等电〔点〕聚焦 isoelectric focusing

互联网2013-11-14

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指在 pH梯度存在下所进行的一种电泳。为了形成稳定的 pH梯度通常所使用的两性电解质载体（ ca－ rrer ampholyte），为分子量 1000以下的多氨基多羧酸（有时也用磺酸基和磷酸基代替羧基）的混合物，仅含有等电点稍有差异的多数成分。对不含盐的两性电解质载体水溶液加上电场时，则酸性成分向阳极、碱性成分向阴极移动，随之各呈等电状态，在两电极间按等电点的顺序排列，形成一定的 pH梯度。将蛋白质加到此溶液中，则在 pH梯度中移动，分别在与其等电点相等的部位集中浓缩为狭带状。根据这个原理可以测定蛋白质的等电点，同时也是分析蛋白质混合物的有力手段，另外也用于分离和提纯。为了保持 pH梯度和分离成分的稳定，采取二种不同的方式，一为密度梯度等电点聚焦法，即在柱内制成蔗糖等的密度梯度，使之与 pH梯度重合的方法，可以提纯大量的材料；另一为聚丙烯酰胺凝胶等电点聚焦法，利用平板或圆柱状凝胶，适于分析微量样品。等电点聚焦和 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结合起来的双相电泳（ O′ Farrell法）显示出很高的分离能力，对分析复杂的蛋白混合物是有效的。