抗体纯化:冷酒精沉淀法
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1、 血清加3倍体积的蒸馏水,调节 pH至7.7(±)冷却到0℃。在激烈搅拌的条件下,加预冷的酒精(-20℃)到最终浓度为20%,保持在-5℃。产生的沉淀(a),含有大多数种类的免疫球蛋白。
2、 沉淀a悬浮于25倍体积的0.15~20mol/l NaCl溶液(冷)中,加有0.05mol/l醋酸调节 pH到5.1,产生的沉淀(b),包括大部分的IgA和IgM,IgG留在上清液内。
3、调节
上清液的pH到7.4,加冷酒精(-20℃~-30℃)到最终浓度为25%,维持在-5℃。所得到的沉淀(c)含有90%~98% IgG。不同动物,IgG分离的条件和产量略有不同。见下表。
4、从沉淀(b)可按下述方法进一步分离出IgA和IgM的混合物:将沉淀(b)悬浮在0℃ 水中,调节 pH到5.1,离心去除不溶的蛋白。调节 上清液离子强度到0.01~0.0075,pH5.5。然后加冷酒精到最终浓度为10%,保持在 –2℃或-3℃低温,所得的沉淀(b-b)主要含IgA和IgM。
物 种 | pH | 沉淀条件 | IgG产量 | |
酒精浓度(%) | 离子强度 | |||
人
| 5.1 | 15. | 0.01 | 65 |
山羊 | 5.2 | 0 | 0.01 | 65 |
家兔 | 5.2 | 10 | 0.01 | 70 |
大鼠 | 5.0 | 15 | 0.01 | 50 |
豚鼠 | 5.1 | 15 | 0.01 | 70
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