【推荐】胶体金实验技术FAQ大汇总

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胶体金的特性使其广泛应用于免疫组化 和免疫电镜技术。这里总结了胶体金实验技术中常见的问题及其解析。

1、Q：金标试纸条包被单抗，检测线上包被多抗来检测抗原 是否可行呢，用饱和硫酸铵纯化多抗能达到要求吗?

A：多抗不是很合适，有条件还是多用单抗。确实要用，多抗一般要过纯化柱纯化，以提高抗体的特异性。

2、Q：我需要流速为135s的NC膜，可厂家都是孔径，而且0.45微米的多，请问大家我的应该买多大孔径的?

A：NC膜大都是以每4cm膜水的层析流速多少秒来定义孔径的，根据流速的快慢常用的有90，120，135，180，240等膜，流速时间越大，孔径越小。最普遍使用的是135s的膜，根据你的需要，你直接告诉厂家订135s的膜就可以了。

3、Q：最近我在试验中遇到胶体金在NC膜上层析的速度明显低于水在上面的层析的速度。我用的是whatman的 NC膜，胶体金复溶液用的是1%BSA 和1%蔗糖的PB溶液。不知问题出在何处，才出现该现象。应该如何解决?

A：你所遇到的问题俗称金样分离，其产生原因可能有三方面：

(1)NC膜本身的原因，不同厂家的NC膜组成成分上有一定的差异(主要是聚合物和表面活性剂的量不同)，因此在其他条件不变的情况下尝试其他厂家的膜也许问题就可得到一定的解决;

(2)金释放效果不好，样本流经金垫过程中胶金不能很快的释放也是造成在爬行过程中金样分离的一个很重要的原因;

(3)体系中所用的物质含量不合适，主要是一些亲水性物质，如表面活性剂，亲水性聚合物等等。

针对以上三点原因，可从三方面着手：

(1)尝试不同厂家的膜;

(2)改善胶金标记条件(胶金标记的不合适往往是造成金释放不好的重要原因);

(3)增加体系中亲水性物质的含量。

4、Q：胶体金试纸条上的NC膜要怎么样进行处理,能不能给我提供一个常规的方法?

A：多数情况不需要处理，直接用即可。

5、Q：我做的金标试纸条检测线显色后，慢慢的颜色就会褪掉，放置几个小时后，为什么有时候会褪色?

A：主要是金标记物解离造成的，也就是说在你现在的系统中你的金标记物不稳定。可以尝试加入一些保护性的蛋白或高分子聚合物或糖类，如BSA、Casein、PEG、PVP、蔗糖等。此外缓冲液也可能造成此类现象发生。

6、Q：反应结束后NC膜上总有一条金留下来的红色弧线，是什么原因?

A：金释放的问题，可以加SDS-L改善 。

7、Q：生产上，金标、彩色或者荧光微粒试纸都是如何控制喷膜的均一度的?

A：用点喷的，每个点都有一定的量，用点连结成线，可用Biodot专利的喷膜技术。

8、Q：胶体金试剂检测血清,均有假阳性,是什么原因?

A：可能的原因有：

(1)抗体本身可能存在非特异性

(2)标记的方法上有探讨的地方，是否标记有问题

(3)在标记的过程中你用的封闭液也会导致非特异性反映

(4)原材料的处理不当同样产生这样的后果

(5)水的质量同样重要，是否达到18.2兆，水的离子强度对标记起着志关重要的作用等，想要金标做的很好，必须严格把关，每个环节都会出现这样或者那样的问题，所以出现假阳性是最常见的金标问题

9、Q：浸金，37度烘箱干燥1h,没有抽真空的机器,在干燥的时候，随手用一个塑料手套垫在金标垫下面。有几次由于烘箱里面的风把手套吹的盖在金标垫上，发现盖住的部分胶体金都变成了灰白色，而没有盖住的部分都是正常的紫红色，这是为什么?

A：可以做下面两个试验验证一下：

试验1： 将胶体金垫放在支架上干燥，接触处出现灰白。 怀疑原因为

1)支架上的物质对胶体金标记蛋白造成影响。

2)干燥过程中支架接触处的溶液由液相到固相的过程中发生某种物理变化特性造成最后的颜色变化。

试验2：将支架清洗干净，去除杂质。 现象依然存在，且无好转。在干燥时间内，每隔一段时间就将金垫取出，发现其干燥规律。 基本确定为2)。

解释:由于接触处的空气流动较不接触处少，那么干燥过程中非接触处的水分利于挥发，更快变干。而待干燥的金溶液会向已干燥区域不断迁移，逐渐降低了接触处的金溶液浓度，结果该处颜色变浅直到灰白。

1971年，Faulk和Taylor最早提出金标法概念，并将其应用于免疫电镜技术。现在胶体金技术广泛应用于检测领域。