更年安片薄层色谱鉴别
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1掌握薄层荧光法的原理及操作。
2掌握薄层色谱法在中药制剂鉴别中的应用。
二.基本原理
更年安片由地黄、泽泻、五味子、制何首乌等药味组成,可利用薄层色谱法对五味子和制何首乌进行鉴别。五味子中主要有效成分为木脂素类,五味子甲素为其主要有效成分之一,可吸收UV光,在硅胶GF254薄层板上形成暗斑,用对照药材和对照品进行对照,可鉴别制剂中五味子;制何首乌中主要有效成分为蒽醌类,主要为大黄素和大黄素甲醚等成分,在可见光下呈黄色,在氨蒸气中斑点呈红色,紫外光(254nm或365nm)照射下产生荧光,在硅胶G薄板上可在可见光、紫外光或显色后检视其斑点,用对照药材和对照品进行对照,可鉴别制剂中何首乌。
三.仪器与试药
1、双槽层析缸、玻璃板10×20cm、三用紫外线分析仪、分析天平(0.01mg)。
2、硅胶G、硅胶GF254。
3、五味子、何首乌(中国药品生物制品检定所)
4、五味子甲素、大黄素、大黄素甲醚(中国药品生物制品检定所)
5、更年安片(市售)
四.操作步骤
(一)五味子鉴别
1.薄层板制备:含0.3%的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板(实验前自制)。
2.供试品溶液制备:取更年安片20片,除去糖衣,研碎,加氯仿30mL,置水浴上加热回流90分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加氯仿1mL使溶解,作为供试品溶液。
3.对照溶液制备:取五味子对照药材0.5g,同上法制成对照药材溶液。取五味子甲素对照品,加氯仿制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。
4.薄层层析 :将薄层板的边缘修饰整齐,作好标记。用毛细管吸取上述三种溶液各4μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以石油醚(30~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15﹕5﹕1)的上层溶液为展开剂,预平衡15~30分钟,展距10cm,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,分别在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(二)何首乌鉴别
1.薄层板制备:含0.5%氢氧化钠溶液的硅胶G板(实验前自制)。
2.供试品溶液制备:取更年安片,除去糖衣,研碎,加甲醇100mL,置水浴中加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水10mL使溶解,再加盐酸2mL,置水浴上加热30分钟,立即冷却,用乙醚20mL分2次提取,合并乙醚提取液,蒸干,残渣加氯仿1mL使溶解,作为供试品溶液。
3.对照溶液的制备:取何首乌对照药材1.5g,同上法制成对照药材溶液。取大黄素、大黄素甲醚对照品,加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液。
4.薄层层析:将薄层板边缘修饰整齐,作好标记。用毛细管吸取上述三种溶液各2μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15﹕2﹕1)为展开剂,预平衡15~30分钟,展距10cm,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,分别在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同的橙色荧光斑点;置氨气中熏后,可见光下检视,斑点变为红色。
五.思考题
硅胶GF254、硅胶G、硅胶H有何不同?实验中如何选择和使用?