞成团聚集，应立即抛弃，重新引入新传代的细胞。 293细胞培养特性： 1、293

1.如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI- 1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM） 2.为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 3.L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？ L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。 4.GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？ GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的α－氨基用L－丙氨酸来保护。一种肽酶

方案1 1．细胞培养材料：取病人手术切下的病理性瘢痕组织及其周围正常组织。 2.取材部位：前胸、四肢等，病人年龄从3到35岁，瘢痕生长时间为6个月到1.5年。 3.采取组织块贴壁法进行成纤维细胞培养。 4．过程：在手术室无菌条件下将手术切下的病理性瘢痕及周围正常组织小心去除表皮及皮下脂肪组织，然后在超净工作台上用眼科剪刀将组织剪成大小约 0.5-1mm3的小块，加入少量小牛血清，接种于培养瓶中，在95%空气,5%CO2, 37°C, 饱和湿度条件下培养24小时，使组织块牢固贴附于瓶壁。 然后加入适量含20%小牛血清、100U/ml青霉素、100ug/ml链霉素的DMEM培养液继续培养，每周两次换液。 约3-4周，原代培养细胞生长成细胞单层。用0.25%胰蛋白酶消化以后，以1：2的比例传代培养。每隔两天用含10%小牛血清的DMEM培养液换液一次，待细胞铺满瓶底后传代。实验选用3-10代细胞。 方案2 1. 1 　材料　瘢痕组织:医院整形或烧伤科或烧伤科提供。DMEM 培养液(美国Gibco 公司产) ;小牛血清 1. 2 　方法　手术切取病人的瘢痕组织,在无菌条件

1. .培养人脐静脉内皮细胞： 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 新生儿脐带 由重庆医科大学附属第一医院提供。在无菌条件下，于健康产妇分娩后立即取新生胎儿脐带。长度>20 cm，两端扎紧投入到4℃脐带保存液中，1 h内送细胞培养室。 1．1．2 仪器与试剂倒置相差显微镜(日本Olympus公司)；超净工作台(苏州净化仪器厂)；5％C02培养箱(美国Heraeus公司)；离心机(上海安亭仪器厂)；25cm2培养瓶、六孔培养板(美国CA)star公司)；胎牛血清(美国Gibco公司)；促内皮细胞生长添加物(ECGS)、M199培养基、I型胶原酶(美国Sigrna公司)；明胶、胰酶(美国A1Tlresco公司)；灭菌生理盐水(锦州医学院附属第一医院制剂室)；鼠抗人Ⅷ因子单克隆抗体、辣根酶标记的二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)。 1．2 方法 1．2．1 试剂配制 ：(1)脐带保存液：生理盐水、葡萄糖100 mmoL／L、100 U／ml青霉素一100 U／m1链霉素。(2)磷酸盐缓冲液(PBs)。(3)D―Hanks液。(4)0．1％ I型胶原酶：用PBS

细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等；二是可以人为地严格控制研究条件，便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响，有利于单因子分析；三是研究的样本可以达到比较均一性。常用的细胞系均是性质均一的细胞，需要时还可采用克隆化等方法使细胞进一步纯化；四是研究的内容便于观察、检测和记录。体外培养的细胞可采用显微镜，电镜等直接观察记录，充分满足实验的要求。另外还具有研究范围比较广泛，研究费用相对经济等优点。 然而，细胞培养也有其局限性。由于培养的细胞脱离了机体复杂的环境条件，其细胞形态和功能都会发生一定程度的改变。尤其是体外反复传代、长期培养的细胞，有可能发生染色体非二倍体改变等情况。因此，应将体外培养的细胞视为一种既保持动物体内原细胞一定的性状又具有某些改变的特定的细胞群体。 由于细胞培养技术的优点是其他实验方法和技术所不能比拟的，所以近年来细胞培养技术在分子生物学、细胞生物学、遗传学、老年学、免疫学、肿瘤学和病毒学等很多领域都得到了广泛的应用

本人把大鼠原代肾小管上皮细胞的取材、培养方法进行了总 结，请分享！ 取材：1.肾小管节段的分离(机械网筛滤过法)： ①取 Wistar 大鼠断颈法处死，立即置入碘伏液中浸泡 5 分钟。 ②将大鼠转移入超净工作台，取腰部切口迅速取出肾脏，置于盛有生理盐水的培养皿中清洗并除去包膜和肾蒂组织。 ③取皮质置于80目筛网上，剪碎成1-2mm3大小组织块，网下放盛有少量生理盐水的培养皿。 ④用玻璃注射器内芯于80目网上充分研磨组织。 ⑤收集 80 目网下液体转移至 100 网筛上，用生理盐水冲洗。 ⑥将100目网上组织用生理盐水冲洗入另一培养皿中，收集置入离心管中。1500 转/分钟离心5分钟，弃去上清。 2 肾小管节段的消化及培养 ①用1.5ml 0.25%胰蛋白酶重悬沉淀，37℃温箱中消化约10分钟。 ②加入3ml(双倍量)含有10%胎牛血清RPMI1640中止消化，1500 转/分离心8分钟，弃上清。 ③加入约3ml RPMI1640 悬浮沉淀，并用吸管充分吹打混匀，接种于培养瓶中。 ④分离肾小管节段接种于培养瓶后，第一天加入少量培养基，置入37℃,5%CO2孵

第三章 细胞培养和转染 1. 细胞培养(HEK293T) 1) 显微镜下观察细胞，细胞生长状态良好，去上清； 2) 加入预热的PBS 3ml, 温柔地清洗细胞,弃去PBS； 3) 用胰蛋白酶消化细胞，通常75cm2 培养瓶的贴壁细胞用3ml 胰蛋白酶于37oC 处理5min； 4) 待细胞脱落后，加入5ml DMEM 培养液(含10%FBS)以终止消化反应，并将 细胞悬液转移入15ml 或50ml 离心管中； 5) 1000rpm 离心5min，去除上清； 6) 加入10ml DMEM 培养液(含10%FBS)，重新悬浮细胞，使细胞充分打散； 7) 进行细胞计数,(4 个大方格细胞数的均值×104 个为每ml 所含细胞数)； 8) 根据细胞计数结果，将适当数量的细胞悬液转接入含有新鲜培养液的培养瓶 或皿中；(第二天做转染，A.Fugene6 法--细胞总量应达4-5×106 /10cm 培养 皿; B. 磷酸钙法: 细胞总量应达3×106 / 10cm 培养皿)； 9) 置于37 ℃ 5％CO2 的培养箱中培养 (注意培养箱应有足够的水分)。 注：以上

上皮细胞培养 1）表皮细胞培养 1．取材：取外科植皮或手术残余皮肤小块，以角化层薄者为佳，早产流产儿皮肤更好，切成0.5～1 平方厘米小块。 2．EDTA 处理：先置入0.02％EDTA 中室温置5 分钟。 3．冷消化：换入0.25％胰蛋白酶中，置4℃过夜。 4．分离：取出皮肤，用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。 5．温消化：取出表皮单独处理，用剪刀剪成更小的块后，置入新的0.25％胰蛋白酶中，37℃再消化30～60 分钟。 6．用吸管轻轻反复吹打，使成细胞悬液。 7．培养液：通过80 目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸上清，直接加入Eagle液和20％小牛血清，制成细胞悬液，接种入碟皿中，CO2 温箱培养。 2） 乳腺组织培养 直接培养法：（适于培养含纤维少的软组织） 1．在含有少量培养液或Hanks 液的容器中，用锋利刀片将组织反复切割成碎块。 2．把组织碎块连同液体注入离心管中，再补加少许培养液，用吸管吹打片刻，置试管架3～5 分钟。吸除上层液可排除非乳腺细胞部分。重复2～3 次。 3．末次处理结束后

1 ） 传代培养细胞染色体显示法 1 ．培养细胞：取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、 80 ％～ 90 ％汇合单层培养细胞。 2 ．加秋水仙素：使用最终浓度为 0.02 ～ 0.8 微克 / 毫升营养液，温箱继续培养 6 ～ 10 小时；或用低温封闭法：把培养细胞置于 4 ℃条件下 6 ～ 12 小时后，再于 37 ℃温箱继续培养 6 ～ 10 小时处理（加秋水仙素）。 3 ．采集分裂细胞：可利用分裂中期细胞体变圆与底物附着不牢特点，此时手持培养瓶，左右反复横向水平摇动，令培养液在培养细胞表面反复冲刷。应用此法可使 90 ％的中期分裂细胞从瓶壁脱落，注意勿用力过猛，以防多量非分裂细胞脱落影响观察。 4 ．离心：收集培养液， 1000 转 / 分钟离心 5 ～ 10 分钟。 5 ．低渗处理：吸除上清液、加入预温至 37 ℃的 0.075M KCl 溶液，在温箱中静置 20 ～ 30 分钟。 6 ．预固定：向悬液中加新鲜 1 ： 3 醋酸、甲醇固定液