g418如何配制

问：

最近要做稳定转染了，但不知道如何配制G418，有一些细节想问问大家，我打算用PBS来配，我想问问是用高压过的PBS来配，还是用未高压的PBS配，配完了是不是要过滤，然后放到-20保存，用的时候是不是放在4度.请各位来帮我解答一下，谢谢.

答：

我实验室的师兄一直是用HEPES配制的，因为PBS对细胞的损伤会大一些。

配的时候就是用配好的HEPES溶G418，然后过滤，不用高压灭菌了，配好后分装，-20度保存，用的时候取一管放4度。

100mM HEPES（pH7.3）缓冲液（500ml）

ddH2O 490ml

Nacl 4g

Na2HPO4-12H2O 0.1357g

Kcl 0.185g

Glu 0.5g

HEPES 2.5g

用氢氧化钠调PH至7.3 ，定容至500ml

G418贮存液（50mg/ml）的配制

G418（merck分装），效价大于等于700U/mg

按实际效价配制G418 solution.1g G418粉加14ml 100mM HEPES（pH7.3）溶解