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(共享)免疫荧光非特异染色的消除方法

、非特异性染色的主要因素   组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点:   (1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。   (2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。   (3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如Forssman氏抗原),可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。   (4)从组织中难于提纯抗原性物质,所以制备的免疫血清中往往混杂一些抗其他组织成分的抗体,以致容易混淆。   (5)抗体分子上标记的荧光素分子太多,这种过量标记的抗体分子带过多的阴离子,可吸附于正常组织上而呈现非特异性染色。   (6)荧光素不纯,标本固定不当等。 二、消除非特异性染色的方法   消除荧光抗体非特异性染色的方法应根据产生的原因采取适当的方法,常用的方法有以下几种:   (一)动物脏器粉末吸收法   常用肝粉(猪、大白鼠或小白鼠),其次是骨髓粉、鼠脑粉和鸡胚粉等。每毫升荧光抗体中加入肝粉50~100mg,在离心管中充分混匀,在室温中振动2h,4℃中过夜,再搅拌10min,高速离心(3000~1

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免疫学在生命科学和医学发展中的作用

北京大学医学部免疫学系 陈慰峰   第173次香山科学会议于2001年10月28日至11月1日在北京香山饭店召开。47位来自海内外从事免疫学研究工作和对免疫学发展报有极大兴趣的相关学科的科学家及有关人员参加了会议,其中有8位院士(邹承鲁,陈慰峰,巴德年,沈倍奋,闻玉梅,翟中和,施蕴渝,曾毅),9位来自美国、日本、澳大利亚的华人科学家,及28位国内学者。会议不仅汇集了我国杰出的基础与临床免疫学家,还邀请了生化学家、生理学家、结构生物学家、发育遗传学家的加入。使会议得以在高层次上探讨免疫学的多样化发展和与相关学科的融合发层。会议由中国科学院邹承鲁院士、北京大学陈慰峰院士、中国医学科学院巴德年院士、军事医学科学院沈倍奋院士,周光炎教授、金伯泉教授、及王宪教授任执行主席。   会议以“免疫学在生命科学和医学发展中的作用”为研讨主题,请23位国内外优秀的免疫学及相关科学的研究者,按21世纪的生命科学及免疫学展望,免疫学在生命科学、医学、疫苗研制,生物高科技发展及多学科交叉促进科学发展等六方面内容,作了系列主题评述报告,专题报告。主题评述报告的内容包括邹承鲁院士对走向21世纪的生物学的预见,陈慰

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【共享】抗体选择

随着生命科学的发展,围绕蛋白进行的研究越来越多,抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。面临着纷呈复杂的抗体试剂市场,如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。 一、关于特异性的选择: 特异性的选择主要需要考虑四个方面:蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。 1、蛋白特异性: 针对需要检测的蛋白查找抗体,几个细节要区分,重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测,对抗体的要求是不一样的,注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达,则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式,特殊表型的蛋白需要进行序列比对,并结合抗体免疫原序列,查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需要确定具体位点,不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在,不宜一概而论。 2、种属特异性: 同种蛋白不同物种,有着或大或小的差异。目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的,根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。需要参照说明书注明的可反应种属信息。一些稀有种属很难找到抗体,可以通过蛋白的序列比对,选择同源序列免疫的抗体

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【共享】胶体金市场情况

近期内最有市场前景的产品仍是早孕检测。理由是早孕这个技术超级成熟,推广应用的风险小,无须过多的市场培育费用。国内早孕市场的目标客户群很大,而真正的购买客户群比较小,主要是医院。因此,在目标客户和购买客户群之间具有很大的开发潜力。随着时间推移产品的普及力度加大,市场必将进一步扩大,更多的目标客户会向购买客户转型。但这不是小企业进入市场的好选择,目前国内几个大企业在这个方面屡有拼杀,成本之低不是小企业所能承受的。中型企业想做大,到是一个很好的备选项目。 2 市场产品方向分析 人用产品 胶体金技术最早的商品是早孕检测试纸条,目前国内几家大的胶金试剂条生产公司如北京蓝十字、杭州艾康、北京万华普曼、汕头大卫都有早孕类的产品,尤以蓝十字为主,占了国内市场的80%多。该类产品主要包括HCG ,LH ,FSH ,唐氏等,国内的HCG已经被广大客户认可,销售量一直都非常好,但由于技术成熟,参与竞争的厂家多,已经到了靠节约成本降低消耗,量大获利阶段。竞争的激烈程度远远超过了市场的增长速度。该市场产生的大量利润都被几个大厂瓜分,同时低价策略对小型生产企业形成强大的挤压,使得市场份额趋于集中。市场近几年的容量

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细菌感染中的抗原递呈和识别

细菌感染中的抗原递呈和识别   抗胞间细菌免疫的主要特点是抗原的递呈和识别。与病毒相比(主要由MHC Ⅰ分子限制的CD8+ T细胞和MHC Ⅱ分子限制的CD4+ T细胞控制),非传统的T细胞也参与到抗细菌的保护中。这些非传统的T细胞,包含特异性糖脂CD1限制的T细胞和特异性磷脂γδ T细胞。我们刚开始去了解抗原识别和不同T细胞群通过细菌病原刺激的广泛性。从宿主的角度,识别蛋白、脂类和碳水化合物的不同T细胞群的广泛性可加强免疫性。但从病原体看,抗原递呈成为瓶颈。尽管有很多关于病毒系统的机制已经有所描述,但有关细菌方面的却很少见到。 引言 微生物病原根据在宿主中的繁殖方式可分两类。第一类包含绝大多数通过快速繁殖并侵入,天然免疫反应在获得性免疫建立在原细胞前把病原传递到邻近宿主细胞。这类病原体包含百日咳,白喉及上呼吸道病原体和胃肠道病原体。对于这些微生物,抗原递呈和识别是次要的,因为它们是一触即发的,可以迅速扩散到邻近细胞。如果某些原因(在获得性免疫反应开始后)使它们仍然存在于宿主细胞,它们会辐射样迅速生长。高效疫苗在对抗这些敏感感染给我们提供了有益的例子。   第二类病原体引起慢

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(交流)酶标仪单、双波长检测的比较

在用酶联免疫法测定抗原或抗体时,不论是定量试验还是定性试验都要求使用酶标仪进行测定。一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模式,并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有时会不太重视单波长和双波长的选择,对使用单、双波长给测定结果带来的较大差异也不很了解,并且实际工作中也出现了使用单波长检测导致抗HCV部分弱阳性的漏检。因此,本人就酶标仪在选择单、双波长使用方面谈谈个人的体会,供同道参考。 一 材料和方法 1.材料 由上海科华公司提供的乙肝表面抗原测定试剂盒;eppendorf 20-20ul的移液器。 2.仪器 上海科华公司的ST-360酶标仪和BIO-RAD 550酶标仪。 3.方法 底物液配制:底物液A、B各5ml混合,加入微量酶标记物,再加入5ml终止液,呈微黄色,混匀待用;利用上海科华公司提供的乙肝表面抗原试剂盒的酶标板,用94孔中准确加入150ul配制好的上述底物液,另2孔中加入150ul已终止的空白底物液作空白。在BIO-RAD 550酶标仪上分别进行450nm单波长和450nm及655nm(无630nm)的双波长检测,在ST-360上分别进行450nm单波长和4

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中国免疫学会现任和前任理事长陈慰峰院士和巴德年院士

下面是两篇关于中国免疫学会理事长陈慰峰院士的介绍,分别来自北大医学部网站和中科院网站 陈慰峰:男,汉族 上海市人 1935年11月出生 1958年7月毕业于北京医科大学医疗系 中国科学院院士 免疫学教授、博士生导师 陈慰峰教授长期从事胸腺内T淋巴细胞分化研究,首创两类高克隆效应单个T细胞培养系统,揭示出胸腺内T细胞功能发育规律,即免疫功能始显于胸腺皮质型CD4+CD8+中的H-2Khi细胞,经胸腺髓质区分化、发育为功能完全成熟的胸腺迁出细胞; 发现T细胞抗原识别受体(TCR~undefined,基因重排及mRNA转录始于CD4-CD8- 早期T细胞阶段。体外建立小鼠胸腺基质细胞系及克隆,揭示胸腺基质细胞(TSC)经两类信号诱导早期T细胞分化为TCundefined~D的处于发育不同阶段的T细胞,包括CD4+CD8+及CD4+CD8-和CD4-CD8+细胞; 粘分子VLA-6及Laminin结合产生的信号,涉及Pre-T细胞分化表达CD3分子; 证明胸腺髓质型细胞,须经胸腺髓质型TSC诱导,经历功能成熟分化,才发育为免疫功能细胞,从事细胞因子基因克隆、表达、纯化及功能研究。 发现人多种Cytokine基因

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【交流】CCK-8替代MTT

在生物江湖过了这么多年,懂行的人都知道检测细胞活性、凋亡、毒性方面有着各式各样的试剂和方法。而大都有预见性地肯定道CCK-8法是目前最具潜力和优势的细胞活性毒性检测方法。那为什么较早期传统的MTT法,CCK-8法会此被科研和药厂等相关实验人员看好呢?今天就这个方面来和大家做个交流,给点鄙人的见解。 不可否认,曾经MTT法的出现使各实验人员为之振奋。因为MTT法较当时其他细胞活性检测有不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测等优势,随即MTT势不可挡地成为细胞活性检测的主流方法。需知,长江后浪推前浪,辩证地讲,没有什么会亘古不变。而目前CCK-8就以后浪的角色逐渐活跃在生物细胞检测的舞台上,它的一出现就极大地受到我们实验人员的青睐。相比MTT法和CCK-8法,原理是相同的,都是先用试剂将细胞内的脱氢酶还原成甲臜,通过甲臜数量的检测就可以反映细胞的活性。这两者主要的不同就在于MTT法甲臜产物不溶于水,检测它必须先用有机溶剂溶解,而CCK-8法甲臜产物是水溶性的。这能明显看出CCK-8的优势,姑且不讲溶解甲臜的有机溶剂对实验人员有怎样的毒性,光是实验操作步骤、周期、便捷等就有巨大优

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巨好网站推荐:双向电泳技术等等

向急需双向电泳技术等资料的战友推荐: http://www.proteomics.com.cn/paper/ 内容有: “生命科学中的若干关键技术”下载 Proteomic analysis of ubiquitin-proteasome effects: insight into function of eukaryotic initiation factor 5A. Oncogene (2003) 22, 4819-4830.[下载New] 这是目前国内发表影响因子较高的蛋白质组学论文 蛋白质非共价复合物的电喷雾质谱(ESI-MS)研究 重要疾病创新药物先导结构的发现和优化 电喷雾电离质谱及其在蛋白质化学研究中的应用 质谱在糖蛋白研究中的应用(摘要) 生物质谱技术应用及进展(摘要) 生物质谱技术在细胞生物学中的应用(摘要) 质谱在生物、医、药学中的应用 毛细管液相-四极杆-飞行时间串联质谱(CapLC Q-TOF2)及其应用 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)及其应用 电感耦合等离子体—质谱(ICP-MS)在生命科学中的应用 生物体液中蛋白质的亲和

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【共享】曹雪涛教授通讯作者发表CELL

http://www.cnbg.com.cn/html/news/qy/2013/0205/1781.html 来自浙江大学医学院、第二军医大学和中国医学科学院等处的研究人员,在核糖核酸(RNA)病毒逃逸天然免疫杀伤清除机制研究中取得重要突破,证实RNA病毒通过诱导Siglec-G,促进RIG-I降解,抑制了先天免疫反应。这一研究成果发表在1月31号的《细胞》(Cell)杂志上。 文章的通讯作者是现任职浙江大学医学院和第二军医大学的曹雪涛院士,曹雪涛院士是我国著名的免疫学家,主要从事肿瘤免疫治疗和分子免疫学方面的研究,曾在树突状细胞的免疫学和肿瘤的免疫与基因治疗研究方面获得重要成果,曾以通讯作者的身份在Nature Immunology、Immunity、Blood、J Immunol等国内外知名杂志发表论文上百篇。 天然免疫是机体防御病原体感染的第一道防线。病毒感染宿主细胞后,细胞内广泛表达的病原模式识别受体(pattern recognition receptors, PRRs)通过识别病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patter

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【进展|热点】慢性炎症成因 破 解人体“自残”之谜(ZT)

  在刚刚上映的大片《洛杉矶之战》中,我们看到当外星入侵地球,人类动用重武器反击,空军要轰炸洛杉矶。其实,人体也经常上演类似的故事:外部病 原体入侵,人体反击,但也会误伤“平民”。有时人体还会直接把“平民”当成“入侵者”,这就是很多“慢性炎症”的成因。近日,科学家取得突破性进展,有望 **身体“误伤”之谜。   发炎 身体的“军事状态”   “发炎”是最不招人待见的词之一,但是它却是人体为了保卫自己,反击外来进攻而采取的必要措施。在《洛杉矶之战》中,我们看到外星人为了夺取地 球上的水资源而对地球大打出手,而我们的人体在一些细菌、真菌和病毒看来也是“资源”,所以它们想尽办法要“感染”我们,它们会在我们身体里安营扎寨,要 用我们身上的蛋白质制造更多的同胞,这就是“感染”。   为了防止外敌的入侵,人体建立了一套防卫体系,也就是“免疫系统”,它是人体的“国防军”。面对“感染”,免疫系统的反应是“发炎”。拿皮肤发 炎为例,皮肤受伤,各种病原体乘虚而入,人体应急反应,直观感觉包括红、肿、热、流脓水。这就是身体局部由“和平状态”转为“战争状态”的反应。发红是因 为血液大量流向受伤

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【共享】抗体保存指南

抗体保存得当与否,直接决定了抗体的活性和使用效果!如果抗体保存得当,大部分抗体活性都可以维 持数月甚至数年。 本指南以 abcam 抗体保存方法为主,同样也可以应用到其他绝大部分公司的抗体产品! 请谨记!无论何时 请按照说明书推荐的保存条件正确保存抗体! 1、 收到抗体后请务必在 12000rpm 离心 1-5分钟后再打开管盖进行分装和保存! Abcam 的抗体使用非常特殊的储存管,只有在12000rpm离心1-5分钟才能将附着在管壁或盖内的抗体全部 离心下来。即使是在10000rpm离心也会导致离心不完全,导致出现抗体的量不足的现象! 2、 对于 abcam大部分抗体,比较合适的保存方式是分装后保存在 -20度 or -80度 。 ? 对绝大多数抗体来说,保存在-20度是完全足够了。没有任何证据显示保存在-80度会有更多的好处! ? 分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。 ? 分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于 10ul每份。因为分装体积越小,抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响 ? 复融后的分装抗体如果

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超高检测速度的光栅型酶标仪实时监测三维心脏组织的钙流变化

任何一种新药在批准上市前都需要进行大规模的安全测试,新药开发商不仅需要证明他们的药物对治疗疾病有积极的作用,而且还要证明对人的总体健康没有危害。具有潜力的候选药物在进行人体测试前,需要进行大量的临床前检测来估计服药后可能带来的潜在副作用。虽然在实验动物中的检测结果可以用于预计药物的副作用,但是与人类相比,动物模型对药物的响应可能并不相同。研究人员一直在寻找一种合适的体外检测系统,能够尽可能的模拟人体组织或器官在体内生理状态下对药物的响应。 传统的体外检测方法使用二维培养细胞作为测试对象,然而,越来越多的研究表明,从三维培养细胞获得的数据更接近从体内组织获得的数据,而且可以减少由二维培养系统产生的误导性结果(如假阳性或假阴性结果)。 工程化的心脏组织(EHTs)是由人类诱导多能干细胞(iPSC)分化而来的心肌细胞装配而成的三维心脏组织,具有与人类心肌相似的自发搏动频率,非常适合作为分析化合物诱导的心脏毒性的模型系统[1]。化合物引起的心脏

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【整理】《2011-2015年中国器官移植免疫抑制剂市场研究分析报告》

【出版日期】:2011年 【报告格式】:PDF电子版或PPT及图书版 【报告编码】:ZXHD;2157 【联 系 人】:杨经理 【联系电话】:010-6386 9407 15911157705 【邮 件】:yiyaobg@126.com ---更多信息及问题请致电! 报告目录部分: 第一章 器官移植用免疫抑制剂产品概述 第一节 免疫抑制剂发展简史 第二节 新型免疫抑制剂的开发 第三节 临床免疫抑制剂选择及应用 第四节 其它研究进展 一、临床器官移植 二、免疫耐受 三、HLA配型 四、转基因治疗 五、医药学术商业之关系 略…… 第二章 国内外器官移植医疗现状与发展趋势 第一节 国际情况 一、肾移植 二、肝移植 三、肺移植 四、心脏移植 五、胰脏移植 六、性腺移植 七、喉移植 八、骨髓移植 九、角膜移植 略…… 第二节 国内情况 第三章 器官移植用免疫抑制剂背景介绍 第一节 免疫抑制剂发展概况 第二节 各种疫免疫抑制剂单品种主要应用、上市背景 一、细胞因子抑制剂 1、环孢素A、FK506(化学名他克莫司) 2、雷帕霉素(Rapa) 二、 DNA合成抑制剂该类药物 1、硫唑嘌呤(Aza

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(共享)DNA疫苗技术

规范发贴,否则删贴。谢谢合作。 DNA疫苗 1990年Wolff等在做小鼠基因治疗试验时偶然发现,将编码基因的质粒DNA直接注射入动物肌肉细胞内,能在动物体内表达抗原并诱导机体产生免疫应答。这一发现打开了通往新的免疫途径的大门。由于不加任何佐剂或载体,故又称裸DNA免疫。1994年在日内瓦召开的专题会议上将这种疫苗定名为核酸疫苗。核酸疫苗的出现或许将是疫苗发展史上的一次革命。 核酸疫苗的含义,除DNA疫苗外,还包括RNA疫苗,但由于针对DNA疫苗的研究较多,本文将主要介绍有关部门DNA疫苗的研究情况。 一、DNA疫苗的特点 以遗传物质方式直接进入机体的DNA疫苗与传统的灭活疫苗、减毒疫苗及用基因工程技术生产的亚单位纯化蛋白疫苗相比有很多优点: 1、DNA疫苗能诱导B和T-细胞免疫应答。裸DNA免疫能使机体对质粒所编码的抗原产生强烈而持久的细胞和体液免疫应答。 2、更安全。DNA疫苗也是一种亚单位疫苗,不存在减毒疫苗所潜在的转阳危险。由于裸DNA是作为质粒来运载,因此它不需要使用病毒运至靶细胞,这避免了考虑病毒载体的安全性及宿主对病毒载体的免疫性,并使裸DNA比活的病毒疫苗安全。 3

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【共享】POCT的相关技术

POCT 发展很快,主要得益于一些新技术的应用。 POCT 技术的基本原理大致可分为四类: (1) 把传统方法中的相关液体试剂浸润于滤纸和各种微孔膜的吸水材料内 ,成为整合的干燥试剂块 ,然后将其固定于硬质型基质上 ,成为各种形式的诊断试剂条。 (2) 把传统分析仪器微型化 ,操作方法简单化 ,使之成为便携式和手掌式的设备。 (3) 把上述二者整合为统一的系统。 (4) 应用生物感应技术 ,利用生物感应器检测待测物。 有关 POCT 的技术学分类见下表 POCT 的技术学分类 分类 方法原理 简单显色 直接观察 / 半定量 酶标记 免疫学反应 免疫渗滤和免疫层析 免疫学反应 生物传感器 光学和电学方法识别酶和抗体 电化学检测 电子探头对某些化学分子的敏感性 分光光度 光学吸光度 生物芯片 蛋白质之间相互作用 目前应用的具体技术归纳起来主要有: 一 、干化学技术 干化学技术是将多种反应试剂,干燥在纸片上,用被测样品中所存在的液体作反应介质 ,被测成分直接与固化于载体上的干试剂进行反应。加上检验标本后产生颜色反应,用眼观定性或仪器检测(半定量)。适用于全血,

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【进展|热点】Nature Immunology:人体免疫系统的紧急备用策略 (转帖)

近日加州大学圣地亚哥分校医学院以及斯卡格药学院的科学家们在一项新研究中发现当机体先天免疫系统的主要调控因子出现异常时,人体免疫系统会启用一种有效的备用策略保护机体防止感染。研究论文在线发表在12月19日的《自然免疫学》(Nature Immunology)杂志上。 先天免疫系统可保护机体对抗细菌和病毒引起的感染,但当其发生失控时则会引起炎症从而导致慢性疾病例如心脏病、关节炎、2型糖尿病和癌症发生。长期以来核因子NF-κB被视为是机体先天免疫反应的主要调控因子,其主要功能是接收损伤或感染信号,激活基因杀伤微生物并引起炎症。 研究工作是由加州大学圣地亚哥分校药理学著名教授Michael Kari博士领导完成。在新研究中Michael Kari实验室的研究人员利用遗传学工具阻断了实验小鼠的NF-κB信号,并研究了这一基因工程小鼠的免疫功能。然而研究人员意外地发现这些本应对细菌感染高度敏感的NF-κB缺陷小鼠,竟以比正常小鼠以更快的速度清除了可引起皮肤感染的细菌。 “我们发现NF-κB的丧失使得小鼠生成了一种有效的免疫激活分子IL-1β,IL-1β转而可刺激骨髓急剧生成大量的中性粒细胞,

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【进展】Science: 美实现单个抗体绑定到2种不同抗原

美国科学家近日通过研究,打破了一个古老的免疫学教条——一个抗体只能绑定到一个抗原上。他们成功地使一个抗体紧密地绑定到两个不同的抗原上。相关论文发表在3月20日的《科学》杂志上。 这一抗体作用于2种蛋白——血管内皮生长因子(VEGF)和人类表皮生长因子受体2(HER2),前者被认为会促进肿瘤的生长,而后者则在一些侵略性的乳腺肿瘤里高表达。 科学家以前经常发现一些抗体能够松散地绑定到多个抗原上,但一直没有发现或通过操作实现单个抗体特异性地紧密绑定到2个不同抗原上。 在此次研究中,美国加州基因技术公司(Genentech)的Germaine Fuh和同事突变了HER2的抗体,然后在突变体中筛选出了能够同时绑定HER2和VEGF的变异。这是首次创造出能绑定到2种无关联蛋白的抗体。Fuh说:“这将开启双重标靶型疗法之门。” 重点研发抗体疗法的Genmab生物技术公司副总裁Paul Parren表示,结果令人吃惊。他说:“我们以前根本没有这样考虑过抗体,它让人不禁要猜测,这种分子是否也有可能在自然界中存在。” Variants of the Antibody Herceptin That

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【资源】elispot的实验流程

1. ELISPOT 包被抗体: 1. 按1:200比例稀释,将包被抗体加入到4℃储存的1×PBS中,在ELISPOT平板每孔中加入100μl稀释后的包被抗体; 2. 置于4℃冰箱封闭过夜(16小时); 封闭: 3. 弃去包被抗体稀释液。每孔加入200μl含10%牛血清的RPMI1640培养基清洗,放置2分钟; 4. 每孔加入200μl的含10%牛血清的RPMI1640培养基,室温放置2小时; 刺激细胞: 5. 弃去每孔中的200μl的含10%牛血清的RPMI 1640培养基; a) 阴性孔:在11列中加入20μl含10%牛血清的RPMI1640培养基; b) 阳性孔:在12列中加入5μl的10μg/ml的PMA和2μl的1mg/ml的Ionomycin; c) 实验孔:实验孔每孔加入8μl的100μg/ml的多肽; 6. 每孔加入180μl的1.5×106/ml小鼠脾细胞悬液; 7. 37℃ 5%CO2 孵育24小时; 加入检测抗体: 8. 吸弃细胞。每孔中加入200μl去离子水,室温放置5分钟,再次加入200μl去离子水,室温放置5分钟; 9. 每孔

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(交流)SELEX技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment)

请规范发贴,否则删贴,谢谢合作。 抗体是机体免疫系统中最重要的效应分子,具有结合抗原、结合补体、中和毒素、介导细胞毒、促进吞噬和通过胎盘等功能,发挥抗感染、抗肿瘤、免疫调节与监视等作用。抗体的研究始于18世纪末,即1890年德国学者Von Behring证明免疫动物血清中存在抗毒素(抗体)。随后又相继发现了凝集素、沉淀素、溶血素、溶菌素和补体结合素等。 随着DNA结合蛋白研究的深入,受组合化学、抗体库和随机噬菌体肽库技术的启发,Gold等于1990年构建了随机核酸库并从中筛选出与靶蛋白特异结合的核酸配基,命名为指数富集的配基系统进化技术,简称SELEX技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment)。目前已从核酸库中筛选出多种与蛋白质、核酸、小肽、氨基酸、有机物、金属离子等特异结合的配基并应用于临床治疗和诊断。为此,我们提出这样的设想:核酸(脱氧核酸)能否作为抗体分子而替带免疫球蛋白?能否在体外合成抗体分子而改变抗体生产的传统途径,开创抗体工程的新*? 一、抗体的产生途径 抗体的产生途径有三条:一是经典

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