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自己总结的MTT方法原理

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一、  原理
黄色的噻唑兰,简称MTT,可透过细胞膜进入细胞内,活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的针状Formazan结晶并沉积在细胞中,结晶物能被二甲基亚砜(DMSO)溶解,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映细胞数量。

二、实验步骤(实用于贴壁细胞)
1)收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,分于96孔板,每孔180μl,3000-10000个/孔。
2)置37℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁,培养6-24小时。
3)加入待筛样品20μl,继续培养44小时。
4)小心吸去上清,加入80μl新鲜RPMI 1640培养液,再加入20 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4 h。
6)然后吸掉上清,每孔加入150 ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490 nm处测量各孔的吸光值。
7)  同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜),每组设定3复孔。
8)  计算抑制率=[(对照-空白)-(给药-空白)]/(对照-空白)X100%.

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