感受态细胞的转化实验流程
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1. 取 100μl 感受态细胞于冰浴上融化。
2. 加入 1μl 纯质粒或连接产物,轻轻吹打混匀,冰浴 30 min。
3. 将菌液放入 42℃水浴中热激 90 秒,立即放入冰浴中 2 min。
4. 加入 0.9ml SOC,于 37℃恒温摇床上 200rpm×1hr 温育。
5. 将菌液 4000rpm/min 离心 3min,留 200μ l 上清将菌体打散,均匀涂布于含适当 抗生素的琼脂平板表面,平板于 37℃倒置培养过夜。
注:
① 新倒的平板可于 37℃培养箱中预先放置数小时至过夜干燥。
② 当转化的是 TA 克隆连接产物时可在菌液中加入 8μl 1M IPTG 和 40μl 20mg/ml X -gal 以进行蓝白斑筛选。