移植排斥反应是反映由移植抗原诱导的免疫应答所致的移植物功能丧失或受者的机体损害的一种免疫损伤。主要原因是供受体间组织相容性抗原的差异。排斥反应有两种基本类型：宿主抗移植物反应（HVGR）和移植物抗宿主反应（GVHR），临床上多见是前者；根据发生的机制、时间、速度和临床表现，HVGR又可分为3种类型：超急排斥反应；急性排斥反应；慢性排斥反应。 　　一、超急性排斥反应 　　超急排斥反应发生在移植物与受者血管接通的数分钟到数小时内，出现坏死性血管炎表现，移植物功能丧失，患者有全身症状。发生的基本原因是受者体内存有抗供者移植物的预存抗体，与抗原结合，激活补体和凝血系统，导致血管内凝血。常见于下列情况：①ABO血型不符；②由于多次妊娠或反复输血等使受者体内存在抗HLA抗体；③移植物保存或处理不当等其他原因。超急排斥发生迅速，反应强烈，不可逆转；需立即切除移植物，否则会导致受者死亡。如果事先认真进行ABO基至Rh血型检查和交叉配合试验，多可避免这种现象的发生。 　　二、急性排斥反应 　　急性排斥反应是排斥反应最常见的

【目的】 保证免疫金标技术检验准确性 【本SOP 适用范围】 免疫金标技术 【该SOP 变动程序】 本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【原理】 氯化金分子在还原剂作用下聚合形成金颗粒，颗粒与颗粒之间因静电作用而相互排斥，使其保持一个比较稳定的胶体状态，故称作胶体金。利用胶体金颗粒的高电子密度及其表面能结合生物大分子(如抗体、SPA、植物血凝素和刀豆蛋白A 等)以 及具有一定颜色等特性，可用光镜和电镜对细胞内抗原进行定位、定性的研究。 【方法学分类】 1. 班点金免疫渗滤试验 固相膜免疫测定中液体在微孔膜中穿过流出呈穿流形式，为斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold filtration assay，DIGFA)，亦有称免疫金溶胶斑点法、滴金免疫测定法等。试验单位为三层反应盒，第一层为过滤器(滤纸层)，第二层为反应膜(NC 膜或MC 膜)上点加有特异性抗原或抗体，第三层为吸水垫料，有称此渗滤装置为滴金反应板。 以双抗体夹心法测dsDNA 为例：试

慢性排斥反应属于迟发型变态反应，发生于移植后数月甚至数年之后，表现为进行性移植器官的功能减退直至丧失；病理特点是血管壁细胞浸润、间质纤维化和瘢痕形成，有时伴有血管硬化性改变。其机制可能为急性排斥细胞坏死的延续；炎性细胞相关的慢性炎症；抗体和细胞介导的内皮损伤；管壁增厚和间质纤维化。本型反应虽然进展缓慢，但用免疫抑制治疗无明显的临床效果。 　　以上属宿主抗移植物反应（HVGR）。移植物抗宿主反应（GVHR）多发生于同种骨髓移植者，也可见于脾、胸腺和小肠移植中；此时患者的免疫状态极度低下，而移植物中丰富的免疫活性细胞则将受者细胞视为非己抗原，对其发生免疫应答；移植物的T细胞在受者淋巴组织中增殖并产生一系列损伤性效应。GVHR分为急性与慢性两型。急性型多见，多发生于移植后3个月以内，患者出现肝脾肿大、高热、皮疹和腹泻等症状；虽是可逆性变化，但死亡率较高；慢性型由急性型转来，患者呈现严重的免疫失调，表现为全身消瘦，多个器官损害，以皮肤和黏膜变化最突出，病人往往因严重感染或恶病质而死亡。 　　移

化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型： 　　（一）化学发光酶免疫测定 　　化学发光酶免疫测定（CLEIA）是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大，具有很高的灵敏度。以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶，发光底物为dioxetane磷酸酯，固相载体为磁性微粒。 　　（二）化学发光免疫测定 　　化学发光免疫测定（CLIA），是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。吖啶酯是较为理想的发光底物，在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。 　　用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件： 　　1.能参与化学发光反应。 　　2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。 　　3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。 　　4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫活性。 　　鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记

随着免疫学理论研究的深入，发现的细胞因子日益增多，并在免疫应答的调节和效应中起着重要作用，其在体内水平的高低直接反映机体的免疫状况。细胞因子检测的方法主要分三类：①细胞生物学活性检测法。②免疫学标记技术，常用ELISA。③分子生物学方法，常用逆转录PCR检测细胞因子的mRNA转录的情况。现以生物活性法为例选择性地介绍几种细胞因子的检测。� 一、人类干扰素的检测� 人类干扰素(humaninterferon，HuIFN)有α、β和γ三种，其中HuIFN-γ由T细胞产生，三种HuIFN都有抗病毒作用，因此可利用病毒的各种生物学特性建立相应的检测方法，如血凝素生成抑制试验，是以人肺癌细胞株A549作为小鼠脑脊髓心肌炎病毒的敏感细胞，将此病毒接种于A549的单层细胞培养中，可产生使人“O”型红细胞凝集的血凝素。若在此培养中加入可能含有IFN的血清标本，由于IFN能抑制病毒在细胞中的生长，而使血凝素产生降低，借助“O”型红细胞的凝集反应判断IFN的活性。本方法既可定性又可定量。� 二、白细胞介素-1(IL-1)的检测� 取肝素抗

近年来，肺癌的肿瘤标志物（tumor marker，TM）研究十分活跃。肺癌常用的肿瘤标志物很多，根据美国NACB准则，这里主要介绍神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胃泌素释放肽前体 （ProGRP）、癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）和鳞状细胞癌相关抗原（SCCA）等几种比较肯定的肿瘤标志物。 表1 国际上不同专家组对肺癌标志物应用的建议 1．神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enol ase，NSE） 是烯醇化酶的一种同功酶，目前认为它是小细胞肺癌（SCLC）和神经母细胞瘤的肿瘤标志物。烯醇化酶同功酶根据α，β，γ三个亚基的不同，可分为 αα，ββ，γγ，αβ和αγ五种二聚体同功酶。α亚基主要存在于肝，肾等组织；β亚基主要存在于骨骼肌和心肌；γ亚基主要存在于神经组织。γγ亚基组成 的同功酶属神经元和神经内分泌细胞特有，故命名为神经元特异性烯醇化酶，此酶在正常人脑组织中含量最高，起源于神经内分泌细胞的肿瘤组织也有异常表达，研 究发现SCLC也是一种能分泌NSE的神经内分泌性质肿瘤。NSE分子

目前已有许多新生物学技术应用于免疫学研究，促进了免疫学的发展，丰富了免疫学检测的内容，使免疫学研究与相关疾病的诊断建立在基因水平，提高了检测的敏感性和可靠性。 � 一、分子杂交技术� 分子杂交的基本原理是根据双链DNA经高温解链成两条互补的单链，降温后又可恢复原来的双链。两条不同的单链分子可根据碱基配对的原则，只要它们的碱基序列同源或部分同源，即可全部或部分复性，此称核酸杂交。用来探测DNA的已知互补片段称为DNA探针，通常是应用已预先经放射性标记或非放射性标记的DNA单链来识别另一核酸分子中与其同源的部分，其特异性和敏感性极高。实验方法有印迹杂交(southern blot)、斑点杂交和原位杂交。目前分子杂交技术已应用于免疫球蛋白分子、T细胞受体、补体、细胞因子以及MHC分子的基因结构、功能及表达等方面的研究。� 二、转基因技术� 转基因技术是近年来生物技术中的一项重大突破。其建立使得动物可不必通过有性杂交即能获得新的基因。其基本原理是通过显微注射或逆转录病毒，将外源性基因导入哺乳动物的受精卵或其早期胚胎，并经分子杂交分析胚胎或其后代组织

抗原(antigen,Ag)──是一类能刺激机体的免疫系统使之产生特异性免疫应答，并能与相应的免疫应答产物在体内或体外发生特异性结合的物质。 1、抗原具有两种特性： （1）免疫原性(immunogenicity)：抗原能刺激特定的免疫细胞，使免疫细胞活化、增殖、分化，最终产生免疫效应物质（抗体和致敏淋巴细胞）的特性。 （2）免疫反应性(immunoreactivity)：抗原与相应的免疫效应物质（抗体和致敏淋巴细胞）在体内或体外相遇时，可发生特异性结合而产生免疫反应的特性。 完全抗原──具有免疫原性和免疫反应性的物质。 不完全抗原/半抗原(hapten)──仅有免疫反应性，而缺乏免疫原性的物质。 抗原的命名和性能 免疫应答刺激物 广义命名 引起

可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。反应中的抗原称为沉淀原，抗体为沉淀素。由于在单位体积内抗原量大，为了不使抗原过剩，故应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。 沉淀反应的种类有环状沉淀、絮状沉淀、荚膜膨胀、琼脂扩散及免疫电泳等。此外还有放射性同位素标记、酶标记等测定法。 1、环状沉淀反应：是一种定性试验方法，可用已知抗体检测未知抗原。将已知抗体注入特制小试管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原与抗体对应，则在两液界面出现白色的沉淀圆环。 2)、絮状沉淀反应：将已知抗原与抗体在试管（如凹玻片）内混匀，如抗原抗体对应，而又二者比例适当时，会出现肉眼可见的絮状沉淀，此为阳性反应。 3、琼脂扩散试验：利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内扩散，若抗原抗体对应，且二者比例合适，在其扩散的某一部分就会出现白色的沉淀线。每对抗原抗体可形成一条沉淀线。有几对抗原抗体，就可分别形成几条沉淀线。琼脂扩散可分为单向扩散和双向扩散两种类型。单

抗原与相应抗体相遇可发生特异性结合，并在外界条件的影响下呈现某种反应现象，如凝集或沉淀，藉此可用已知抗原(或抗体)检测未知抗体(或抗原)。试验所采用的抗体常存在于血清中，因此又称之为血清学反应(serological reaction)。� 一、抗原抗体反应的特点� (一)抗原抗体结合的特异性� 抗原借助表面的抗原决定簇与抗体分子超变区在空间构型上的互补，发生特异性结合。同一抗原分子可具有多种不同的抗原决定簇，若两种不同的抗原分子具有一个或多个相同的抗原决定簇，则与抗体反应时可出现交叉反应(cross reaction)。 (二)抗原抗体结合的可逆性� 抗原抗体结合除以空间构型互补外，主要以氢键、静电引力、范德华力和疏水键等分子表面的非共价方式结合，结合后形成的复合物在一定条件下可发生解离，回复抗原抗体的游离状态。解离后的抗原和抗体仍保持原有的性质。抗原抗体复合物解离度在很大程度上取决于特异性抗体超变区与相应抗原决定簇三维空间构型的互补程度，互补程度越高，分子间距越小，作用力越大，两者结合越牢固，不易解离；反之，则容易发生解离。�

免疫诊断是临床辅助诊断的重要组成部分，为临床疾病的诊断提供重要的参考信息，随着上世纪60年代人们弄清抗体的分子结构和功能后，免疫学诊断技术得到了突飞猛进的发展。 　　在历史上较为经典的免疫诊断是酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA），该方法最先由Engvall和Perlmann两人在1971年发表，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。 　　此方法仍然是目前临床用得最多的检测方法，但酶联免疫吸附试验方法需要在加入受检标本和酶标抗体时有半小时至一小时的孵育时间，中间还须经过数次洗板过程才能加入反应底物进行显色后在酶标仪上完成检测，步骤较为繁琐费时。人们希望能有一种快速、简便的诊断方法来对受检标本进行检测，于是纳米金免疫标记技术和蛋白芯片技术的出现为这一想法提供了突破口。 　　胶体金溶液是指分散相粒子直径在1～150 nm之间的金溶胶，其中中等大小的胶体金（10～20nm）呈酒红色。1974年，Romano等人将胶体金标记在第二抗体（马

用体外或体内试验对机体的各种参与免疫应答的细胞进行鉴定、计数和功能测定，藉以了解机体的免疫状态，并对某些临床疾病的诊断，预后及疗效观察等也具有一定意义。� 一、免疫细胞的分离� 体外测定免疫细胞首先要从外周血或淋巴组织中分离所需的细胞。其主要方法是根据细胞的表面标记、理化性状及功能等方面的差别进行设计。常用的方法有密度梯度离心法辅以花环沉降或亲合板粘附法(panning)等。目前最先进的方法是用荧光激活细胞分离仪(fluorescenceactivited cell sortor，FACS)可自动、快速和大量地分出各类纯度高、活性强的细胞。� (一)外周血单个核细胞的分离 图18.7 淋巴细胞分离(Fieoll密度梯度法) 主要方法为聚蔗糖泛影葡胺分层液(ficoll hypaque)密度梯度离心法。分离人外周血单个核细胞时，通常将分层液的比重配成1.077，肝素抗凝血置分层液上，于水平离心机2000r/min离心20分钟，血液中各种细胞因比重不同而被分开(见图18.7)。此外，分层剂还可选用Percoll、Me

从上世纪30年代来，癌症的死亡率没有得到很大的改观。科学家们希望能通过从复杂的生物样本中分离鉴定出敏感特异的肿瘤特有的标记，来帮助肿瘤诊断，评估预后，评估肿瘤的分期，复发，药物靶位点等。这就是肿瘤标记物，肿瘤标记物首先是通过利用从肿瘤细胞中提取的单克隆抗体发现的。在获得抗血清后，通过免疫吸附去掉正常细胞，留下肿瘤特异性的抗原，筛选并评估这些候选物成为了寻找新的肿瘤标记物的经典方法。但是这种方面费时又耗力，因此寻找一个快速的评估大量潜在的肿瘤标记物方法十分必要。 人类发现的肿瘤标志物已有百余种，但临床常用的仅20多种，能用于大规模人群普查的肿瘤标志物更少。临床上肿瘤的高发生率和死亡率迫切需要新的早期诊断用的生物标志物和新的肿瘤标记物检测技术。 检测肿瘤生物标记物的纳米探针技术 来自浙江加州国际纳米技术研究院，纳奥生物公司的研究人员结合分子生物学和纳米技术，发现了一种能特异快速检测多种肿瘤血清生物标记物的纳米探针技术，能够大大提高肿瘤标记物检测灵敏度和有助于发现新的标记物。 这一技术结合了RNA干扰技术和纳米纤维技术，在国际上首先实现了小干扰RN

补体系统的各组分在体液中通常以非活性状态、类似酶原的形式存在，当受到一定因素激活，才表现出生物活性。补体的激活途径主要有两种，即经典途径和替代途径，此外尚有MBL（甘露糖结合凝集素）途径。 　　经典途径和替代途径两种途径的启动过程不一致，但经典途径的激活可以导致替代途径的活化，反之则不行。 　　补体的其他激活途径即甘露聚糖结合凝集素（MBL）途径，简称MBL途径。此途径开始于急性期蛋白与病原体的结合，而不是抗原复合物形成。 　　1.经典途径：经典途径是以结合抗原后的IgG或IgM类抗体为主要激活剂，补体C1～C9共11种成分全部参与的激活途径。除了抗原抗体复合物外，还有许多因子可激活此途径，如非特异性凝集的Ig、细菌脂多糖、一些RNA肿瘤病毒、双链DNA、胰蛋白酶、纤溶酶、尿酸盐结晶、C-反应蛋白等。经典活化途径可人为地分成识别、活化和膜攻击3个阶段。 　　2.替代途径：替代途径又称旁路途径。它与经典途径的不同之处主要是越过C1、C4和C2，直接激活补体C3，然后完成C5～C9的激活过程；参与此途径的血清成分尚有

1.[临床血液学检验]酸性磷酸酶染色阳性的是（）。 A．CLL的淋巴细胞 B．淋巴肉瘤细胞 C．多毛细胞白血病细胞 D．尼曼－匹克细胞 E．B淋巴细胞 【解析】酸性磷酸酶染色中可见：①粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞、血小板、浆细胞、巨噬细胞呈阳性。②戈谢细胞为阳性反应，尼曼－匹克细胞为阴性反应。③多毛细胞白血病时多毛细胞为阳性反应，淋巴肉瘤细胞和慢性淋巴细胞白血病的淋巴细胞，也呈阳性反应。④T淋巴细胞呈阳性反应，而B淋巴细胞为阴性反应。ABC =================================== 2.[临床检验基础]婴儿消化不良时呈乳凝块便，其主要成分为（）。 A．脂肪 B．变性脂肪 C．酪蛋白 D．脂肪及酪蛋白 E．蛋白质 【解析】婴儿粪便中可见白色、黄色或绿色的乳凝块，提示脂肪或酪蛋白消化不完全。D =================================== 3.[临床血液学检验]某病人拟诊断PNH，下列哪项检查与此病诊断无关（）。 A．Ham试验 B．Rous试验 C．糖水试验 D．

这篇简短的通讯回顾了了EIA和ELISA的历史背景，这两种分析方法是由瑞典斯德哥尔摩大学的Perlmann， Engvall教授以及荷兰的Schuurs和vanWeemen教授独立而同时创造完成的。 当今，在全球医学实验室里广泛应用的全自动分析仪每日可以检测大量的病人标本，其中很多仪器都是运用酶标记的免疫分析技术为检测原理的。自70年代以来，EIA及ELISA的影响主要表现在其作为出现在文献中的频率相当高。临床医师及其病人，实验诊断医师，体外诊断试剂生产商和||世界范围内的卫生保健系统都应该感谢以上四个科学家。对于实验诊断医师，体外诊断试剂生产商等来说，EIA以及ELISA是经常使用的名词。本文简要叙述了酶标记的免疫分析技术的发展历史，从60年代该技术出现，到70年代早期至80年代期间该技术的发展和应用。 第一个出现的EIA和ELISA系统在分析方法是不同的，但是这两中方法都是建立在免疫分析原理的基础之上，用酶进行标记而不是以放射性核素为标记的。两个科研小组同时而又相互独立首先提出了这一设想，并通过必要的实验验证了其可行性。瑞典斯德哥尔摩大学的Perlmann教授和Eng

一．实验课的目的要求 免疫学实验课的目的是加强和巩固对课堂讲授的基本理论的理解和体会，学习和掌握免疫学实验的基本操作技术。为今后的实际工作和科研工作打下基础。为上好免疫学实验课，要求同学做到如下各点： 1.课前务必做好充分预习，明确实验目的、原理、方法及操作中的注意事项，做到心中有数。 2.在实验进程中，严格按照实验指导所列步骤和要求进行操作，坚持实验的严肃性、严格性、严密性。 3.真实记录实验结果，对错误的结果要认真分析，找出原因，得出结论。实验完成后，写出实验报告及时交给老师批改。 4.严格遵守实验室规则，防止各种事故发生。 二．实验室规则 免疫学实验材料，有些是病原微生物，在实验中稍一不慎和防护上的不善，便有发生人身感染的可能。所以要求同学认真遵守下列各点： 1.进入实验室先把个人书包放到指定地点，穿好白大衣，实验台上只放实验指导、记录本和文具。 2.实验室内必须肃静、整洁，不得高声谈笑和随便走动。 3.禁止吸烟、饮食，不能用手抚摩头面，以防感染。 4.实验中如发生割破皮肤及实验材料破损事故，应立即报告教师，进行紧急处理。皮肤

乙型肝炎病毒血清学标志物 乙肝表面抗原（HBsAg）：是乙肝感染的一个特异性标志，是乙肝首先出现的病毒标志物，在急性乙肝的潜伏期，血清中HBsAg即可出现阳性，持续5-6周，于发病后4-5个月内转阴，若阳性结果持续6个月以上，则为乙肝转为慢性感染状态。 乙肝表面抗体（HBsAb）：是乙肝感染后的主要保护性抗体。一般出现于表面抗原消失后以后，在乙肝恢复期缓慢上升，可持续多年。表面抗体表示乙肝恢复，并对乙肝有免疫力。也可见于疫苗接种有效。 乙肝E抗原（HBeAg）：其阳性表明乙肝病毒在肝细胞内复制活跃，血清具有高度传染性，急性乙肝是HBeAg 呈短暂阳性，若持续阳性提示转为慢性。 乙肝E抗体（HBeAb）：出现于急性乙肝的恢复期，比HBsAb出现早，可持续很长时间，HBeAb的出现证明机体对HBeAg有一定的免疫清除能力。当HBeAg 转阴，并有HBeAb阳性常提示HBV复制停止或明显减弱，是急性乙肝病情好转，预后良好的标志。近年来发现，HBeAb阳性，并伴有HBVDNA复制阳性，易发生基因整合现象。易诱导肝硬化，肝癌的发生。 乙

关于Ig 结构与功能的研究，是近40 年来免疫学中的一大突破。在此之前，由于存 在于正常血清中的抗体有异质性，故对其结构的研究十分困难。自发现多发性骨髓瘤病人血清中含有均一的Ig （单克隆Ig） 以及应用酶或还原剂消化和解离Ig 技术，已得出Ig 一般结构的结论。五大类Ig 中，以IgG 的结构和功能研究得最清楚，Ig 的基本结构和功能都是以IgG 为代表说明的。 Ig 分子巨大，含有1000 个以上的氨基酸残基。各类Ig 具有一定的结构 和特点。 1963 年Porter 对IgG 的化学结构提出了一个模式图 （图38 －1），后经许多学者证实，其他几类Ig具有与IgG 相似的基本结构。 一、四肽链结构 所有Ig 的基本单位都是四肽链的对称结构，其中二条为相同的重链 （heavy chain ， H 链），其分子量较大，由440 个氨基酸组成，另二条为相同的轻链 （light chain ，L 链） 其分子量较小，只含214 个氨基酸。重链上结合有不同量的糖，故Ig 属糖蛋白。轻链根据其C 区的化学结构和抗原性的差异分为κ（Kappa） 和λ（Lambda） 二型。

在自身免疫性疾病中，人体组织细胞细胞核的核膜、核内的染色质、非组蛋白，以及核糖核酸（RNA）和相关的蛋白质等都可成为自身免疫反应攻击的靶子，产生抗核抗体（ANA）。其中有不少抗体因对疾病的诊断有高度的特异性，已成为诊断某一类疾病的血清标志性抗体，如抗双链DNA抗体、抗Sm抗体之于SLE，抗SSB抗体之于SS，抗Jo-1抗体之于多发性肌炎/皮肌炎等等。 　　间接免疫荧光法是检测自身抗体的标准技术。其特点是特异性强，通过荧光显微镜镜检能够精确地判断组织或细胞内荧光素的有无或分布，阳性与阴性样品的信号强度对比明显。自身抗原的位置决定了其相应抗体的典型的荧光模型，与此典型模型不相关区域的荧光均为非特异性荧光。另外基质制备容易，不需要复杂的技术就可生产出冰冻组织、细胞和细菌涂片,也不需要纯化抗原，由于保留了原基质的完整抗原谱，因而一块基质片可同时筛查多种不同的自身抗体，获得较高的检测效率。也可以在一个反应区上组合多种基质，类似于马赛克，由于检测项目的温育时间是一致的，易于标准化，特别适合于检测自身抗体谱，如肝病抗体谱等。在某些情况下，用间接免疫荧光法