核酸酶保护分析简介

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核糖核酸酶保护实验

核酸酶保护法是一种用于生物化学和遗传学识别个人在异构RNA的提取样品RNA分子细胞实验室技术。 该技术可以识别一个或多个已知序列的RNA分子，即使在较低的总浓度 。提取的RNA先用混合反义 RNA或DNA探针是相辅相成的利益和互补链的序列或序列杂交 ，形成双链RNA(或DNA-RNA的杂交)。.然后将混合物接触到核糖核酸酶 ，专门切割单链RNA，但有没有活动，对双链RNA。当反应完成运行，容易RNA地区退化很短的低聚物或个别核苷酸 ;尚存的RNA片段，这些增加的反义链互补，从而所载利益的顺序。

Probe探针

探针准备克隆基因在矢量控制下以下的推动者，SP6中，T7或T3的任何利益的一部分。这些发起人是公认的DNA依赖的RNA聚合酶最初从噬菌体特点。探针产生的放射性物质，因为它们是由体外转录使用放射性UTPs的准备。 无补的DNA或RNA的切割核酸。 当探头是一个DNA分子 ， S1核酸当探针是RNA，可用于任何单链核糖核酸。因此，幸存的基因探针补只需通过放射自显影检测。

Uses用途

核酸酶保护实验用地图内含子和5'和3'末端的转录 基因区域。关于原始细胞提取物中存在的靶RNA的量，可以得到定量的结果-如果目标是一个信使RNA ，这可以表明细胞中的基因的转录水平。它们也可以用来检测双链RNA的存在，这可能意味着RNA干扰存在。

Northern 杂交是一种实验室技术，产生类似的信息。它是慢，定量少，但也产生对靶RNA的大小的准确信息。 核酸保护法产品由于销毁非杂交的RNA在核酸消化步骤的初始探头的大小是有限的。