A quick method to isolate plant genomic DNA.
互联网
988
- Use from 0.01 - 0.1 gram plant material.
- Grind the plant material with liq. N2 in a mortar. We normally use some alumina to crush hard tissue.
- Transfer the ground tissue to a eppendorf tube.
- Add 1 ml extraction buffer (100 mM Tris-HCl pH 8.0, 50 mM EDTA pH 8.0, 500 mM NaCl, + 0.07 % 2-mercaptoethanol). Mix well.
- Add 130 ul 10% SDS, invert / shake the tube a few times. Incubate at 65 C for 15 min.
- Add 300 ul 5M potassium acetate. Mix well. Keep the solution on ice for i 30 min, (precipitation of proteins).
- Spin down the precipitations at 7000 rpm, 5 min. Transfer 300 ul of the supernatant to a new eppendorf tube.
- Add 900 ul NaI (GeneClean II), + 20 ul "glass milk" (silica particles) to the supernatant, (total volume of 1220 ul). Mix well and incubate at room temp. for 5 min.
- Spin down the silica particles (glass milk), 5 sec., remove supernatant. (The DNA in the solution will now hopefully be bound to the silica particles).
- Wash the silica pellet with 800 ul wash solution (from the GeneClean II kit).
- Repeat the wash two times.
- Dry the pellet (with bound DNA).
- Resuspend the pellet in 50 ul distilled water. Incubate at 50-65 C for 5 minutes.
- Spin down pellet and transfer the eluted DNA to a new eppendorf tube.
- At this point you should have enough DNA to run 10-20 PCR reactions. Optional you can check 10 ul of the eluate on a agarose gel. If you use 0.1 gram plant material you should be able to see the DNA on the gel.
Samme prosedyre men på Norsk: (Beklager men ikke på ny-Norsk)
- Vei opp 0.1 gram av plante materiale.
- Knus materiale i morter, med alumina og flytende N2.
- Overfør pulver til 1.5 ml eppendorfrør.
- Tilsett 1 ml ekstraksjonsbuffer (100 mM Tris-HCl pH 8.0, 50 mM EDTA pH 8.0, 500 mM NaCl, + 0.07 % 2-mercaptoetanol). Resuspender godt.
- Tilsett 130 ul 10% SDS, bland godt, og inkuber ved 65 C i 15 min.
- Tilsett 300 ul 5M kalium acetat. Bland godt. La løsningen stå på is i 30 min.
- Spinn ned ved 7000 rpm, 5 min. og ta ut 300 ul av supernatant.
- Til de 300 ul med supernatant tilsettes 900 ul NaI (GeneClean II), + 20 ul "glass milk" (silika partikler). Bland godt, inkuber ved rom temp. ca 5 min.
- Spinn ned silika partiklene, 5 sek., og ta av supernatant. (DNA i løsningen vil nå være bundet til silika partiklene).
- Vask silika pellet med 800 ul vaskeløsning (GeneClean II).
- Gjenta vasketrinn 2 ganger.
- Tørk silika pellet ved 65 C, ca 10 min.
- Resuspender pellet i 50 ul destilleret vann. Inkuber ved 50-65 C i 5 min.
- Spinn ned pellet og ta av supernatant som inneholder DNA.
