细胞骨架的光学显微镜观察

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一、实验目的
　　掌握植物 细胞骨架的光镜标本制作方法。
　　细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞，可使细胞膜 溶解，而细胞骨架系统的蛋白质被保存， 再用考马斯亮兰R250染色，使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。

二、材料、试剂和仪器
　　1． 材料
　　　　新鲜洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞
　　2． 试剂
　　　　1） M缓冲液（pH 7.2）各成分终浓度为：
　　　　　　50mmol/L咪唑(MW:68.08),
　　　　　　50mmol/L KCl(MW:74.55),
　　　　　　0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:203.30),
　　　　　　1mmol/L EGTA(MW:380.36),
　　　　　　0.1mmol/L EDTA -Na2(MW:372.24),
　　　　　　1mmol/L DTT(MW:154.3)
　　　　2） 6mmol/L PBS磷酸缓冲液 （pH 6.5）:
　　　　　　KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3 (见附录3 查磷酸缓冲液的配置)
　　　　3） 0.7% NaCl生理盐水
　　　　4） 1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) 溶于 M-缓冲液
　　　　5） 3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL
　　　　6） 0.2% 考马斯亮蓝R250染液 200mL:
　　　　　　考马斯亮蓝R250 0.2g,
　　　　　　甲醇 46.5mL,
　　　　　　冰乙酸 7mL,
　　　　　　蒸馏水46.5 mL
　　3．仪器
　　　 光学显微镜，镊子，剪刀，试管，表面皿，滴管，载玻片，盖玻片,灭菌牙签，1.5mL离心管，1mL吸头，1mL取液器，酒精灯，染色缸

细胞骨架动画

三、实验程序
　　

四、结果与分析
　　洋葱鳞茎外层与内层的表皮细胞比较（放大倍数10×20）
　　

五、思考题
　　1．光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征？
　　2．请设计一个实验鉴定你所观察到的细胞骨架是哪一类型。