白介素2的检测方法
互联网
- 相关专题
(一) 原理
IL-2主要由活化T细胞产生，又为T细胞增殖所必需，故称T细胞生长因子( T Cell Growth factor, TCGF )。IL-2产生的水平反映T细胞的功能，牪;仅是免疫 调节重要的研究对象，而且与临床多种疾病密切相关，CTLL是C57BL/6来源的。犘!鼠杀伤性T淋巴细胞细胞系，由Gills 1977年建立，只有在IL-2存在的培养基中才能生长。因此可作为指示细胞来测定待检样品中IL-2的水平。除CTLL外，丝裂原活化的T淋巴母细胞亦可作为检测IL-2活性的指示细胞。
(二) 方法
可根据实验室条件，选用3H-TdR掺入法和mtt 法
1. 3H-TdR掺入法
IL-2依赖的CTLL用10%FCS RPMI1640洗涤
2次，每次1000rpm, 5min, 除去原培养液中的IL-2
↓
调整活细胞数1×105/ml
↓
96孔平底培养板中每孔加100μl
CTLL悬液(1×104/孔)
↓
加入不同稀释度标准IL-2和待测样品
↓
37℃CO孵箱，培养18～24h
↓
每孔加3H-TdR 0.5μci/50μl
↓ 4-6h
用细胞收集仪收获于玻璃纤维纸上
↓
干燥后，移入液闪瓶中，加入1ml闪烁液，
于液闪仪中测β射线的cpm值
↓
计算(举例)
将标准IL-2不同浓度和待测样品不同稀释度时所获得的cpm值作图，犠]轴采用概率座标(probit)，横座标为Log2稀释倍数。从50%的最高cpm值画一横线，犛k标准和待检斜线的交点，即可计算出待检样品IL-2的活性单位。
如标准品50%最大cpm值时为1u/ml，则待测标本1∶4时为1u/ml,原液则为4μ/ml
