铁死亡研究-细胞亚铁检测常见问题解答
武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司
细胞亚铁含量增多是铁死亡区别其他细胞死亡方式的一个主要特征,其检测也是铁死亡研究最常见的指标之一。根据市场热点反馈,Elabscience®加大研发、优化力度,专门推出了针对细胞样本的高灵敏度亚铁离子比色法测试盒
下面整理了一些关于细胞亚铁检测的常见问题,助力大家更顺利地完成实验。
Q1:检测细胞亚铁需要多少细胞?
本试剂盒每个样本需准备大约106个细胞。相比以往的亚铁离子比色法测试盒,样本需求数量大大减少。
Q2:细胞样本如何进行破碎处理?
本试剂盒使用细胞裂解液对细胞样本进行处理,加入裂解液后,只需在冰盒上静置10分钟,即可离心取上清液待测,有效提升了细胞破碎效率,同时防止了亚铁离子的氧化。
Q3:为什么测定的标准品的OD值没有梯度?
实验中的标准品为亚铁离子,在室温下放置易氧化。最好在使用前按需配制,尽量减少试剂配制完成后的放置时间。另外,优化的试剂盒中配置了专门的标准品稀释液,可以极大程度地延长标准品配制后的存放时间。
Q4:加入显色剂时,如何防止酶标板孔中产生气泡?
酶标板孔中的气泡会导致仪器检测时读取错误的OD值。加入显色液时,可将移液器枪头贴近板孔内壁,缓慢加入,以减少气泡的产生,并使用“吸二打一”的移液器操作方式,来避免气泡的产生。
Q5:试剂盒的检测波长是多少?
本实验的显色物质在593nm波长处有最大的特征吸收峰,在590-600nm波长范围内都可以进行检测。
Q6:未能检出样本值是什么原因?
可能是测定的细胞中亚铁离子含量较低,样本中亚铁离子含量低于试剂盒检出限。可适当增加样本细胞数量,以提高检测样本中亚铁离子的浓度。
Q7:计算最终结果时,
能通过测定蛋白含量进行校正吗?
本实验的最终测定结果不适宜用蛋白含量进行校正,因为制备样本的试剂对蛋白检测结果有较大干扰。推荐在样本处理前进行细胞计数,使用细胞数量进行计算校正。
了解更多操作细节,可点击观看细胞亚铁操作视频