RiboQuant™ Ribonuclease Protection Assay System

互联网2013-08-27

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对于放射性RPA，杂交双链进行变性聚丙酰胺凝胶电泳，用放射自显影或磷屏成像系统检测被保护的探针的信号。

对于非放的RPA，杂交双链经过变性聚丙酰胺凝胶电泳后电转移至尼龙膜，UV照射使被保护的RNA探针与膜交联而固定，再用试剂盒提供的链霉亲和素-辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)和化学发光底物与膜上biotin标记的探针结合，这样，再将膜放入暗盒中暴露于X射线胶片或者用CCD照相机检测杂交探针的信号。

根据适当大小的探针片断的信号强度来定量待测样本中该探针RNA代表的基因表达水平。

用BD RiboQuant™ RNase Protection Assay Systems进行RPA/NPA的实验流程：

RPA――Northern Blot无法企及之优势：

过量的探针与目的基因的杂交在液相环境完成，反应更加完全

RPA比Northern Blot灵敏15-150倍，适合检测各种表达水平之基因

RPA通量高，同时检测多个基因，可评价他们在同一情况下的差异表达

一次RPA就能完成10 多次Northern Blot的工作，加快研究速度

现在BD Pharmingen推出了RPA/NPA系列试剂，利用它们的RNA提取试剂盒、体外转录试剂盒、检测试剂盒，您就能方便地进行基因表达研究。

BD Pharmingen独家特色：

一般来说，探针的合成需要研究者针对自己预研究的基因先合成出一段DNA序列作为模板，再用体外转录试剂盒转录得到需要的RNA探针(如Ambion)

现在，BD Pharmingen推出了多探针RPA预合成模板系列，研发者选择科研中常用的1000多个基因，生产出预制的即用型DNA模板，可以直接用体外转录试剂盒得到相应的探针，不仅大大简化了您的实验，节省了时间，而且优化的预制模板使您的实验结果更加准确和灵敏。

Multi-Probe RPA产品还根据生物学相关性将这些1000多个预制模板进行配套，推出了100多个模板组(set)，每一模板组包含约12个不同基因(包括管家基因L32和GAPDH)的模板，您只需直接用我们的体外转录试剂盒就能方便、快速的合成出您感兴趣的高比活性的反义RNA探针组进行RPA。

RPA set(即：模板组)提供用于下列研究的相关基因模板：

细胞因子、趋化因子、细胞因子受体、细胞表面抗原、凋亡相关、细胞周期调节因子、血管生成相关、细胞毒性、DNA修复、T细胞受体等，适用于人、大鼠、小鼠、猪等物种。还提供多探针RPA的对照RNA。

用BD多探针RPA产品，您就可以……

从一个总RNA样本中同时定量分析多种不同的mRNA

能比较分析同一样本中不同基因的表达水平

通过管家基因，能比较不同样本中某种mRNA的水平

高特异性和灵敏度，准确

适用于从培养细胞和冰冻组织按标准操作提取的总RNA，无需纯化

除放射性RPA外，还有通过非放射性的生物素标记的探针

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