染色体DNA的提取

一、实验目的与原理
DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。
二、材料以方法
1、 材料：培养菌体
2、 仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高速冷冻离心机，台式离心机，移液枪一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪
3、 试剂：
细胞裂解液 100 mM Tris-HCl
5 mM EDTA
500 mM NaCl
1.25% SDS
PH 7.5
饱和酚，氯仿/异戊醇，酚/氯仿/异戊醇
无水乙醇，70％乙醇，异丙醇
3 M NaAc pH5.2, RNase，50×TE缓冲液，电泳载样缓冲液
三、操作步骤
（1） 培养菌体
（2） 加入10 ml裂解液，1/10体积酚，于65℃下20－30 min，然后加入等体积的氯仿，轻摇
（3） 12000－15000rpm离心15 min
（4） 取上�液，加入等体积氯仿，轻摇，12000－15000rpm离心15 min
（5） 取上�液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）
（6） 加入1/10体积的3 M NaAc(pH5.2)，置于室温下10 min
（7） 12000－15000rpm离心10 min
（8） 倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀
（9） 加入2倍体积无水乙醇
（10） 12000－15000rpm离心10 min
（11） 倒弃液体留下沉淀，真空干燥
（12） 复溶于2 ml TE
（13） 加入RNase，65℃或37℃处理10－30 min
（14） 加等体积酚，酚/氯仿，氯仿各一次，12000－15000rpm离心10 min
（15） 取上�液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）
（16） 加入1/10体积的3 M NaAc(PH5.2)，置于室温下10 min
（17） 12000－15000rpm离心10 min
（18） 倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀
（19） 真空干燥沉淀
（20） 复溶于0.5－1.0 ml的TE或水中，分装成小体积，4℃或-20℃保存。
（21） 电泳检测提取DNA的质量
四、结果与分析
点样空，若发亮则说明有污染
超螺旋结构DNA，若条带有拖尾则
说明有破碎的DNA
少量未清除的RNA
五、注意事项
1、 重点防止DNA的损伤，包括各种物理、化学和机械损伤。
2、 干燥好的染色体DNA最好溶于去离子水，以备后面直接利用。如果用TE 缓冲液溶解，后面还需去离子。
3、 取上清时，如果上清液过少，可再加入少量水，重新离心，取上清，避免DNA损失过多。