实验6I IAA的生物鉴定

实验6I IAA的生物鉴定

（小麦芽鞘切段伸长法）

原理

　　将小麦胚芽鞘的延长部分切成段，漂浮在含有生长素的IAA的溶液中，这些切段可以继续伸长，在一定浓度范围内，芽鞘切段的伸长与生长素浓度的对数成正比，因而可通过测定切段伸长的多少来测定生长素的含量。

仪器药品

　　25℃暗室　　　　 滤纸

　　旋转器 　　　　　分析天平

　　小瓷缸 　　　　　大瓷缸

　　培养皿 　　　　　具塞试管

　　移液管 　　　　　青霉素瓶

　　刀片 　　　　　　小镊子

　　尼龙网 　　　　　刻度尺

　　半对数座标纸 　　饱和漂白粉溶液

　　小麦品种：扬麦小号最好用中农28。

　　100ppmIAA母液：称10mgIAA深于少量无水酒精中，再用水稀释至100ml。此溶液在冰箱中可保存一个月。

　　缓冲液：称取K₂ HPO₄ 1.794g，柠檬酸1.019g，蔗糖(AR)20g溶于1000ml重蒸馏水中，pH为5.0。

操作步骤

　　1．挑选大小均匀的小麦种子（必须用前一二年的种子，因当年新收的种子发芽不整齐），用饱和漂白粉溶液灭菌30分钟后，用自来水冲洗半天，放在盛有湿润滤纸的培养皿中，腹沟朝下，在25℃黑暗条件下萌发24小时。

　　2．当第一胚根出现后，移于用尼龙网覆盖的小瓷缸中，胚根插入尼龙网眼中，如图20所示。

　　小瓷缸放入盛水的大资缸中，以保持湿度或在小瓷缸上罩上烧杯保湿。

　　3．继续在25℃黑暗下培养，约40小时后，当胚芽鞘长达3cm左右时，选取2.8─3.0cm幼苗作为生物鉴定的材料，因这样大小的芽鞘对IAA最敏感。

　　4．切去芽鞘尖端3mm，取下面5mm切段作试验，如图21所示。

　　5．将5mm切段漂浮在重蒸馏水中浸洗2─3小时，除去切段中内源激素。

　　6．配制0.001、0.01、0.1、1.0、10ppm的IAA的系列标准溶液（配在具塞试管中）。

　　吸取 100ppm IAA 1ml 9ml缓冲液→10ppm IAA

　　吸取 10ppm IAA 1ml 9ml缓冲液→1ppm IAA

　　吸取 1ppm IAA 1ml 9ml缓冲液→0.1ppm IAA

　　吸取 0.1ppm IAA 1ml 9ml缓冲液→0.01ppm IAA

　　吸取 0.01ppm IAA 1ml 9ml缓冲液→0.001ppm IAA

　　7．在具塞青霉素瓶中分别吸入上述IAA系列标准溶液(0.001、0.01、0.1、1.0、10ppm IAA)2ml，另外吸取2ml缓冲液作为对照。

　　8．切段浸泡后，用滤纸将切段表面水分吸干，在上述盛有不同浓度生长素的青霉素瓶中，分别放入芽鞘切段10段（最好放11─12段，以便挑选）加塞，每一浓度重复3次。将青霉素瓶置于旋转器上（旋转速度为16r/min）在25℃暗室中旋转培养。

　　9．上述操作均需在暗室中绿光下进行。

　　10．旋转培养20小时后取出芽鞘切段，在滤纸上吸干，测量芽鞘切段的长度。

　　11．在半对数坐标纸上，以芽鞘切段增长%为纵坐标，IAA浓度为横坐标，作出标准曲线。在生长素浓度为0.001─1.0ppm范围内，切段的伸长与生长素浓度的对数成正比，如需鉴定某一植物提取液中生长素含量，必须与标准的IAA作对照。