诱变物质的微核测试

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一、实验原理
微核（micronuclei）简称（MCN）是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的。我们科研工作证实，整条的染色体或好几条也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核 所排斥便形成了第三个核块。已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所以许多人认为可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们很需要有一套高度灵敏，技术简单的测试系统来监视环境的变化。只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。目前国内外不少部门已把“微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
现有的微核测试系统多数是用哺乳动物的骨髓细胞或外周血细胞。缺点是需要一定培养条件与时间、细胞同步化困难、微核率低，一般只在0.2％左右。近年来，有人采用高等植物 花粉孢子利用它们天然的同步性作微核测试材料，取得良好的效果。其中马德修用一种原产于美洲的鸭跖草（Tradescantiapaludosa）（一种叶子狭长形的鸭跖草，目前我国许多地方已经引种），建立四分孢子期微核率计数（MCN-in-Tetrad）的测试系统，是近年来报导的较好系统之一。该系统用低剂量的化学药物处理或辐射处理，其微核率可达10％—67％。
二、实验目的
1.是了解微核测定的方法与意义。
2.为寻找新的测试系统或测定更多的环境因素。
三、实验材料
具有幼嫩花序的鸭跖草（长在温室中的鸭跖草都能现蕾开花，大田栽培花期也很长），剪取花序，每种处理重复3根。
四、实验器具和药品
1.培养液：Knop氏培养液：1000ml蒸馏水+磷酸二氢钾0.25g+硫酸镁0.25g+硝酸钙1.00g+硝酸钾0.25g+微量磷酸铁。
2.处理液：EMS（甲基磺酸乙酯），由培养液配成，50mmol/L，75mmol/L，100mmol/L，150mmol/L等各种处理浓度。NaN3（叠氮钠），由培养液配成，0.2mmol/L0.4mmol/L，0.8mmol/L等各种浓度。
DES（硫酸二乙酯）由培养液配成50mmol/L，100mmol/L，150mmol/L等各种浓度。
3.固定液：3甲醇：1冰醋酸
染色：改良碱性品红液（配法参看实验二十八）
实验用具：30ml三角烧瓶，剪刀，镊子，载玻片，盖玻片等。