1.色谱柱中的流动相会排干吗？ 不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。 相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上色 ...
保留时间不重现有两种不同的情况：即保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。如，保留时间的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上，保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。保留时间漂移的几种最常见的原因如下： 一、色 ...
HPLC用水可以通过以下几个方面来得到： 1、专门的纯水机或超纯水机； 2、去离子水重蒸； 3、二次或三次重蒸水； 4、采用类似家用的纯水机； 5、市场上瓶装的纯净水或蒸馏水； 6、其它途径 不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质越高放置时间越短。 理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水，并通过0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。
①、必须是HPLC级的，不与固定相发生化学反应。 ②、对样品有适宜的溶解度，要求k在1～10范围内（可用范围）或2～5（最佳范围）。k值太小，不利于分离；k值太大，可能使样品在流动相中沉淀。 ③、必须与检测器相适应。如用紫外检测器时，不能选用截止波长大于检测波长的溶剂。 ④、粘度小。 ⑤、必须脱气：由于流动相里含有微量空气，经泵的压力作用，会在流通池里产生气泡，这对分析产生一定的影响，如噪音增大，甚至于掩盖信号峰。因此，流动相在使用前必须经超 ...
柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。 1．拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； 2．把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查； 3．将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查； 4．更换柱子 ...
1、在使用前过滤溶剂 2、完全润湿在运输中变干的色谱柱 3、了解溶剂对样品的溶解性及分离的影响 4、对含有保留性较强的杂质组分的样品要进行预处理 5、清除柱填料的局限性：pH、温度、化学兼容性 6、使用新鲜的水溶液，并考虑使用生物稳定剂（如叠氮化钠） 7、定期用强极性的溶剂清洗色谱柱 8、储存色谱柱时，应冲净缓冲言，并用有机溶剂饱和色谱柱（乙腈） 9、避免外力损伤色谱柱：弯曲、跌落或将接头拧的过紧
2、液相色谱流动相 液相色谱应用广泛的是反相色谱，其流动相的优化组合直接关系到分离效果。八十年代二元流动相组成优化依赖于容量因子(k’)的对数值与极性溶剂的摩尔分数关系，根据两者线性关系，可以估算溶质的保留值。曾有人确定过14种二元溶剂系统的容量因子与流动相的关系。Scott，Snyder和Soczeuinski的色谱模型被应用于分离烷基酚和萘酚，使用mBondapakNH2固定相，Nurok和Richard建立 ...
高效液相色谱法（HPLC：HighPerformanceLiquidChromatography）是70年代迅速发展起来的一种分离分析技术，是目前各种色谱模式中应用最广的一个领域，据估计，世界上几百万种化合物中除20%宜用其相色谱分离分析外，其余80%的化合物，包括大分子化合物、热不稳定化合物以及有生物活性的化合物都可以用不同模式的HPLC进行分离分析。 自80年代以来，HPLC以成为国际分析化学界发展最快的一个 ...
原子荧光光谱法(AFS)是七十年代发展起来的光谱技术，它采用氢化物发生技术，既消除了样品基体干扰，简化了HPLC与AFS的仪器接口技术，其价格也较ICP-MS便宜许多，而且联用技术能实现元素的形态分析而不仅是总量分析。建立高效液相色谱与原子荧光光谱的联用技术可以解决上述各种问题，既可以为环境样品和生物样品中汞化合物和砷化合物的形态测定提供方便、可靠的方法，又可以为国产原子荧光的推广提供技术支持，取得显著的社会 ...
反相色谱是迄今在高效液相色谱中应用最广泛的技术，主要是因为它适用于分析极大多数的非极性物质和很多的可离子化的及离子化合物。大多数用于反相色谱的固定相都是天然的疏水物质，因此，分析物是按照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分离的，含有疏水的机制也能以同样的保留方式分离。 固定相上还有少数物质，如混合相（例如苯基－己基）、末端封闭和非末端封闭种类和极性嵌入相－也存在于这些键合硅胶上。还有很多填料用于反相色谱，包括聚合物 ...
保留值等色谱分析有关术语，以及分配系数、分配比、塔板高度、分离度、选择性等方面均与气相色谱相一致；高效液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率理论也与气相色谱一致。因液相色谱以液体代替气相色谱中的气体作流动相，则速率议程H=A+B/？+C？。式中：纵向扩散项（分子扩散项）B/？对板高的影响与气相色谱不同，由于液相色谱中组分分子在流动相中的扩散系数Dm仅为气相色谱中的万分之一，因此纵向扩散项对板高的影响可以忽略不计。于是影响液 ...
FPLC全称为快速蛋白液相色谱（Fastproteinliquidchromatography），其原理与高效液相色谱理论类似，是由经典的液体柱层析引入气相色谱理论，并且对相体进行了改革，配用高压输液泵，采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。 FPLC是专门用来分离蛋白质、多肽及多核苷酸的系统，是HPLC近年来的一项重要革新，它不但保持了HPLC的快速、高分辨率等特性，而且还具 ...
NanoLC-1DPlus液相色谱系统用于纳米喷雾质谱分析，这个色谱系统配置了第三个泵用于快速进样和清洗。是理想的蛋白组学和生物标记发现的研究设备。液相色谱系统NanoLC-1DPlus可以允许高流速的快速进样，因此可以节约大量的时间。第三个泵的操作已经整合到公司专用的EksigentControlSoftware软件中。液相色谱系统NanoLC-1DPlus的特点是新型泵和控制技术，可以以更高的压力在纳米 ...
妙招儿1由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。 妙招儿2三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。 妙招儿3粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的 ...
1.色谱柱中的流动相会排干吗？ 不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上 ...
问：用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？ 关于漂移问题： 1．温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 2．流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 3．柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡 关于快速变化问题： 1．流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 2．泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 3．流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合 问： ...
一、硅胶基质填料 1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（MethyleneChlo ...
来源：中国色谱技术网 与液相色谱柱的性能相关的因素很多，基质（matrix）或者说担体、载体的化学性质、键合相（固定液）的化学性质、填料形状大小粒度分布、碳量和键合度等等。 色谱柱填料可以由基质直接构成，如硅胶、氧化铝、高交联度的苯乙烯-二乙烯苯或者甲基丙烯酸酯等等；也可以在这些基质的基础上涂布或化学键合固定液来构成，如：最经典的各种ODS柱、氨基柱、氰基柱等。 一、我们先来看看各主要基质的特点： 1、硅胶 硅胶是陶瓷性质的无机物基质，刚性大 ...
来源：中国色谱技术网 高效液相色谱法的应用远远广于气相色谱法。它广泛用于合成化学、石油化学、生命科学、临床化学、药物研究、环境监测、食品检验及法学检验等领域。 一.在食品分析中的应用 1．食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等； 2．食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂（合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂等； 食品污染物分析：霉菌毒素（黄曲霉毒素 ...
高效液相色谱法：highperformanceliquidchromatography，HPLC 高速液相色谱法：highspeedLC，HSLC 高压液相色谱法：highpressureLC，HPLC 高分辨液相色谱法：highresolutionLC，HRLC 液固吸附色谱法（液固色谱法）：liquid-solidadsorptionchromatography，LSC 液液色谱法：liquid-liquidchromatog ...
