荚膜染色法

实验九 荚膜染色法

　　一、目的要求

　　学习并掌握荚膜染色的基本方法。

　　二、基本原理

　　荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成分是多糖类，不易被染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄，易变形，因此，制片时一般不用热固定。

　　三、器材

　　圆褐固氮菌（Azotobacter chroococcum）；

　　荚膜染色液，纯甲醇等。

　　四、操作步骤

　　1．在载玻片一端滴一滴无菌水，取少许培养了72小时的圆褐固氮菌在水滴中制成悬液。取一滴新配好的黑色素溶液（也可用绘图墨水）与菌悬液混合，另取一块载玻片作为推片，将推片一端平整的边缘与菌悬液以30度角接触后，顺势将菌悬液推向前方，使其成匀薄的一层，风干。

　　2．用纯甲醇固定1分钟。

　　3．加番红液数滴于涂片上，冲去残余甲醇，并染30秒钟，以细水流适当冲洗，吸干后油镜检查，背景黑色，荚膜无色，细胞红色。

　　五、实验报告

　　1．结果

　　绘图说明圆褐固氮菌菌体及荚膜的形状。

　　2．思考题

　　为什么在荚膜染色中一般不用热固定，而用纯甲醇进行固定？