DNS（二硝基水杨酸）比色法还原糖含量测定实验

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还原糖的测定实验是生化技术中基础实验，是生化课程中必须掌握的实验操作技术，不明白还原糖的测定原理、测定方法？本文罗列了DNS还原糖含量测定实验原理、步骤、DNS试剂的制备、葡萄糖标准曲线的绘制、样品的测定。

一、实验目的、

DNS(二硝基水杨酸)比色法还原糖含量测定实验实验目的学习和了解还原糖和总糖测定的基本原理、比色法测定还原糖的操作步骤和分光光度计 的使用方法。

二、实验原理

还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类。单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用各种糖的溶解度不同，可将植物 样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。对非还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。

还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子 水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。

三、DNS试剂的制备

将6.3克DNS和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml，即制成3,5-二硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶中备用。

四、葡萄糖标准曲线的绘制

分别取葡萄糖标准液(1mg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于25 ml试管中，分别准确加入DNS试剂2ml，沸水浴加热2min，流水冷却，用水补足到15ml刻度。在540nm波长下测定吸光度。

五、样品的测定

样品液适当稀释，使糖浓度为0.1-1.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度。从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。求出样品中糖含量。

为生化实验报告发愁的同学，不妨看看这篇文章，希望对大家有用。其实最主要的是要熟知DNS还原糖含量测定原理，至于实验试剂配制、操作步骤，这些都大同小异，机械式的操作。只有掌握了原理才能明白为什么要这样做，操作中必须注意的事项。