研究T细胞产生的细胞因子的方法

研究T细胞产生的细胞因子的方法

1、研究细胞因子mRNA的方法

绝大多数细胞因子mRNA在T细胞中只短暂存在，其存在的量与T细胞产生细胞因子的量也有很好的相关性。所以，在大多数情况下，细胞内mRNA的量可以反映细胞产生细胞因子的情况。

检测细胞因子mRNA的试验主要有：竞争性聚合酶链反应、Northern印迹杂交、斑点杂交、逆转录聚合酶链反应、原位杂交。

2、研究细胞因子的免疫检测法

免疫检测法主要有放射免疫检测法、酶免疫测定法、免疫荧光测定法和免疫发光测定法等。

3、研究细胞因子的生物学方法

（1）用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液培养HT2细胞。取对数生长期细胞，用细胞培养液洗涤细胞2次，每次离心1000×g 10分钟。

（2）取96孔细胞培养液，每孔加0.1ml含4×103 HT2细胞的细胞培养液。再加0.1ml T细胞培养上清液或经系列稀释的IL-2标准品，每个稀释度重复3孔。在37℃ 5％ CO2的饱和湿度二氧化碳培养箱中培养24小时。

（3）每孔加10μCi（3.7×105Bq）[3H]脱氧胸苷（10μl），在37℃ 5％ CO2的饱和湿度二氧化碳培养箱中继续培养4～8小时。

（4）用多孔收集器将细胞收集到玻璃纤维滤纸上，在液体闪烁计数仪中计数每分钟放射活性（cpm）。用cpm对稀释度作图，根据标准曲线判定T细胞培养上清液中IL-2的含量。