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除了分离细胞,磁珠的这些用法你了解吗?

美天旎

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基于针对细胞表面标记蛋白的偶联磁珠,利用磁场对目的细胞群体分离是 MACS 磁珠最广泛的应用领域。但 MACS Technology的神通广大不仅仅于此,在蛋白质、核酸分子水平的分离应用中也具有卓越的性能和优势,今天让我们了解一下。

一个细胞也能做的 mRNA 分离和 cDNA 合成

精确的基因表达分析离不开高质量的 mRNA 分离,必须克服潜在的 DNA 污染和 RNA 降解等严重影响数据的风险。传统提取核酸的方法有赖于多步骤的离心和沉降过程,这在样品细胞数量极少时,则带来极大的弊端。

同样基于 MACS Technology 的 μMACS SuperAmp 试剂盒利用偶联了 poly-A 尾的 50 nm 超顺磁微珠准确高效捕获 mRNA 的同时,柱内 cDNA 合成保证了无原材料流失,进一步提高了反应的灵敏度和 RNA 分析的精确度,1 到 104 个细胞的转录组分析都可实现。

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上图分别为核酸提取(左图)

和 cDNA 合成(右图)的基本原理

极少量细胞的核酸提取及逆转录仅在 3 个小时内即可完成,并带来如下优势:

✦超高灵敏度,所需细胞数量可少至 1 个,所需 RNA 总量可少至 10 pg!

✦完全不离心无沉降的 mRNA 分离方法, 杜绝损耗和 DNA 污染;

✦独特的可温控分离器,柱内完成 cDNA 合成,避免 global PCR 由随机引物带来的扩增偏碍;

✦支持全自动高通量的一步式核酸提取及逆转录反应,更高效,更可靠!

2 小时完成的蛋白质分离纯化

传统的蛋白质分离纯化方法多样,需要根据目的蛋白的不同性质采用最适宜的手段。常规的流程包括如下几个关键步骤:

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基于 MACS Technology 的 μMACS Tag Isolation Kits 实现 2 个小时内从细胞到纯化蛋白的过程,整个过程不需离心、无背景、无材料损失,且兼容自动化高通量的提取流程。基本原理及工作流程如下:

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μMACS Tag Isolation Kits 支持带有如 HA, His, FLAG (DYKDDDDK), c-myc, GFP, GST 等多种标签肽段表达的目的蛋白纯化。其高灵敏度和无背景的纯化效果,在真核细胞蛋白表达系统的纯化过程中优势明显。

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(左)兼容全自动高通量蛋白提取纯化平台 (右)裂解 107 个转导了编码 HA-BDCA-2 载体的小鼠 B 前体细胞后,提取的蛋白使用 SDS-PAGE 的方法进行检测。

蛋白免疫共沉淀(co-IP)与染色质免疫共沉淀(ChIP)

μMACS Protein A/G MicroBeads 专为蛋白质免疫共沉淀分析而开发,免疫复合物 30 分钟即可形成并得到磁性分离

在强磁场的分离柱中进行润洗,可保证背景充分去除,即便是弱结合的蛋白复合物依然可得到充分分离。传统免疫共沉淀工作流程需要抗体孵育过夜,相比之下 MACS Techology 可令实验时间缩短至 2 小时以内,效率大大提升。

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使用 μMACS G Protein MicroBeads 对 COS-7 细胞系提取蛋白进行 SV40大T 抗原的免疫共沉淀分析。SDS-PAGE 凝胶电泳后考马斯亮蓝染色,显示蛋白Marker( 1 道),流穿液 ( 2 道), 洗涤液( 4 道),免疫沉淀得到的大T抗原蛋白 (6 道,箭头所示), 同型抗体对照( 5 道)。

高灵敏度、高特异性的 μMACS G Protein MicroBeads 同样可以提升染色质免疫共沉淀 (ChIP)的实验结果,特别是发现新的转录调控因子

μMACS FactorFinder Kit 专用于分离自然结合 DNA 的蛋白,因此极适合全新转录因子,甚至是全新的治疗性药物靶点的发现研究,整个实验流程仅需 90 分钟。

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