RNAi实验设计的常见问题及其解答

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RNAi 实验设计的常见问题 及其解答

如何检测荧光标记的siRNA ?

荧光标记双链是最常用的优化转染 条件的方法。可以用流式细胞仪 或者荧光共聚焦显微镜检测标记的siRNA。但是如果siRNA没有针对特定的抗核酸酶进行修饰，荧光可能不会反映siRNA的基因沉默效率。

如何分析带有二级结构的RNA寡核苷酸 链?

在90℃下加热样品3分钟，再装填到变性凝胶体中分析带有二级结构的RNA寡核苷酸链。这种处理能使任何二级结构解旋成单链。不可以在样品装填前对凝胶体进行预热。

siRNA 的平均分子 量是多少?

siRNA的平均分子量是13,300g/mol。即：1 nmol siRNA=13.3ug siRNA 或 1 mg siRNA=75 nmol siRNA

在体外实验中，需要多少量的siRNA?

建议用于实验的siRNA的浓度为100nM。1nmol siRNA的量对于一个24孔板或是96孔板的实验已经足够了。(100 nM = 100 nmol/L = 100 pmol/mL = 100 fmol/uL)