用尼龙毛法分离B细胞

用尼龙毛法分离 B 细胞

 

1 ）尼龙毛柱的制备

 

1． 取直接 3D ，长度约 10cm 的尼龙毛，用 0.2mol/L HCl 浸泡处理过夜。用双蒸水洗净 HCl ，置 37 ℃烘干备用。

2． 称取 50mg 尼龙毛，均匀分散，置 Hanks 液中浸泡。取 1ml 注射器，出口接塑料管并夹住。将尼龙毛均匀填塞入注射器中，排净空气，柱高约 5 ～ 6cm 。此柱可分离约 2 × 10⁷ 细胞。将柱置－ 20 ℃可保存 2 ～ 3 个月。

 

 

2 ）分离细胞

 

1． 取分离的单个核细胞，用细胞培养液将细胞配成 2 × 10⁷ /0.5ml 。

2． 融化尼龙毛柱，以每分钟 5 ～ 7 滴的速度放出 Hanks 液，并用 5ml 预温至 37 ℃的细胞培养液洗涤尼龙毛柱。小心将细胞悬液加入尼龙毛柱中，待细胞悬液全部进入尼龙毛柱后，立即加 0.2ml 细胞培养液，夹住塑料管。

3． 在 37 ℃ 5 ％ CO₂ 的饱和水汽二氧化碳培养箱中静置 1 小时。用 5ml 预温至 37 ℃的细胞培养液洗脱细胞。洗脱液中含有纯的 T 细胞。再用 5ml 预温至 37 ℃的细胞培养液洗涤尼龙毛柱，洗净不粘附的细胞。

4． 加入 0.5ml 细胞培养液，夹住塑料管，将尼龙毛柱置冰箱中冷却。用 4 ℃预冷的细胞培养液分 3 ～ 4 次洗脱尼龙毛柱，每次 0.5ml 。可先夹住塑料管，用玻璃棒或金属丝反复挤压尼龙毛以利粘附细胞脱落，然后再洗脱。洗脱液中含有大量 B 细胞。离心 1000 × g 10 分钟，去上清液，用细胞培养液同样洗涤细胞 1 次。计数细胞，用细胞培养液将细胞配成适当浓度。