分子生物学常用溶液配制
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分子生物学常用溶液配制
一、分子生物学常用贮存液的配制
1 ． 30% 丙烯酰胺溶液
【配制方法】 将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。
【注意】 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2 ． 40% 丙烯酰胺
【配制方法】 把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】 见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3 ．放线菌素 D 溶液
【配制方法】 把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1:10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440 值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。
【注意】 放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4 ． 0.1mol/L 腺苷三磷酸（ ATP ）溶液
【配制方法】 在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃
5 ． 10mol/L 乙酸酰溶液
【配制方法】 把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
6 ． 10% 过硫酸铵溶液
【配制方法】 把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。
7 ． BCIP 溶液
【配制方法】 把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃
8 ． 2×BES 缓冲盐溶液
【配制方法】 用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2 HPO4 ，室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。
9 ． 1mol/L CaCl2 溶液
【配制方法】 在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2 ・6H2 O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】 制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。
10 ． 2.5mol/L CaCl2 溶液
【配制方法】 在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2 ・6H2 O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
11 ． 1mol/L 二硫苏糖醇（ DTT ）溶液
【配制方法】 用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】 DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
12 ．脱氧核苷三磷酸（ dNTP ）溶液
【配制方法】 把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。
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碱基 |
波长（nm） |
消化系数（ε）[L/（mol・cm）] |
|
A |
259 |
1.54×104 |
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G |
253 |
1.37×104 |
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C |
271 |
9.10×103 |
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T |
260 |
7.40×103 |
比色杯光径为1cm时,吸光度=εM
13 ． 0.5mol/l EDTA(pH8.0) 溶液
【配制方法】 在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na・2H2 O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
【注意】 EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。
14．溴化乙锭（ 10mg/ml 溶液）
【配制方法】 在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
【注意】 小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。
15 ． 2×HEPES 缓冲盐溶液
【配制方法】 用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2 PO4 ・2H2 O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。
16 ． IPTG 溶液
【配制方法】 IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
17 ． 1mol/L 乙酸镁溶液
【配制方法】 在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。
18 ． 1mol/L MgCl2 溶液
【配制方法】 在800ml水中溶解203.4g MgCl2 ・6H2 O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】 MgCl2 极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。
19 ． β- 巯基乙醇（ BME ）溶液
【配制方法】 一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】 BME或含有BME的溶液不能高压处理。
20 ． NBT 溶液
【配制方法】 把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。
21 ．酚 / 氯仿溶液
【配制方法】 把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris・HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris・HCl(pH=7.6)液层,保存于4℃。
【注意】 酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
22 ． 10mmol/L 苯甲基磺酰氟（ PMSF ）溶液
【配制方法】 用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】 PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时,20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。
23 ．磷酸盐缓冲溶液（ PBS ）溶液
【配制方法】 在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2 HPO4 和0.24g KH2 PO4 ,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2 (1034×105 Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
24 ． 1mol/L 乙酸钾（ pH=7.5 ）溶液
【配制方法】 将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。
25 ．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
【配制方法】 在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
26 ． 3mol/L 乙酸钠（ pH5.2 和 pH7.0 ）溶液
【配制方法】 在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。
27 ． 5mol/L NaCl 溶液
【配制方法】 在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。
28 ． 10% 十二烷基硫酸钠（ SDS ）溶液
【配制方法】 在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
【注意】 SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。
29 ． 20×SSC 溶液
【配制方法】 在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
30 ． 20×SSPE 溶液
【配制方法】 在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2 PO4 ・H2 O和7.4g EDTA,用NaOH溶液调节pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH）,加水定容至1L,分装后高压灭菌。
31 ． 100% 三氯乙酸溶液
【配制方法】 在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。
32 ． 1mol/L Tris 溶液
【配制方法】 在800ml水中溶解121.91g Tris碱,加入浓HCl调节pH值至所需值。
pHHCl 7.4 70ml 7.6 60ml 8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
【注意】 如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。
Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
33 ． Tris 缓冲盐溶液（ TBS ）（ 25mmol/l Tris ）
【配制方法】 在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105 Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。
34 ． X-gal 溶液
【配制方法】 X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。
二、常用抗生素溶液
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贮存液a |
工作浓度 |
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浓度 |
保存条件 |
严紧型质粒 |
松弛型质粒 |
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氨苄青霉素 |
50mg/ml(溶于水) |
-20℃ |
20μg/ml |
60μg/ml |
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羧苄青霉素 |
50mg/ml(溶于水) |
-20℃ |
20μg/ml |
60μg/ml |
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氯霉素 |
34mg/ml(溶于乙醇) |
-20℃ |
25μg/ml |
170μg/ml |
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卡那霉素 |
10mg/ml(溶于水) |
-20℃ |
10μg/ml |
50μg/ml |
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链霉素 |
10mg/ml(溶于水) |
-20℃ |
10μg/ml |
50μg/ml |
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四环素b |
5mg/ml(溶于乙醇) |
-20℃ |
10μg/ml |
50μg/ml |
a：以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。
三、常用的电泳缓冲液
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缓冲液 |
使用液 |
浓贮存液（每升） |
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Tris-乙酸（TAE） |
1×：0.04mol/L Tris-乙酸 |
50×：242g Tris碱 |
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0.001mol/L EDTA |
57.1ml冰乙酸 |
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100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) |
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Tris-磷酸（TPE） |
1×:0.09mol/L Tris-磷酸 |
10×:10g Tris碱 |
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0.002mol/L EDTA |
15.5ml85%磷酸（1.679g/ml） |
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40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) |
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Tris-硼酸（TBE）a |
0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 |
5×：54g Tris碱 |
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0.001mol/L EDTA |
27.5硼酸 |
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20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) |
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碱性缓冲液b |
1×:50mmol/L NaOH |
1×:5ml 10mol/L NaOH |
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1mmol/L EDTA |
2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) |
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Tris-甘氨酸c |
1×:25mmol/L Tris |
5×:15.1g Tris |
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250mmol/L 甘氨酸 |
94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3） |
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0.1% SDS |
50ml 10% SDS(电泳级) |
