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抗体纯化:冷酒精沉淀法

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1、 血清加3倍体积的蒸馏水,调节 pH至7.7(±)冷却到0℃。在激烈搅拌的条件下,加预冷的酒精(-20℃)到最终浓度为20%,保持在-5℃。产生的沉淀(a),含有大多数种类的免疫球蛋白。

2、 沉淀a悬浮于25倍体积的0.15~20mol/l NaCl溶液(冷)中,加有0.05mol/l醋酸调节 pH到5.1,产生的沉淀(b),包括大部分的IgA和IgM,IgG留在上清液内。

3、调节

上清液的pH到7.4,加冷酒精(-20℃~-30℃)到最终浓度为25%,维持在-5℃。所得到的沉淀(c)含有90%~98% IgG。不同动物,IgG分离的条件和产量略有不同。见下表。

4、从沉淀(b)可按下述方法进一步分离出IgA和IgM的混合物:将沉淀(b)悬浮在0℃ 水中,调节 pH到5.1,离心去除不溶的蛋白。调节 上清液离子强度到0.01~0.0075,pH5.5。然后加冷酒精到最终浓度为10%,保持在 –2℃或-3℃低温,所得的沉淀(b-b)主要含IgA和IgM。

物 种

pH

沉淀条件

IgG产量


酒精浓度(%)


离子强度

5.1


15.


0.01


65


山羊


5.2


0


0.01


65


家兔


5.2


10


0.01


70


大鼠


5.0


15


0.01


50


豚鼠


5.1


15


0.01


70

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