分子生物学实验室常用仪器使用方法与保养

 

分子生物学操作中会涉及一系列仪器，使用不当导致实验失败、减少仪器使用寿命或损坏仪器。因此在进行操作前细致地了解各种仪器的使用方法及注意事项，是使后继实验事半功倍的一个必要准备。
 
冷冻离心机
低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中，都离不开低温离心技术，因此低温冷冻离心机已成为分子生物学研究中必需的重要工具。
使用方法：
1.离心机应放置在水平坚固的地板或平台上，并力求使机器处于水平位置以免离心时造成机器震动。
2.打开电源开关，按要求装上所需的转头，将预先以托盘天平平衡好的样品放置于转头样品架上（离心筒须与样品同时平衡），关闭机盖。
3.按功能选择键，设置各项要求：温度、速度、时间、加速度及减速度，带电脑控制的机器还需按储存键，以便记忆输入的各项信息。
4.按启动键，离心机将执行上述参数进行运作，到预定时间自动关机。
5.待离心机完全停止转动后打开机盖，取出离心样品，用柔软干净的布擦净转头和机腔内壁，待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。
注意事项：
1.机体应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配，并要求有良好的接地线。
2.开机前应检查转头安装是否牢固，机腔有无异物掉入。
3.样品应预先平衡，使用离心筒离心时离心筒与样品应同时平衡。
4.挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏，以免腐蚀机腔或造成事故。
5.擦拭离心机腔时动作要轻，以免损坏机腔内温度感应器。
6.每次操作完毕应作好使用情况记录，并定期对机器各项性能进行检修。
7.离心过程中若发现异常现象，应立即关闭电源，报请有关技术人员检修。
附：相对离心力与每分钟转速的换算
离心机的转速，在以前实验资料中一般以每分钟多少转来表示。由于离心力不仅为转速函数，亦为离心半径的函数，即转速相同时，离心半径越长，产生的离心力越大。因此仅以转速表达离心力是不够科学的，近年来主张用相对离心力（RCF）来表示比较合理。现在国际资料中，已改用相对离心力来表示。
两者的互换公式如下：

PCR扩增仪:
目前各公司提供的PCR仪操作方法各有不同，按其操作说明进行操作。
值得提出的是，在使用一定时期后，样品孔的实际温度与仪器显示温度有时会有较大差异，应当请厂商的技术支持人员校对仪器的各项性能。
 
数字式酸度计：
一、 准备工作
1.仪器应平放在符合使用环境的工作台上，依视觉角度支起支架。
3.pH值的定位测量法：
（一）二点定位法（高精度测量方法）
(1)    连接好电极线路，将参比电极及活化满24h以上清洁的PH电极移入第一标准缓冲液pH1中（例pH1=4.00），待仪器响应稳定后，调节定位旋钮至仪器显示为“0.00”；
(2)    将电级系统从第1种标准液中取出，用去离子水冲洗干净后以滤纸吸干电级表面水份，移入第2种标准液（例pH2=9.18）中，仪器响应稳定后，调节斜率旋钮，使仪器显示为（△pH=pH1-pH2=9.18-4.00=5.18）此后斜率旋钮不可再动，除非更换电极系统；
(3)    斜率调节完成后，重新调节定位旋钮，使仪器显示第2种标准液的实际pH值（9.18），至此2点定位结束；
(4)    将电极从第2种标准液中取出冲洗、吸干后移入待测溶液中，仪器响应稳定后显示的数值即为待测溶液的pH值。
（二）一点定位法（粗略测量法）
(1)    将温度补偿旋钮调至溶液温度值；
(2)    向左将斜率补偿旋钮旋转至头；
(3)    将电级系统移入标准液中（一点法仅用一种标准液，如pH=4.00时），调节定位旋钮使仪器显示“4.00”；
(4)    取出电级冲洗吸干水分后移至待测溶液中，仪器响应稳定后显示的数值即为待测溶液的pH值。
三、温度的测量
1.将功能选择拨至温度档。
2.将温度探头插入插孔，并将温度探头置于环境条件或溶液中，仪器响应稳定后仪器显示值即为环境条件或溶液温度值。
四、注意事项
1.认真做好仪器使用前准备工作。
2.仪器通电后或测量过程中出现显示不稳或乱跳现象，应切断电源进行检查，如电压、预热时间及电极系统等是否正常。
3.使用不同电极应注意排除离子的干扰，选择好盐桥，必要时应使用离子强度固定剂。
4.电极系统从第1种溶液取出移入第2种溶液之前，须用去离子水或双蒸水清洗干净，再用滤纸吸干表面水分，以免影响测定结果的准确性。
5.仪器应存放于干燥、清洁无腐蚀的场所，每次测量结束后应关闭电源，退出电极及温度探头妥善保存。玻璃电极清洗后可浸于去离子水待用（注意水面不得低于玻璃球泡），甘汞电极清洁后套上橡皮帽置于配套盒中保存，当甘汞电极内充液泄漏或不饱和及盐桥中断时，应及时补充饱和内充液。
6.该类仪器均采用大规模集成电路，输入阻值较高，在对仪器内部进行任何零部件修理焊接时，应使用45W以下有良好地线的烙铁，无接地线烙铁应拨下电源插头焊接。
 
分光光度计
不同物质对不同波长入射光的吸收程度各不相同，从而形成特征性的吸收光谱。分光光度法不仅适应于可见光区，同时还可扩展至紫外光区及红外光区，因此给科研实验带来了极大方便。下面重点介绍分光光度计的使用及注意事项。
使用规则
1.接通稳压器电源，待稳压器输出电压稳定至200V后打开光度计电源，仪器自动进入初始化。
2.初始化约需时10 min，内容包括：①寻找零级光；②建立基线；③最后当显示器指示××nm时，，表明仪器完成初始化程序，可进入检测状态。
3.按要求输入各项参数，选择相应比色杯（玻璃或石英），将空白管、标准管及待测管依次放入比色皿架内，关上比色池盖。
4.以空白管自动调零。
5.试样槽依次移至样品位置，待数据显示稳定后按“START/STOP”键，打印机自动打印所测数据，重复上述步骤，直到所有样品检测完毕。
6.检测结束后应及时取出比色杯，并清洗干净放回原处，同时关上仪器电源开关及稳压器电源开关，做好使用情况登记。
注意事项
1.仪器初次使用或使用较长时间（一般为一年），需检查波长准确度，以确保检测结果的可靠性。
2.由于长途运输或室内搬运可能造成光源位置偏移，导致亮电流漂移增大。此时对光源位置进行调整，直至达到有关技术指标为止。若经调整校正后波长准确度、暗电源漂移及亮电流漂移三项关键指标仍未符合要求，则应停止使用，并及时通知有关技术人员检修。
3.每次检测结束后应检查比色池内有否溶液溢出，若有溢出应随时用滤纸吸干，以免引起测量误差或影响仪器使用寿命。
4.仪器每次使用完毕，应于灯室内放置数袋硅胶（或其它干燥剂），以免反射镜受潮霉变或沾污，影响仪器使用，同时盖好防尘罩。
5.仪器室应通常保持洁净干燥，室温以5-35℃为宜，相对温度不得超过85%。有条件者应于室内配备空调机及除湿机，以确保仪器性能稳定。
6.仪器室不得存放酸、碱、挥发性或腐蚀性等物质，以免损坏仪器。
7.仪器长时间不用时，应定时通电预热，每周1次，每次30min，以保证仪器处于良好使用状态。
电泳仪：
电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类，自由界面电泳不需支持物，如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等，这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等，分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳。所谓电泳，是指带电粒子在电场中的运动，不同物质由于所带电荷及分子量的不同，因此在电场中运动速度不同，根据这一特征，应用电泳法便可以对不同物质进行定性或定量分析，或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备，这在临床检验或实验研究中具有极其重要的意义。电泳仪正是基于上述原理设计制造的。下面简单介绍其使用方法及注意事项。
使用方法
1.首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。
2.电泳仪电源开关调至关的位置，电压旋钮转到最小，根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。
3.接通电源，缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止，设定电泳终止时间，此时电泳即开始进行。
4.工作完毕后，应将各旋钮、开关旋至零位或关闭状态，并拨出电泳插头。
注意事项
1.电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。
2.仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
3.由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳时所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
4.在总电流不超过仪器额定电流时（最大电流范围），可以多槽关联使用，但要注意不能超载，否则容易影响仪器寿命。
5.某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时，允许在稳压状态下空载开机，但在稳流状态下必须先接好负载再开机，否则电压表指针将大幅度跳动，容易造成不必要的人为机器损坏。
6.使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外事故。
 
分析天平：
分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要仪器，充分了解仪器性能及熟练掌握其使用方法，是获得可靠分析结果的保证。分析天平的种类很多，有普通分析天平、半自动/全自动加码电光投影阻尼分析天平及电子分析天平等。下面就电子分析天平的使用方法及注意事项做一介绍。
操作方法
1.检查并调整天平至水平位置。
2.事先检查电源电压是否匹配（必要时配置稳压器），按仪器要求通电预热至所需时间。
3.预热足够时间后打开天平开关，天平则自动进行灵敏度及零点调节。待稳定标志显示后，可进行正式称量。
4.称量时将洁净称量瓶或称量纸置于称盘上，关上侧门，轻按一下去皮键，天平将自动校对零点，然后逐渐加入待称物质，直到所需重量为止。
5.被称物质的重量是显示屏左下角出现“→”标志时，显示屏所显示的实际数值。
6.称量结束应及时除去称量瓶（纸），关上侧门，切断电源，并做好使用情况登记。
注意事项
1.天平应放置在牢固平稳水泥台或木台上，室内要求清洁、干燥及较恒定的温度，同时应避免光线直接照射到天平上。
2.称量时应从侧门取放物质，读数时应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动。前门仅在检修或清除残留物质时使用。
3.电子分析天平若长时间不使用，则应定时通电预热，每周一次，每次预热2h，以确保仪器始终处于良好使用状态。
4.天平箱内应放置吸潮剂（如硅胶），当吸潮剂吸水变色，应立即高温烘烤更换，以确保吸湿性能。
5.挥发性、腐蚀性、强酸强碱类物质应盛于带盖称量瓶内称量，防止腐蚀天平。
2.通电前应按工作电源要求检查电压是否符合要求，若电源波动太大，应经交流稳压后再送接仪器。
3.电源应用良好接线，以消除外界干扰，使用搅拌器时，务必使搅拌器外壳与仪器接地端相连。
4.接通仪器电源，经10min预热后，可进行测量工作。
二、pH（酸碱度）测量
1.将功能选择拨至“pH”档，调节定位旋扭，斜率补偿旋钮及温度补偿旋钮显示值应有相应变化。
2.通过仪器温度档测定标准液及待测样品液温度（要求两种液体温度保持一致，以减少测定误差），并用温度补偿旋钮调节至溶液实际温度值。

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