免疫荧光实验指南

固定和透化

1. 在培养板中将已爬好细胞的盖玻片用 1 × PBS 浸洗 3 次，每次 3 min。
2. 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min，1 × PBS 浸洗玻片 3次，每次 3 min。
3. 0.5%Triton X-100(1× PBS 配制 )室温通透细胞 15 min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）, 1 × PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min。

封闭

1. 吸水纸吸干 1 ×PBS，在玻片上滴加 5% 的正常血清（与二抗种属来源一致或相似），室温封闭 1 h。

抗体孵育

1. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4 ℃ 孵育过夜。
2. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中 37℃ 孵育 1 h，PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min。

注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

固定拍照

1. 复染核：滴加 DAPI 避光孵育 5 min，对标本进行染核，PBST 5 min×4 次洗去多余的 DAPI。
2. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，在荧光显微镜下观察采集图像。