研究T细胞产生的细胞因子的方法

研究 T 细胞产生的细胞因子的方法

 

1 ）研究细胞因子 mRNA 的方法

 

绝大多数细胞因子 mRNA 在 T 细胞中只短暂存在，其存在的量与 T 细胞产生细胞因子的量也有很好的相关性。所以，在大多数情况下，细胞内 mRNA 的量可以反映细胞产生细胞因子的情况。

检测细胞因子 mRNA 的试验主要有：竞争性聚合酶链反应、 Northern 印迹杂交、斑点杂交、逆转录聚合酶链反应、原位杂交。

 

 

2 ）研究细胞因子的免疫检测法

 

免疫检测法主要有放射免疫检测法、酶免疫测定法、免疫荧光测定法和免疫发光测定法等。

 

 

3 ）研究细胞因子的生物学方法

 

1． 用含 10 ％小牛血清的 RPMI-1640 培养液培养 HT2 细胞。取对数生长期细胞，用细胞培养液洗涤细胞 2 次，每次离心 1000 × g 10 分钟。

2． 取 96 孔细胞培养液，每孔加 0.1ml 含 4 × 10³ HT2 细胞的细胞培养液。再加 0.1ml T 细胞培养上清液或经系列稀释的 IL-2 标准品，每个稀释度重复 3 孔。在 37 ℃ 5 ％ CO₂ 的饱和湿度二氧化碳培养箱中培养 24 小时。

3． 每孔加 10 μ Ci （ 3.7 × 10⁵ Bq ） [³ H] 脱氧胸苷（ 10 μ l ），在 37 ℃ 5 ％ CO₂ 的饱和湿度二氧化碳培养箱中继续培养 4 ～ 8 小时。

4． 用多孔收集器将细胞收集到玻璃纤维滤纸上，在液体闪烁计数仪中计数每分钟放射活性（ cpm ）。用 cpm 对稀释度作图，根据标准曲线判定 T 细胞培养上清液中 IL-2 的含量。