血清可溶性白介素的检测方法

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实验目的

1.了解sIL-2R检测的基本原理

2.掌握sIL-2R检测的方法的临床意义。

实验原理

sIL-2R可与细胞膜 表面的受体(IL-2R)竞争结合IL-2，从而成为一种免疫抑制物质。在正常人血清和尿液中可检出低水平的sIL-2R，在某些疾病发生时如器官移植、排斥反应、病毒性感染、恶性肿瘤、创伤和自身免疫病等，sIL-2R在血清和其他体液中的水平增高，且与病情、病程密切相关。本实验采用双抗体夹心法测定原发性肝癌患者血清sIL-2R水平。(夹心法原理参见实验五免疫酶技术)

即： 抗体-——待检血清——抗体——酶标抗抗体——显色

实验用品

1.材料、试剂：待测人血清、IL-2Rα阳性、阴性参考血清、IL-2Rα单抗、兔抗IL-2Rα多克隆抗体、酶结合物(HRP-抗兔IgG)、显色A液、B液、PBS 洗涤液、终止液。

2.器具：吸管、滴管、试管、48孔聚苯乙烯反应板、50μl微量移液器 、恒温箱(370C)

实验方法

预步骤：先用一定浓度的IL-2Rα单抗包被聚苯乙烯板的小孔，4℃冰箱过夜，次日取出甩尽液体备用。

(1)微量移液器 分别加待检血清、阳性对照、阴性对照各50μl于1、2、3孔中，370C水浴箱温育40min。

(2)PBS 液洗板3次，每次3min，甩干。

(3)每孔加入兔抗IL-2Rα多抗，370C水浴箱温育30min。

(4)用PBS液洗板3次，每次3min，甩干

(5)每孔加入酶结合物(HRP-抗兔IgG)2滴，370C水浴箱温育30min。

(6)每孔分别加入显色A液、B液各1滴，混匀。370C水浴箱温育5-10min。

取出肉眼观察结果。如待检血清溶液与阳性对照一致均为蓝色，表明待检血清为sIL-2R阳性血清。