噬菌体滴度的测定的方法

在宿主细胞过量的情况下，噬斑的数量随着噬菌体的增加呈线性增加。由于这个原因，在感染以前，要将噬菌体进行稀释，而不是将宿主细胞稀释。以低MOI(感染重复性)铺板，也可确保每一个噬斑仅包含一个DNA序列。

材料和试剂

1.  微波炉

2.  LB/IPTG/Xgal培养板

3.  LB培养基

4.  顶层琼脂糖凝胶

操作步骤

1.  在5~10 ml LB培养基中接种单个ER2537克隆，振摇孵育直至对数生长中期(OD600~0.5)

2.  在细胞生长时，微波融化顶层琼脂糖凝胶，分装至无菌培养管内，每管3 ml。维持在45 ℃备用。

3.  37 ℃预热LB/IPTG/Xgal培养板，备用。

4.  以LB培养基10倍比稀释噬菌体。

建议稀释范围：对扩增的噬菌体培养上清，10⁸-10¹¹;对未扩增的筛选洗脱液，10¹-10⁴。每次稀释都换用新的加样枪头，最好使用气溶胶阻隔枪头以避免交叉污染。

5.  一旦ER2537培养物长至对数生长中期，分装至微量离心管中，每管200 ml。

6.  将倍比稀释的噬菌体上清加入含细菌培养物的微量离心管中，一支微量离心管中仅加入一种稀释液10 ml，快速涡旋，室温孵育1-5 min。

7.  转移至含有45 ℃顶层琼脂糖凝胶的管中，快速涡旋混匀，立即倾倒至预热的LB/IPTG/Xgal平板上，轻缓摇动平板使顶层胶均匀分布。

8.  冷却平板5 min，37 ℃倒置培养过夜。

9.  噬斑计数以噬斑数为100左右的平皿为准，噬斑数乘以稀释度即可获得每10 ml噬菌体的滴度-噬斑形成单位(pfu)。