微生物培养需要的基础培养基及特殊培养基的制备

互联网2013-08-27

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微生物基础培养基是人工配制的用于培养微生物的一个混合营养制品，基础培养基中含有维持微生物正常生长的营养物质，此培养基的PH值一般为7.2-7.6。某些特殊的微生物需要的PH可能偏酸或偏碱性。

培养基是根据微生物生长繁殖时对营养物质的需要而配制的营养制品，含有营养物质及适宜的酸碱度，经灭菌后使用。

常用的培养基按用途分为：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基及厌氧培养基。按物理性状分为固体、半固体和液体三种。

实验目的：

了解常用的液体、固体、半固体培养基的成分、制备方法和用途。

实验材料：

牛肉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、0.1mol/lNaOH溶液、酚红指示剂、蒸馏水等。

实验方法：

一、肉汤培养基

1、将鲜牛肉除去筋膜和脂肪，切成小块后用绞肉机绞碎，以每500g碎牛肉加1000ml蒸馏水的比例混合后，置4℃冰箱过夜。

2、次日取出浸泡物倒入容器内煮沸半小时，使肉渣凝固，也可煮沸一小时不经冰箱过夜。

3、用纱布和脱脂棉过滤，除去肉渣，即成肉浸汁。加入1%蛋白胨及0.5%氯化钠，加热溶解并用蒸馏水补足蒸发失去的水分。

4、待冷至50℃左右时，调该溶液的pH至7.4~7.6。校正pH的方法为：①取三支与标准比色管(pH7.6)相同的空比色管，其中一管内盛放蒸馏水5ml;另外两管各加入欲测的肉汤培养基5ml，其中一管内加0.02%酚红指示剂0.25ml(滴定管)，摇匀。②按图2所示排列，举起比色架，对光观察。若滴定管色调较淡或为黄色，即表示培养基偏酸性，需滴加0.1mol/L

NaOH矫正;若呈深红色，即表示偏碱性，应滴加0.1mol/L

HCl矫正;使之与标准比色管色泽相同为止。通常未矫正前的肉汤均呈酸性。记下用去的NaOH(或HCl)溶液量，由此计算出矫正全量培养基时所需NaOH(或HCl)溶液量。

1、酸碱度矫正后，加热煮沸10分钟，用滤纸过滤，补足水分，再调一次pH值。

2、分装肉汤于三角烧瓶或试管，瓶口、管口加棉塞并用纸包扎。

3、置高压灭菌器内103.43Kpa20分钟灭菌备用。

可用市售的牛肉膏代替牛肉，用量为0.3%，其余成分相同(如蛋白胨、氯化钠等)加热溶解，调节pH至7.6左右，煮沸10分钟，补充失水、过滤、分装，灭菌后备用。

二、固体培养基

1、在上述制备的肉汤中加入2-3%的琼脂。琼脂为海藻中提取的一种多糖类物质，本身无营养作用，不能被细菌利用。因其加热到100℃后可溶化，冷却至40℃左右又可凝固，故可作为赋形剂。加热溶化，脱脂棉过滤，补足失水，分装三角烧瓶和试管。

2、置高压灭菌器内103.43Kpa灭菌20分钟，取出后趁热将试管倾斜一定角度放置，待琼脂凝固即成琼脂斜面培养基(图3)。三角烧瓶内培养基冷至50-60℃时在超净台或无菌室内将其倾注于灭菌平皿内(15-20ml)，凝固后即成琼脂平板。

图：琼脂斜面培养基

另外，实际工作中现多使用合成营养琼脂干燥粉末制剂。其方法为：称取41克营养琼脂干燥粉末加入1000ml冷蒸馏水中混合放置10分钟，隔石棉铁丝网微火煮沸使其完全溶解，分装于中试管中(约5~7ml)或三角烧瓶，103.43kPa(121℃)灭菌15分钟，即可备用。

三、半固体培养基

1、操作方法同固体培养基，但琼脂加入量较少，仅0.3-0.5%。

2、分装试管，灭菌后使试管直立，冷凝后即成半固体培养基

在基础培养基中加入少量琼脂即为半固体培养基，加入高浓度的琼脂就成为固体培养基，因此可以说基础培养基是配置特殊培养基的基础，配置任何培养基它的成分里都一定会含有基础培养基的。常见的微生物基础培养基有营养肉汤、蛋白冻水等等。