荧光原位杂交经验分享

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FISH的特点：操作烦琐，步骤简单。说它操作烦琐，是因为它的操作步骤烦多，每一步又需要相当长的时间，如果自己标探针的话每批标本大约三天时间(买试剂盒只需一天，但价格昂贵)，你说是不是很烦琐?说它步骤简单也是有道理的。FISH其实并没什么神秘之处，只要操作过程仔细，严格按照操作步骤操作，很容易做成功，比PCR 要简单得多，所以说它是步骤简单。

但FISH有一些关键步骤是必需注意的，现就本人的理解说出来与大家分享。

(1)探针的设计。设计探针要根据实验的需要来进行，也就是说你要检测的目的基因决定你的探针设计，如其他人说的“目的基因大概是1.8KB，所转材料是大豆”，我想你可以直接对你的PCR 产物进行地高辛或生物素标记，如果探针较大，则可购买BAC或YAC等克隆进行探针标记。

(2)标本的预处理。标本的处理也关系到最后信号强弱的一个关键，但有些人不注意这些细节，结果造成荧光信号弱，难以分辨。这与预处理不当造成探针 难以到达胞核而杂交难以进行有关。

(3)变性。这一步是FISH关键中的关键。变性包括标本变性和探针 变性，这两个步骤关系到FISH的成败，千万要严格按照操作规程进行，不但如此，特殊标本还要自己摸条件。试想变性不彻底，DNA的双链都没能完全打开，杂交能顺利进行吗?需要注意的就以上这三点，还要唠叨一句：操作荧光抗体时千万要避光，否则将前功尽弃。