核酸的沉降特性

溶液中的核酸分子在引力场中可以下沉。不同构象的核酸（线形，开环，超螺旋结构）、蛋白质及其他杂质在超离心机的强大引力场中，沉降的速率有很大差异，所以可以用超离心法纯化核酸，或将不同构象的核酸进行分离，也可以测定核酸的沉降常数与分子量。

应用不同介质组成密度梯度进行超离心分离核酸时，效果较好。 RNA 分离常用蔗糖梯度。分离 DNA 时用得最多的是氯化铯梯度。氯化铯在水中有很大的溶解度。可以制成浓度很高（ 8mol ／ L ）的溶液。

应用啡啶溴红—氯化铯密度梯度平衡超离心，很容易将不同构象的 DNA 、 RNA 及蛋白质分开。这个方法是目前实验室中纯化质粒 DNA 时最常用的方法。如果应用垂直转头，当转速为 65 000r/min （ Beckman L-70 超离心机），只要 6h 即可以完成分离工作。但是如果采用角转头，转速为 45 000r/min 时，则需 36h 。离心完毕后，离心管中各种成分的分布可以在紫外光照射下显示得一清二楚 。蛋白质漂浮在最上面， RNA 沉淀在底部。超螺旋 DNA 沉降较快，开环及线形 DNA 沉降较慢。用注射针头从离心管侧面在超螺旋 DNA 区带部位刺入，收集这一区带的 DNA 。用异戊醇抽提收集到的 DNA 以除去染料，然后透析除 CsCl ，再用苯酚抽提 1~2 次，即可用乙醇将 DNA 沉淀出来。这样得到的 DNA 有很高的纯度， 可供 DNA 重组、测定序列及绘制限制酶图谱等。在少数情况下，需要特别纯的 DNA 时，可以将此 DNA 样品再进行一次氯化铯密度梯度超离心分离。