白介素6的检测方法

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白细胞介素6(IL-6)是一种具有多重免疫 调节功能的细胞因子。HTLV-1感染的T淋巴母细胞系、单核细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞以及某些肿瘤细胞均可产生IL-6。某些急性炎症、自身免疫性疾病、淋巴细胞恶性肿瘤(如多发性骨髓瘤)等与病人体内IL-6水平异常增高有关。

㈠ 原理：IL-6在体外能促进B细胞杂交瘤的生长，故又称为杂交瘤生长因子(HGF)。小鼠B细胞杂交瘤7TD1是一株对IL-6依赖的细胞系，由Van Snick 1986年建立，只有在IL-6存在的培养基中才能生长，可以作为指示细胞来测定待检样品中IL-6水平。这类IL-6依赖的小鼠B细胞杂交瘤细胞系还有MH60·BSF2、B9等。

㈡ 方法：主要为3H-TdR掺入法

IL-6依赖的7TD1细胞用无FCS的RPMI1640洗涤2次

每次1000rpm，5min，除去原培养液中的IL-6

↓

用10%FCS-RPMI1640调整活细胞数2×104/ml

↓

96孔平底培养板中每孔加100μl 7TD1悬液(2×103/孔)

↓

加入不同稀释度标准IL-6和待检样品(100μl/孔)

↓

37℃，5%CO2孵箱培养48～72h

↓

每孔加3H-TdR 0.5μCi/50μl

↓10h

用多头细胞收集仪收获于玻璃纤维滤纸上

↓

干燥后移入液闪瓶中，加入1ml闪烁液，于液闪仪中测β射线的cpm值。

计算：

1. 根据cpm值，将能使7TD1细胞3H-TdR掺入cpm值达到最大值50%的IL-6的活性定为1u/ml。

2. 以刺激指数(SI)表示。

㈢ 试剂和器材

1. IL-6依赖的7TD1细胞系

2. 10%FCS-RPMI1640及无FCS的RPMI1640

3. 3H-TdR

4. 标准IL-6

5. PPO,POPOP,二甲苯。

6. 9999型玻璃纤维滤纸。

7. 96孔平底培养板

8. 多头细胞收集仪

9. CO2孵箱

10. β液闪计数仪

㈣ 注意事项：

1. 7TD1细胞洗涤要充分、轻柔，每次弃洗涤上清力求彻底。

2. 避免同位素污染。

3. 加样品时，应从低浓度到高浓度顺序加。

4. 加入3H-TdR最适时机是阴性对照95%以上死亡。

5. 为了增加检测方法的敏感性，可采用新复苏7TD1细胞，或用pH4.0枸椽酸缓冲液处理培养状态的7TD1细胞