如何从酿酒酵母抽提质粒?
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问:请教如何从酿酒酵母抽提质粒 ?
用胞壁松解酶处理以后,再用SDS处理,是否就可以破碎酵母了,因为是抽提质粒,不是抽基因组DNA ,可以不用蛋白酶K处理吗?请各位朋友提宝贵建议(不用玻璃珠破细胞)。我要尽可能把样品中的质粒都抽提出来,然后 REAL TIME PCR定量,好计算每个酵母细胞中的质粒拷贝数目。因为样品少,不能做SOUTHERN BOLT计算拷贝。谢谢了!
答:1.用胞壁松解酶处理以后,再用SDS 处理,应该就可以破碎酵母了; 2.应该用蛋白酶K处理,防止核酸酶降解作用;
私人建议:若想达到兄台的目的,恐怕有很大困难(若想很精确的话),须仔细考虑每一步骤,以减少损失。最好能将损失率计算进去。
结果验证:用胞壁松解酶处理也可使相当部分胞壁破裂,我将这部分DNA也进行了回收。正如您所言,用SDS处理以后,在显微镜下没有发现完整的酵母细胞了。再次感谢!