操作条件对于色谱分离有很大影响。 柱长，柱内径：一般讲，柱管增长，可改善分离能力，短则组分馏出的快些；柱内径小分离效果好，柱内径大处理量大，但柱内径过大，将导致担体不能均匀地分布在色谱柱中。分析用柱管一般内径为3-6毫米，柱长为1-4米。 柱温：是一个重要的操作变数，直接影响分离效能和分析速度。选择柱温的根据是混合物的沸点范围，固定液的配比和鉴定器的灵敏度。提高柱温可缩短分析时间；降低柱温可使色谱柱选择性增大，有利于组分的分离和色谱柱稳定性提高，柱寿命延长。一般采用等于或高于数十度于样品的平均沸点的柱温为较合适，对易挥发样用低柱温，不易挥发的样品采用高柱温。 载气流速：载气流速是决定色谱分离的重要原因之一。一般讲流速高色谱峰狭，反之则宽些，但流速过高或过低对分离都有不利的影响。流速要求要平稳，常用的流速范围每分钟在10-100亳升之间。 固定相：固定相是由固体吸附剂或涂有固定液的担体构成。 （1）固体吸附剂或担体粗细：一般采用40-60目、60-80目、80-100目。当用同等长度的柱子，颗粒细的分离效率就要比粗

　 第一节原子吸收光谱仪的安装和调整 　　一、安装场地的要求 　　1．环境 　　实验时应设置在无强磁场和热辐射的地方，不宜建在会产生剧烈振动的设备和车间附近。实验室内应保持清洁。温度应保持在10~30°C，空气相对湿度应小于80％。仪器应避免日光直射、烟尘、污浊气流及水蒸气的影响，防止腐蚀气体的干扰 　　2．实验台 　　应坚固稳定，台面平整。为便于操作与维修，实验台四周应留出足够的空间。 　　3．排气罩 　　原子吸收分光光度计的上方必须准备一个通风罩，使燃烧器产生的燃烧气体能顺利排。 　　4．电源 　　各个品牌的原子吸收分光光度计以及其各种附件容许的电压范围和功率都有所不同，使用前务必按照说明书的要求进行配置。一般要求为：采用三相供电系统。一相供主机、计算机和打印机。电压为220V±10%，最要接到一个大于1kVA的稳压电源。另一相为石墨炉电源，电流一般为150~300A，不必通过稳压电源，可直接供电。第三相用于空气压缩机、空调和排风设备。为保证仪器具有良好的稳定性和操作安全。，仪器的地线最好接到一块直接埋入地下1m深处的金属板上。 　　5

　　气相色谱毛细柱 　　（键合，聚二甲基硅氧烷） 　　HP-1，DB-1，P-1，CP-SIL5CB， 　　Ultra-1，007-1，RTx-1，AT-1 　　类似固定相：SE-30，SP-2100，OV-1，OV-101，使用 　　温度：-60℃-320℃ 　　应用范围：烷烃，芳烃，多环芳烃，醇，酚，酮， 　　酯，醛，胺，卤代烃，吡啶，糖衍生物，氨基酸衍 　　生物，维生素衍生物，镇痛药，农药，溶剂，胆固 　　SPB-50型中等极性柱 　　醇，香料，咖啡，食品添加剂等。 　　(键合，50%二苯基，50%二甲基聚硅氧烷) 　　对照品牌：HP-50，HP-17，DB-17，RTx-50，AT-50 　　SPB-5型弱极性柱 　　类似固定相：OV-17，SP-2250，使用温度：30℃-310℃ 　　（键合，5%苯基，95%甲基聚硅氧烷） 　　应用范围：烷烃，低沸点芳烃，多环芳烃，醇，甘 　　对照品牌：HP-5，DB-5，BP-5，CP-SIL8CB， 　　油三酸酯，喹啉，卤素化合物，香料，农药，酯， 　　Ul

　一，进样应注意问题： 　　手不要拿注射器的针头和有样品部位、不要有气泡（吸样时要慢、快速排出再慢吸，反复几次，10ul注射器金属针头部分体积0.6ul，有气泡也看不到，多吸1-2ul把注射器针尖朝上气泡上走到顶部再推动针杆排除气泡，（指10ul注射器，带芯子注射器平感觉）进样速度要快（但不易特快），每次进样保持相同速度，针尖到汽化室中部开始注射样品。 　　二、安装色谱柱： 　　1.安装拆卸色谱柱必须在常温下。 　　2.填充柱有卡套密封和垫片密封，卡套分三种，金属卡套，塑料卡套，石墨卡套，安装时不易拧的太紧。垫片式密封每次按装色谱柱都要换新的垫片（岛津色谱是垫片密封）。 　　3.色谱柱两头是否用玻璃棉塞好。防止玻璃棉和填料被载气吹到检测器中。 　　4.毛细管色谱柱安装插入的长度要根据仪器的说明书而定，不同的色谱汽化室结构不同，所以插进的长度也不同。需要说明的如果你用毛细管色谱柱采用不分流，汽化室采用填充柱接口这时与汽化室连接毛细管柱不能探进太多，略超出卡套即可。 　　三、氢气和空气的比例对FID检测器的影响： 　　氢气和空气的比例应1：10，当氢

　2.6、波长示值误差 　　2.6.1、用注射器将紫外波长标准溶液（标准波长为235nm，257nm，313nm和350nm）从检测器入口注入样品池冲洗，并将池充满，将波长调到低于标准波长5nm处，到标准波长+4nm处，测得的最大吸收值处对应的波长与标准波长之差为波长示值误差；目前仪器可以在1ml/min的流量下，直接用空管连接检测器，每隔2min改变1nm，连续进标准样10ul，同样可得波长示值误差。 　　2.6.2、可调波长紫外可见光检测器波长示值误差(此项只适用于HP1100高效液相色谱仪且带有HP工作站)。 　　2.6.3、打开HP1100液相色谱仪和HP工作站，打开输液泵和检测器，用纯水冲洗系统直至稳定，进入Diagnosis窗口，点击氘灯图标，进入showmoduletests状态，点击VWDVLcalibrationtest点击start，系统自动进入校正状态，待校正完毕，将校正结果打印归档。 　　2.6.4、可接受标准：λ≤2nm 　　3、性能确认 　　3.1、使用标准品或供试品，确认仪器性能符合使用要求； 　　3.2、先进行色谱柱的

0.1、输液系统： 　　0.1.1、梯度误差GC不超过±3% 　　0.1.2、泵流量设定值误差Ss＜±2% 　　0.1.3、流量稳定性误差SR＜±2% 　　0.2、紫外检测器性能 　　0.2.1、基线噪声不超过5×10-4AU，基线漂移不超过5×10-3AU 　　0.2.2、定量测量重复性误差（6次进样）RSD≤1.5% 　　0.2.3、最小检测浓度不超过1×10-7g/ml萘/甲醇溶液 　　0.2.4、可调波长紫外可见光检测器波长示值不超过±2nm(HP1100高效液相色谱仪可由仪器自身完成) 　　1、校正条件 　　1.1、环境温度10-30℃，相对湿度低于65% 　　1.2、校正设备 　　1.2.1、秒表分度值小于0.1s 　　1.2.2、分析天平最大称量200g，最小分度值0.1mg 　　1.2.3、容量瓶 　　1.2.4、微量注射器 　　1.3、标准物质和试剂 　　1.3.1、HPLC用甲醇、纯水，分析纯的丙酮 　　1.3.2、1×10-4g/ml，1×10-7g/ml的萘甲醇溶液 　　1.

指直接装填到色谱柱中作为固定相的具有活性的多孔性固体物质。固体固定相大体可分为三类： 　　第一类是吸附剂。如：分子筛、硅胶、活性炭、氧化铝等； 　　第二类是高分子聚合物。如国内的ＧＤＸ型高分子多孔微球，国外Ｐorapak系列等； 　　第三类是化学键合固定相。在气相色谱中，通常是将固定液涂敷在载体表面上。采用化学键合固定相分析极性或非极性物质通常都能够得到对称峰，柱效很高，固定相的热稳定性也有所改善。 　　一般是一种高沸点的有机物的液膜，通过对不同组份的不同分子间的作用，使组份在色谱柱中得到分离。对气相色谱用的固定液，一般有如下几点要求： 　　１、在操作温度下蒸气压低，热稳定性好，与被分析物理或载气不产生不可逆反应； 　　２、在操作温度下呈液态，而且粘度愈低愈好。物质在高粘度的固定液中传质速度慢，柱效率因而降低。这决定固定液的最低使用温度； 　　３、能牢固地附着在载体上，并形成均匀和结构稳定的薄层； 　　４、被分离的物质必须在其中有一定的溶解度，不然就会很快地被载气带走而不能在两相之间进行分配； 　　５、对沸点相近而类型不同的物质有分离能力

高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 　　特点 　　1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。 　　2.高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h。 　　3.高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。 　　4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。 　　5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限

　FID（氢�检测器）的灵敏度高、死体积小、响应快、线性范围广，能有效地与毛细柱联用，成为目前对有机物微量分析应用最广的检测器。FID检测系统主要由检测器、检测电路（放大器）和气路三大部分组成，当发生故障或分析谱图不正常时，应首先判断区分问题是出在哪一部分。 　　FID系统常见不正常情况有： 　　１、不能点火---问题主要出在气路或检测器； 　　２、基流很大---问题主要出在气路或检测器； 　　３、噪音很大---气路、检测器和电路出问题都有可能； 　　４、灵敏度明显降低---气路、检测器和电路不正常都有可能； 　　５、不出峰---气路、检测器、电路不正常都有可能； 　　６、色谱峰形不正常---进样器、气路、检测器为主要检查对象； 　　７、基线漂移严重---气路、检测器都有可能； 　　８、有时有讯号，有时无讯号---问题主要出在电路上。 　　一、检查气路：检查H2（氢气）、N2（氮气）、AIR（空气）流量是否正常，空气流量太小和喷嘴严重漏气就会引起较大的爆�声而不能点火；氢气太小，氮气太大会使点火困难和容易熄火；喷嘴漏气，色谱柱漏气不仅会使

正如人的心脏一样，高效液相色谱仪中的高压恒流泵必须能可靠的运转.但是要做到长时间低维护的可靠运转，就需要对泵有足够的了解，并注意与之有关的事项。 　　目前作为商品出售的高压恒流泵多为往复式柱塞泵，结构原理如图1所示。凸轮与连杆将电机的圆周运动转变为柱塞杆的线性运动，在有单向阀的结构中，柱塞杆将常压下储液瓶中的流动相吸至泵腔后再送出，其耐压可达41MPa。通过改变凸轮的形状和电机的转速及柱塞杆的尺寸可以将流动相的脉动降至最小。如果对泵的各个部分都有清楚的认识，将来排出操作过程中出现的故障就很简单了。 　　单向阀：泵头通常由两部分组成--单向阀和密封圈-柱塞杆。图2是单向阀的示意图。该单向阀一般由阀体\塑料\或陶瓷阀座和红宝石球组成。在压力的作用下宝石球离开阀座(图2-a)，流动相流过单向阀；反之，在反向力的作用下，宝石球回到阀座上(图2-b)，此时流动相不再流过单向阀。显然宝石球与阀座之间的配合必须非常适合才能防止流动相的泄漏。为了保证单向阀不发生泄漏，一些单向阀中安装了两套宝石球和阀座，也有一些单向阀是将宝石球用一个合适的弹簧压在阀座上。在不同的应用领域，单向阀阀体

常用的担体表面并非惰性，它具有不同程度的催化作用和吸附性（特别是固定液含量低时和分离极性物质时）造成峰拖尾和柱效下降，保留值改变等影响，因而需要预处理。现将一般处理方法简述如下： 　　1、酸洗法：用浓盐酸加热处理担体20－30分钟，然后用自来水冲洗至中性，再用甲醇漂洗，烘干备用。此法主要除去担体表面的铁等无机物杂质。 　　2、碱洗法：用10％的氢氧化钠或5％的氢氧化钾－甲醇溶液浸泡或回流担体，然后用水冲洗至中性，再用甲醇漂洗，烘干备用。碱洗的目的是除去表面的三氧化二铝等酸性作用点，但往往在表面上残留微量的游离碱，它能分解或吸附一些非碱性物质，使用时要注意。 　　3、硅烷化：用硅烷化试剂和担体表面的硅醇、硅醚基团起反应，除去表面的氢键结合能力，可以改进担体的性能。常用的硅烷化试剂有二甲基二氯硅烷和六甲基二硅胺。 　　4、釉化：把欲处理的担体在2、3％的碳酸钠－碳酸钾（1：1）水溶液中浸泡一天，烘干后先在870度下煅烧3、5小时，然后升温到980度煅烧约40分钟。经过这样处理，担体表面形成一层玻璃化的釉质，故称“釉化担体”。这种担体的吸附性能小，强度大，当固定液

3、峰面积百分率法以色谱中所得各种成分的峰面积的总和为100，按各成分的峰面积总和之比，求出各成分的组成比率。气液色谱法这时所指的气液色谱法，主要用于各种香料物质的分析，基本条件和参数主要依照美国精油协会（EOA）于1979年所建议的方法。其基本原理、操作、标准状态等均与上述气相色谱法相同。1、柱用304号合金所制不锈钢管，长3m，内径2.16-2.57mm，外径3.18mm。底物：极性柱为聚乙二醇20M（Carbowax20M），分子量约2万；非极性柱为气相色谱级甲基硅氧烷（SE-30），或二甲基硅氧烷（OV-1或OV-101）。底物浓度：重量的105。固体载体：10目或20目熔融煅烧过的硅藻土，经硅烷化和酸洗后，其自由倾落密度为0.2g/cm3，最小120目，最大80目。装填密度每cm3应大于0.24g。2、载气氦。最低流量为每分钟25-50ml。分析状态极性柱：起始温度，最低75度；最终温度，最高225度。升温速度，每分钟2-8度。非极性柱：起始温度，最低75度；最终温度，不超过275度；升温速度，每分钟2-8度。进样温度：225-250度。试样量：0.1-1ul。检

薄层色谱法按各单体所规定的载体，放入适当容器，加入适量水以配成悬浮液，在厚度均匀一致的50×200mm或200×200mm平滑玻璃板上将此悬浮液均布成0.25mm的厚度，风干后一般在110度下干燥0.5-1h（或按单体规定）。以离薄层板一端约25mm的位置作为点样基线，用微量吸管按规定量吸取试样液和对照（标准）液，点于基线上，点与点之间的距离在10mm以上，液点的直径约3mm，风干后，基线一端向下，将薄层板放入展开溶剂，溶剂层深10mm，并预经开展溶剂的蒸汽饱和。在展开溶剂从基线上升至规定距离（一般为15cm）后，取出薄层板，风干，然后按规定的方法，对斑点的位置和颜色进行检查。气相色谱法气相色谱法是在以适当的固定相做成的柱管内，利用气体（载气）作为移动相，使试样（气体、液体或固体）在气体状态下展开，在色谱柱内分离后，各种成分先后进入检测器，用记录仪记录色谱谱图。在对装置进行调试后，按各单体的规定条件调整柱管、检测器、温度和载气流量。进样口温度一般应高于柱温30-50度。如用火焰电离检测器，其温度应等于或高于柱温，但不得低于100度，以免水汽凝结。色谱上分析成分的峰的位置，以

一、应用领域： 1、石油和石油化工分析： 油气田勘探中的化学分析、原油分析、炼厂气分析、模拟蒸馏、油料分析、单质烃分析、含硫/含氮/含氧化合物分析、汽油添加剂分析、脂肪烃分析、芳烃分析。 2、环境分析： 大气污染物分析、水分析、土壤分析、固体废弃物分析。 3、食品分析： 农药残留分析、香精香料分析、添加剂分析、脂肪酸甲酯分析、食品包装材料分析。 4、药物和临床分析： 雌三醇分析、儿茶酚胺代谢产物分析、尿中孕二醇和孕三醇分析、血浆中睾丸激素分析、血液中乙醇/麻醉剂及氨基酸衍生物分析。 5、农药残留物分析： 有机氯农药残留分析、有机磷农药残留分析、杀虫剂残留分析、除草剂残留分析等。 6、精细化工分析： 添加剂分析、催化剂分析、原材料分析、产品质量控制。 7、聚合物分析： 单体分析、添加剂分析、共聚物组成分析、聚合物结构表征/聚合物中的杂质分析、热稳定性研究。 8、合成工业： 方法研究、质量监控、过程分析。 二、分析实例： （一） 天然气常量分析： 选用热导检测器，适用于城市燃气用天然气O2、N2、CH4、CO2、C2H6、C3H8、i-

例1．稠环芳烃分析（环境气体分析） 　　样品：含六苯并苯等8种稠环芳烃的混合物 　　色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站 　　检测器：UV紫外检测器，340nm 　　色谱柱：C18键合相（ODS-224），5μm，柱长25cm，柱径4.6mm 　　流动相：甲醇-二氯甲烷（8：2）混合溶剂 　　流速：1mL/min 　　进样：20μL 　　结果：所有组分在25min之内全部流出，各组分完全分离，组分出峰顺序为：六苯并苯，二苯二萘嵌苯，三苯二萘嵌苯，苯萘并二萘嵌苯，四苯二萘嵌苯，萘六苯并苯，二苯萘并二萘嵌苯，苯菲并五苯。 　　例2．磺胺分析（药物分析） 　　样品：磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲基异�唑和甲氧苄氨嘧啶的混合物 　　色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，740色谱数据处理机 　　检测器：UV481型紫外检测器，波长240nm 　　色谱柱：μ-BondapakC18，5μm，柱长25cm，柱径4.6mm 　　流动相：由KH2PO4（0.05mol/L）和Na2HPO4（0.05mol/L）以及Me

例11．植物甾醇分析（生物制药） 　　样品：含β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇和胆固醇的混合物 　　色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站 　　检测器：Alltech2000型ELSD蒸发光散射检测器 　　漂移管温度为70℃，氮气流速1.6L/min 　　色谱柱：SupecolDiscoueryC18，5μm，柱长25cm，柱径4.6mm 　　流动相：甲醇 　　流速：1mL/min 　　进样：10μL 　　结果：所有组分在19min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为菜籽甾醇保留时间13.70min，峰2为胆固醇保留时间14.62min，峰3为豆甾醇保留时间15.45min，峰4为菜油甾醇保留时间15.97min，峰5为β-谷甾醇保留时间17.05min。 　　例12．甾族化合物分析 　　样品：含孕酮等4种物质的混合物 　　色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，四元梯度泵，色谱工作站 　　检测器：MarkⅡA型ELSDAlltech蒸发光散射检测器 　　漂移管温度为135℃，

1）诊状可能的原因解决方法 　　(一)、保留时间变化 　　1.柱温变化柱恒温 　　2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 　　3.缓冲液容量不够用>25mmol/L的缓冲液 　　4.柱污染每天冲洗柱 　　5.柱内条件变化稳定进样条件，调节流动相 　　6.柱快达到寿命采用保护柱 　　(二)、保留时间缩短 　　1.流速增加检查泵，重新设定流速 　　2.样品超载降低样品量 　　3.键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向 　　4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀 　　5.温度增加柱恒温 　　(三)、保留时间延长 　　1.流速下降管路泄漏，更换泵密封圈，排除泵内气泡 　　2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用碱至钝化柱 　　3.键合相流失同前(二)3 　　4.流动相组成变化同前(二)4 　　5.温度降低同前(二)5 　　(四)、出现肩峰或分叉 　　1.样品体积过大用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15% 　　2.样品溶剂过强采用较弱的

1、检漏先将载气出口处用螺母及橡胶堵住，再将钢瓶输出压力调到0.4～0.6MPa（4-6kgf/cm2）左右，继而再打开载气稳压阀，使柱前压力约0.3～0.4MPa（3-4kgf/cm2），并察看载气的流量计，如流量计无读数则表示气密性良好，这部分可投入使用；倘发现流量计有读数，则表示有漏气现象，可用十二烷基硫酸钠水溶液探漏，切忌用强碱性皂水，以免管道受损，找出漏气处，并加以处理。 　　2、载气流量的调节气路检查完毕后在密封性能良好的条件下，将钢瓶输出气压调到0.2～0.4MPa（2-4kgf/cm2），调节载气稳压阀，使载气流量达到合适的数值。注意，钢瓶气压应比柱前压（由柱前压力表读得）高0.05MPa（0.5kgf/cm2）以上。 　　3、恒温在通载气之前，将所有电子设备开关都置于“关”的位置，通入载气后，按一下仪器总电源开关，主机指示灯亮，层析室鼓风马达开始运转。 　　打开温度控制器电源开关，调节层析室温控调节器向顺时针方向转动，层析室的温度升高，主机上加热指示灯亮表示层析室在加温，升温情况可以由测温毫伏表（根据测温毫伏表转换开关的位置）读得，还可以由插入

症状 故障原因 解决方法 没有压力显示，没有流动相流动 电源问题 接通电源，开机 保险丝被烧坏 更换保险丝 控制器设定不正确或设定失败 a , 采取恰当的设定； b , 修理或更换控制器 柱塞杆折断 更换柱塞杆 泵头内有空气 溶剂脱气、启动泵抽出空气 流动相不足 a , 补充流动相； b , 更换入口滤头

一、气相色谱仪 　　1、晶体管交流稳压电源3KVA220V 　　2、要求电压波动范围在±5％以内，频率偏差±0.5HZ。 　　3、气体 　　N2纯度：参照第二页表1瓶/台岛津公司的氮气导管一根 　　H2纯度：参照第二页表1瓶/台岛津公司的氢气导管一根 　　压缩空气1瓶/台或岛津配套的空压机及导管 　　4、减压阀 　　N2气减压阀1个/台 　　H2气减压阀1个/台 　　空气减压阀1个/台 　　5、仪器桌 　　长×宽×高(mm)2000×700×8001张/台 　　仪器桌要求结实，稳定，离墙面距离300mm以上。 　　6、环境要求 　　要求仪器室安装空调，配备除湿机。 　　7、插座 　　16A，5个插孔，1个/台 　　一、电源：220V/50HZ建议准备专用地线。 　　16A多用电源插座一个，带工作站时两个。 　　二、气体：根据不同的检测器使用不同的气体，请参考下表： 　　检测器种类载气燃烧气助燃气尾吹气备注 　　(分析内容)(纯度)(纯度)(纯度)(纯度) 　　TCD一般分析He，N2