抗凝剂、分血浆袋及采血器的热原质检查

　　采用家兔法。亦可用细菌内毒素检查法，有异议时用家兔法仲裁。

　　1 家兔法

　　按《生物制品热原质试验规程》进行，判定标准按该规程4.2项要求进行，其抽样方法与注射剂量如下：

　　1.1 抗凝剂

　　按家兔体重2ml/kg注射。

　　1.2 采血器及分血浆器

　　采血器及分血浆器应有批号，每批抽一定数量进行检查，方法为用100ml氯化钠注射液通过，检查流过液，应无肉眼可见的混浊或异物，注射剂量按家兔体重10ml/kg注射，合格后方能使用。

　　1.3 分血浆袋

　　抽取分血浆袋10只，用100ml氯化钠注射液清洗，检查清洗液，应无肉眼可见的混浊和异物，按家兔体重10ml/kg注射。

　　2 细菌内毒素检查法

　　2.1 试验要求

　　2.1.1 用具处理

　　试验所用器皿需除去可能存在的外源性内毒素，常用的方法是250℃至少30分钟或180℃至少2小时干烤。

　　2.1.2 鲎试剂灵敏度复核

　　根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ）将细菌内毒素国家标准品，用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成合适的2倍稀释浓度，即2λ、λ、0.5λ、0.25λ备用，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟，按2.2项试验，每一稀释液平行做4管，如最高浓度4管均为阳性，最低浓度4管均为阴性，按下式计算鲎试剂灵敏度测定值（λc）。

　　Λc=log-1（ΣΧ）/4

　　X为反应终点内毒素浓度的对数值。

　　当λc在0.5～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以λc为该批鲎试剂的灵敏度。每批新的鲎试剂在用于试验前都要进行灵敏度的复核。

　　2.1.3 供试品干扰试验

　　按2.1.2项试验，用供试品的最大有效稀释液将细菌内毒素国家标准品制成2.0λ、0.5λ、0.25λ浓度稀释液。供试品的最大有效稀释倍数（D）按下式计算：

　　D=L/λ

　　L为供试品的细菌内毒素限值（EU/ml）。

　　如果有供试品和无供试品测得的鲎试剂灵敏度（λc）在0.5～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，则认为供试品在该浓度下不干扰试验，否则需要进行适当处理后重复本试验。使用更灵敏的鲎试剂，对供试品进行更大的倍数稀释，是排除干扰的简单有效方法。

　　2.1.4 供试品

　　2.1.4.1 抗凝剂

　　取原液作160倍稀释后测定。原液细菌内毒素含量应≤5.56EU/ml。

　　2.1.4.2 采血浆器及分血浆器

　　取1.2项流过液测定。细菌内毒素含量应≤0.5EU/ml。

　　2.1.4.3 分血浆袋

　　取1.3项清洗液测定。细菌内毒素含量应≤0.5EU/ml。

　　2.2 方法

　　取装有0.1ml鲎试剂溶液的10×75mm试管（或0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿）4支，其中2支加入0.1ml供试品作为供试管，1支加入2λ内毒素工作标准品溶液0.1ml作为阳性对照管，1支加入细菌内毒素检查用水0.1ml作为阴性对照管。将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37±1℃水浴中，保温60±2分钟。保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。

　　2.3 结果判定

　　将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转180°时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（ ）；凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（-）。供试品两管均为（-）应认为符合规定；如两管均为（ ），应认为不符合规定；如两管中1管为（ ），1管为（-），按上述方法另取4管供试品管复试，4管中有1管为（ ），即认为不符合规定。阳性对照为（-）或阴性对照为（ ），试验无效。