基因组DNA提取方法
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1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。
2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。
3、重复2。
4、加入5ml DNA提取缓冲液,(10m mol/L Tris-cl,0.1 mol/L EDTA,0.5% SDS),混匀。
5、加入25ul 蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴3h。
6、用等体积的酚抽提一次,2500r/min 离心收集水相。用等体积的(酚,氯仿,异戊醇)混合物抽提一次,2500r/min 离心收集水相。
用等体积的氯仿,异戊醇抽提一次。
7、加入等体积的5mol/L 的LiCL,混匀,冰浴,10min。
8、2500r/min,离心10min. 转上清与一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10分钟。
9、2500r/min,离心10min。弃上清。加入0.1倍 体积3mol/L 乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃ 20分钟。
10、12000r/min, 室温离心5分钟。弃上清。将DNA溶于适量TE中。