常用的转染方法
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转染方法
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原 理
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应 用
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特 点
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二乙氨乙基(DEAE)-右旋糖酐法
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带正电的DEAE-葡聚糖(dextran) 与带负电的核酸磷酸骨架相互作用形成复合物,通过细胞内吞作用进入细胞
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瞬时转染
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相对简便,结果可重复,但对细胞有一定的毒副作用,转染时需去除血清
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磷酸钙法
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磷酸钙-DNA 复合物吸附于细胞膜,被细胞内吞稳定转染,
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瞬时转染
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操作简便,但重复性差,不适用于原代细胞及某些培养细胞
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阳离子脂质体法
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带正电的脂质体与带负电的核酸磷酸骨架形成复合物,被细胞内吞
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稳定转染
瞬时转染,
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适用于所有细胞,转染效率高,重复性好,但转染时需去除血清,转染效果随细胞类型变化大
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非脂质体脂类法
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内含多种脂质成分,与DNA 结合后转运到细胞内
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瞬时转染稳定转染
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适用于所有细胞,包括许多原代培养细胞;转染效率高,细胞毒性小,转染时可以不去除血清
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逆转录病毒介导法
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通过感染宿主细胞将外源基因整合到染色体中
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稳定转染
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可用于难转染的细胞,如原代细胞、体内细胞等。但携带基因不能太大,操作复杂,耗时,需考虑安全因素。
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腺病毒介导法
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通过感染宿主细胞将外源基因整合到染色体中
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瞬时转染特定宿主细胞
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可用于难转染的细胞,需考虑安全因素
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电穿孔法
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高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA 通过膜上形成的小孔导入
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稳定转染,
瞬时转染
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,适用于所有细胞,但细胞致死率高,DNA 和细胞用量大,需根据不同细胞类型优化实验条件
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基因枪法将
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DNA 用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的颗粒用弹道装置射入细胞,DNA 在胞内逐步释放、表达
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瞬时转染
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可用于人的表皮细胞、成纤维细胞、淋巴细胞系及原代细胞
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显微注射法
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通过显微操作将DNA 直接注入靶细胞核稳定转染,
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瞬时转染
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转染细胞数有限,多用于基因工程改造或转基因动物的胚胎细胞
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