交叉电泳实验技术
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(二)试剂及材料 1.巴比妥缓冲液 0.05mol/L pH8.2。 2.1%琼脂 糖或优质琼脂 以巴比妥缓冲液配制。 3.pH7.2 PBS液 4.抗原 5.抗体 6.电泳仪、玻板、吸管、滴管等。
(三)操作方法 1.取10cm×10cm的洁净玻板,加1%溶化琼脂糖10ml,铺匀、冷凝。2.打孔,在距阴极端2cm,玻板边2.2cm处,打孔。3.将一定浓度的抗原加入孔内,将抗原孔置于负极,电泳。电压10V/cm,泳动1h。4.电泳结束后,切除非抗原电泳部分的琼脂(约6cm×10cm)。5.取上述1%溶化的琼脂糖10ml放入60℃水浴中,加入预热的适当浓度的血清抗体迅速混匀,铺入切去的琼脂部分。冷却后,用不含抗体琼脂密封切口。 6.将玻板与原电泳方向成90度角放置,使泳动后的抗原凝胶置于负极,电泳。电压为3V/cm,泳动10h~20h。 7.漂洗、染色、脱色、烘干。
(四)结果判定 与标准抗原抗体锥形沉淀线比较,判定和分析结果。
(五)注意事项 1.抗原抗体的最适稀释度必须事先摸索好。2.第二次电泳时间的长短以观察锥形沉淀线的出现为准。电泳时间长短不一,短的可2h即出现。 <center> <center> </center> </center>