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细菌接种技术及生长表现

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由于细菌 感染而致病的各种标本及带菌者所需检查的各种标本,往往并非单一的细菌,而混有其它非致病菌(人体正常菌群)。因此当对此标本须作出细菌鉴定时,就必须从标本中分离出致病菌,称为细菌分离培养技术。另外,对已得到可疑病菌进行细菌鉴定及菌种保存等培养,称为纯培养接种技术。

(一)平板划线接种法(又称分离培养法)

平板划线接种法为最常用的分离培养细菌的方法,通过平板划线后,可使细菌分散生长,形成单个菌落,有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌。平板分离划线的方法较多,其中以分区划线法与曲线划线法较为常用。其目的都要使细菌呈现单个菌落生长,便于同杂菌菌落鉴别。现只介绍分区划线法。

1、右手持接种环,经火焰灭菌,待凉后,挑取大肠杆菌 (或葡萄球菌)培养物少许。

2、左手斜持琼脂 平板,皿盖留在桌上,于火焰近处将菌涂于琼脂平板上端,来回划线,涂成薄膜(约占平板总表面积的1/10),划线时接种环与平板表面成30~40º角,轻轻接触,以腕力在平板表面行轻快地滑移动作,接种环不应划破培养基表面。

3、烧灼接种环,杀灭环上残留细菌,待冷(是否冷却,可先在培养基边缘处试触,若琼脂溶化,表示未凉,稍等再试),从薄膜处取菌作连续平行划线,约占平板表面1/5左右,再次烧灼接种环,等三次平行划线……以同样方法作第四次,第五次划线,将平板表面划完。

4、划线完毕,盖上平皿盖,底面向上,用标签或腊笔注明菌名检验号码,接种者信息等,置37℃孵育培养24小时后观察结果。

(二)纯培养细菌接种法(斜面培养基接种法:用于培养,保存菌种及其它实验用)

1、取一支斜面培养基及一支纯菌种管,并排倾斜放在左手四指中拇指压住并以手掌支住两试管底部。右手将白金环于火焰上灭菌、冷却。并拔起两试管的棉塞。(勿放置桌上,如棉塞太紧时应预先松动)。

2、试管口部于火焰上往返通过2~3次灭菌,将灭菌白金环伸入有菌试管中,取少量细菌(一般应从斜面底部沾取),然后小心移至准备接种的试管中。

3、接种方法是自管底向上连续平划线,若以保存菌为目的时可自管底上划一粗直线即可。

4、取出接种环,将试管上部再经火焰灭菌,塞好棉塞,接种环灭菌后放回原处。

5、若自平皿培养物中取菌时,只应沾取一个单个菌落。

6、接种菌应作好标记,标明菌种名称,日期等,置37℃温箱中培养,次日观察结果。

液体培养基接种法:用于增菌及鉴定细菌生长特点,如表面生长,沉淀生长,均匀混浊生长等。操作技术基本与上法相同,只是接种时应将沾菌之接种环沿接近液体表面之管内壁轻轻摩擦(勿用力振荡)使细菌混入培养基内,置37℃温箱中培养,次日观察结果。

(三)半固体培养基穿刺培养法

用于保存菌种及间接观察细菌之动力(无动力之细菌仅沿穿刺线生长,清晰可见;有动力的细菌使培养基呈现混浊样,穿刺线甚至难以看出)。

用无菌操作技术,灭菌穿刺针沾取细菌后,垂直刺入半固体培养基中央直达近管底处,再沿原穿刺线抽出即可,置37℃温箱培养,次日观察结果。

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