乳鼠心肌的分离方法

准备工作：准备酶，一般80ml，（0.1%的胰酶与0.03%胶原酶2，用HBSS配。准备3个中皿（10cm），每皿到入HBSS备用。一盒冰，数个离心管，一个小烧杯（装酒精用），75%的酒精，两个小玻璃瓶，一个小转子，37度水浴，4-6个玻璃瓶，以及手术器材。

1。取出乳鼠先在酒精的消毒，而后取出心脏。
2。将取出的心脏放入装有HBSS的中皿中，
3。将取出的心脏移到第二个中皿中，漂洗会，再移到第三个中皿中，此过程主要是为了洗掉心脏中的残血。
4。心脏洗完后，移入一个小玻璃瓶后，用小弯剪剪碎心脏，然后加入5ml酶液。同时加入一个小的磁力小转子，此步是为了让心肌在37度水浴的时候能够一边消化一边用磁力搅拌机搅拌。我们一般是将一个大烧杯装上水，再在上面固定一个中皿之类的（用来放小玻璃瓶用）烧杯中放入一个转子，这样直接放在即可加热又可过磁力搅拌同时也可以控制温度的加热块上
5。心肌消化6分钟，吸出上面的消化液，一般第一次我们都不要，因为第一次血细胞比较多。
6。再加入5ml酶，再消化6分钟。
7。同时将消化下来的心肌细胞加入5ml10%进口FBS的DMEM，中和胰酶，同时1000转离心5分钟。
8。将离心完的心肌再用10%DMEM重悬，再1000转离心5min。
9。将离心两次的心肌用DMEM重悬，转入到一个玻璃瓶中。
10。一般我们将心肌消化12次，只数越多的话可以适当增加消化的次数，
11。将心肌细胞转移到中皿中进行差速贴壁，我个人一般每十只用一个中皿进行差数贴壁，贴壁一个半小时到两个小时。
12。贴完后，将中皿中的液体吸出来转移到一个玻璃瓶中，同时用DMEM将中皿冲洗几遍，切记，此步很重要，不然产量会很少。
13，细胞计数后，根据需要种入所需要的皿中，一般小皿中种入undefined10E6个细胞，小小皿中种undefined10E6个细胞，切记在种细胞之前要加入5-溴。
14。细胞培养48小时候即可进行实验了。